生殖相关肾虚证和补肾中药作用机制的研究进展

岑妍慧，赵飞兰，范 蓉(综述)，何国珍(审校)

(广西中医药大学基础医学院，南宁 530001)

中医根据“肾主生殖”的理论，认为不孕症属于肾虚证，而现代医学认为卵子发育成熟和排出以及精子成熟障碍是临床不孕症的主要原因之一，其发生均受到下丘脑-垂体-生殖腺轴等功能活动的调节。近年大量的实验研究表明,以补肾法为主的方药对生殖腺轴有多水平、多靶点的调节作用。该文就生殖相关的肾虚证的本质和补肾方药对下丘脑-垂体-生殖腺轴的作用机制进行综述。

1 生殖相关肾虚证本质的研究进展

1.1器官组织形态学和功能上的变化 大量的动物实验显示,生殖相关的肾虚证存在着下丘脑-垂体-生殖腺各器官形态学和分泌功能上的变化。陈英华等[1]和谢玲玲等[2]的实验显示，用“房事不节”方法12周后建立的肾虚雄性小鼠的睾丸重量、精子活动率和密度、精子畸形率、母鼠怀孕胚胎数明显下降,精子特异性酶乳酸脱氢酶-X相对活性下降,同时可见曲细精管退化变性、生精上皮显著变薄和出现空泡,生精细胞层数减少明显。包宇等[3]的实验提示,应用氢化可的松建立的肾阳虚雄性小鼠出现体质量下降、血清睾酮水平下降、性腺雄激素受体和mRNA表达下降。杜惠兰等[4]的实验表明，雄激素诱导无排卵肾虚模型雌性大鼠中出现卵巢各级卵泡减少，子宫内膜变薄和腺体减少，卵巢和子宫的雌激素受体和孕激素受体表达水平下降。宋春风等[5-6]的实验显示，醋酸可的松建立的肾阳虚大鼠的下丘脑正中隆起的结构发生明显变化，垂体促肾上腺皮质激素细胞和睾丸细胞出现结构上的改变。李灿东等[7]研究提示肾虚原发性不孕症患者的性激素水平低于正常健康人。钱风雷等[8]研究观察长期大运动量游泳运动所致肾虚大鼠发现其出现低血睾酮以及下丘脑-垂体-性腺轴各器官在光镜和电镜结构上的变化。用雷公藤多苷片造成雌性生殖功能障碍大鼠肾虚模型[9-10]，结果显示雌性小鼠动情周期紊乱、生殖激素水平降低、子宫重量减轻及血清T水平高于正常等。

1.2分子形态学上的改变 随着分子生物学技术的发展，对于生殖相关的肾虚证的本质已经深入到分子水平的研究。宋洁等[11]应用基因芯片的方法对肾阳虚小鼠模型的基因改变，筛选出大量的差异表达基因。张昕贤等[12]采用雷公藤多苷造成的生殖功能减退肾虚模型，显示雷公藤多苷对生殖相关基因的表达有影响。王剑等[13]的实验应用RNA基因芯片技术显示，与正常大鼠相比，去卵巢组大鼠下丘脑基因谱出现多个基因的上调和下调,这些基因与更年期综合征肾阴虚病变密切相关。

2 补肾中药治疗生殖相关肾虚证的研究进展

2.1补肾中药对生殖相关肾虚证动物模型的实验研究 近些年实验显示补肾中药可改善生殖相关肾虚证动物模型的形态结构、分子结构和调节性腺轴的分泌功能。包宇等[3]和李波等[14]的实验显示，淫羊藿苷可以缓解肾阳虚小鼠睾酮及性腺雄激素受体基因的表达下调以及提高肾阳虚小鼠血清的皮质醇和睾酮的水平,并能调控促肾上腺皮质激素释放激素(corticotropin-releasing hormone，CRH)和阿片黑色素促皮质激素原(proopiomelanocortin,POMC)基因表达。郭瑞新等[15]和金红兰等[16]的实验表明，冬虫夏草可提高肾阳虚模型小鼠的生殖功能，并改善睾丸形态等指标。许翠萍等[17]实验显示，肾阳虚小鼠肾上腺组织形态学及超微结构均发生退行性改变，而肾气丸治疗后可使肾阳虚小鼠异常的肾上腺细胞形态得以恢复。陈蓉等[18]应用资冲颗粒直肠给药能促进晚幼大鼠卵泡发育，提高去势小鼠雌激素水平，提示补肾中药促卵泡发育的作用可能与提高雌激素水平有关。张昕贤等[19]的实验显示，雷公藤生殖减退模型小鼠的精子形态、睾丸结构发生改变，同时睾酮、雌二醇、卵泡刺激素、尿人绒毛膜促性腺激素等性激素水平发生改变，而补益肾阳药物可以改善这些改变，起到干预作用，提示中医“肾”蕴含着下丘脑-垂体-性腺部分生殖内分泌的功能。

2.2补肾中药对生殖相关肾虚证的作用机制的实验研究 大量实验表明，补肾中药可通过改变和调控下丘脑-脑垂体-性腺轴的形态结构和基因而发挥作用。

2.2.1补肾中药对下丘脑和脑垂体的调节作用 崔建梅等[20]实验提示，用补肾中药能提高肾阳虚大鼠模型的运动能力,其机制可能与补肾中药提高力竭运动大鼠血清睾酮水平，同时降低大鼠血清皮质醇水平及下丘脑室旁核c-fos的过度表达有关。孙鑫等[21]的实验显示，肾阳虚大鼠下丘脑中蛋白激酶C(protein kinase C，PKC)α与PKCβ2的表达发生改变,模空组大鼠与正常组大鼠存在显著差异，而补肾中药可调节下丘脑中PKCα与PKCβ2的表达，说明PKC的变化可能是肾虚发生的生物学机制之一。蒋淑君等[22]的实验结果显示，肾阳虚动物睾丸组织的钙调蛋白mRNA的表达较正常对照高，说明肾阳虚动物性腺水平的损伤与钙调蛋白mRNA表达升高也有关，补肾中药淫羊藿总黄酮的补肾壮阳调整肾阳虚作用与抑制下丘脑组织钙调蛋白mRNA基因表达可能有密切关系。李波等[14]的实验发现，肾阳虚动物血中皮质醇和睾酮水平降低的同时,下丘脑CRH基因表达量增加,同时垂体POMC基因表达量降低,而补肾中药能改变血中激素水平以及下丘脑CRH基因和垂体POMC基因的表达情况。李嫔等[23]的实验表明，滋阴泻火与益肾填精中药可通过对下丘脑生长抑素基因表达与蛋白表达的调控，调节垂体生长激素的合成及释放。

2.2.2补肾中药对性腺和激素受体的调节作用 补肾中药可促进性腺的内调节因子的分泌和调节性激素及其受体的作用，从而改变性腺的微环境,调节性腺的功能。钱汝红等[24]的实验提示，肾虚动物的雄激素和雄激素受体的水平下降,补肾中药能调节这一过程,显示肾虚时性激素水平影响中枢神经系统功能,脑内雄激素、雄激素mRNA与5-羟色胺神经递质都有相应的变化,补肾中药对中枢神经系统功能有调节作用。王莉等[25]的实验提示，补肾中药可以降低肾虚不孕的动物模型的血雄激素和胰岛素，使胰腺雄激素mRNA表达水平下降，是不孕动物模型出现了排卵。赵锐等[26]应用补肾宁对氢化可的松法复制肾阳虚模型大鼠灌服，结果显示肾阳虚模型大鼠卵巢基质金属蛋白酶9 mRNA表达减弱，可能与卵泡发育异常及排卵障碍有关，补肾宁能够通过增强肾阳虚模型大鼠卵巢基质金属蛋白酶9 mRNA的表达，起到促卵泡发育和促排卵的作用。李沛霖等[27]的实验表明，补肾调冲方可通过调节卵巢颗粒细胞的分泌功能，进而改善卵巢功能。夏天等[28]的实验证实，补肾调冲方在无卵泡刺激素作用的条件下，可直接促进颗粒细胞内胰岛素样生长因子1 mRNA的表达，使细胞内腺苷环磷酸的水平增加,从而调节颗粒细胞增殖与分泌功能。补肾中药可通过调节卵巢性激素的分泌及其受体的水平，而影响卵泡的发育和排卵。陈金秀等[29]的补肾方剂保坤丹丸能显著增加正常大鼠和肾虚小鼠的卵巢重量,可显著提高正常大鼠血清卵泡刺激素、黄体生成素的水平，提示保坤丹丸可能具有微量类雌激素样作用,能促进蛋白合成,提高卵巢和子宫重量；同时保坤丹丸还可以增加肾虚小鼠的自主活动次数、探究次数，说明保坤丹丸的治疗作用不是单纯改善生殖内分泌的功能,可能还参与全身各系统的调节,尤其对中枢神经系统有一定的调节作用。

3 结 语

生殖相关的肾虚证存在着多个器官的组织形态学和功能上的改变，尤其以下丘脑-脑垂体-生殖腺轴系列器官系统组织学形态上的变化和功能上的改变最为显著，对生殖相关的肾虚证的研究目前已经深入到基因和分子水平。基于此，补肾中药对生殖相关的肾虚证的治疗作用机制研究也取得了很大的进展，但仍存在一些不足，特别是对生殖相关的肾虚证动物模型的造模法的客观性仍有待于进一步探讨和商榷。

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