左旋－二脱水伊地醇双甲磺酸酯含药血清对HL－60细胞增殖的影响

杨 斌，杨小叶，曾 春，刘 元，曹 斌

（1.广西医科大学药学院，广西南宁530021；2.广西中医药研究院，广西南宁530022）

左旋－二脱水伊地醇双甲磺酸酯含药血清对HL－60细胞增殖的影响

杨 斌1，杨小叶1，曾 春1，刘 元2，曹 斌2

（1.广西医科大学药学院，广西南宁530021；2.广西中医药研究院，广西南宁530022）

目的探讨左旋－二脱水伊地醇双甲磺酸酯含药血清对HL－60细胞的增殖抑制作用。方法运用CCK－8法测定不同剂量组DMDAI－L的含药血清对HL－60细胞的增殖影响。结果DMDAI－L高中低剂量组含药血清作用HL－60细胞48 h抑制率分别为30.29%、20.72%、13.97%，而阳性组（环磷酰胺）抑制率为18.16%，高、中、低剂量组、阳性对照组与空白对照组比较有显著性差异（P＜0.05）。结论DMDAI－L含药血清能够有效抑制HL－60细胞增殖。

左旋－二脱水伊地醇双甲磺酸酯；HL－60细胞；含药血清

血清药理学是指在动物经口服给药一段时间后采血分离血清，用此含药血清进行体外药理实验的一种实验方法，血清化学主要是研究血清中的化学成分［1］。左旋－二脱水伊地醇双甲磺酸酯（1，6－di－O－（methysulfonyl）－2，3，4，5－Dianhydro－L－iditol，DMDAI－L）属于烷化剂类细胞抑制剂，体外实验研究发现DMDAI－L对急性髓系白血病HL－60细胞有很好的抑制作用并且诱导HL－60细胞凋亡［2，3］。为了进一步探讨经口服途径给药，在体内吸收、生物转化等一系列过程后，血清中含药活性成分对HL－60细胞的生长影响，因此本实验首次通过血清药理学的方法测定通过动物体内吸收及代谢后，DMDAI－L的含药血清对HL－60细胞增殖的影响。

1 材料与方法

1.1 动物 健康的雄性SD大鼠，SPF级，（250± 5）g，广西医科大学动物实验中心提供，试验动物生产许可证SCXK（桂）2009－0002，试验动物使用许可证SCXK（桂）2009－0004。

1.2 药品、试剂与仪器 DMDAI－L由广西中医药研究所刘元副研究员提供；人原髓细胞白血病细胞HL－60购自武汉博士德生物工程研究院；CCK－8试剂盒购置碧云天生物技术研究所；超净工作台（上海浦东跃欣科学仪器厂）；CO2饱和湿度恒温箱（美国Forma scientificlnc公司）；倒置光学显微镜（日本Olympus公司）；高速冷冻低温离心机（美国Thermo scientific公司）。

1.3 DMDAI－L含药血清的制备 参考文献［4］方法略有改变，取SD雄性大鼠15只编号，随机分为五组，每组3只，分别为空白对照组（等体积0.5% CMC－Na的生理盐水）、DMDAI－L高、中、低剂量组（75、50、25 mg·kg－1）、环磷酰胺阳性对照组（25 mg·kg－1），空白对照组和给药组为灌胃给药方式，环磷酰胺腹腔注射，给药前禁食不禁水12 h。给药3 d，每天给药两次，末次给药后2 h用20%的乌拉坦麻醉，腹主动脉取血。室温静置2 h、2 500 rpm离心20 min，吸取上清血清，56℃灭活30 min，0.22 μm过滤除菌，－20℃保存备用。

1.4 DMDAI－L含药血清对HL－60增殖的影响取生长状态良好的HL－60细胞，调整细胞密度为1×105·mL－1接种于96孔板，每孔75μL，预培养6 h后，给予各组含药血清25μL，使血清终浓度为25%，作用48 h后每孔加入CCK－8试剂10 μL，37℃恒温孵育3 h，450 nm酶标仪测定每孔OD值，实验重复3次。

2 实验结果

2.1 倒置显微镜下观察DMDAI－L含药血清对HL－60细胞的形态学改变 空白血清组HL－60细胞状态良好，细胞膜清晰透亮，细胞核大而且明显，大多数细胞呈圆形而且个头均一。给予个剂量组含药血清后作用48 h后，与空白血清对照组比较，细胞增殖有逐渐降低的趋势，特别是高剂量组，细胞形态改变明显，细胞表面皱缩、体积缩小，甚至出现细胞碎片（见图1）。

图1 各组DMDAI－L含药血清作用HL－60细胞48 h形态学的改变（×100）

2.2 DMDAI－L含药血清对HL－60细胞作用48 h的影响 由表1可见，各剂量组的含药血清浓度为25%对HL－60细胞的生长有抑制作用，阳性对照组以及低、中、高剂量组与空白对照组比较均有显著性差异（P＜0.05），表明左旋－二脱水伊地醇双甲磺酸酯含药血清对HL－60细胞作用有明显抑制作用。

表1 各剂量组DMDAI－L含药血清对HL－60细胞作用48 h的抑制率

3 讨论

在体外抗肿瘤实验中［5］，当药物的结构形式与体内的理化性质、作用形式存在差异时，往往药物直接加入离体反应体系的体外实验结果不能客观、真实地反应药物的作用效果，然而血清药理学能在一定程度上弥补了这种缺陷。含药血清所含的药物成分一般经过体内一系列生物转化后真正发挥作用的有效成分，同时包含那些在药物作用下机体所产生的内生性的有效成分，即各种生理活性物质。血清中的有效成分是药物和机体相互作用之后产生的。

有些药物的代谢产物，药效高于母体药物，可直接合成该代谢产物作为药用，从而发现药效更好的药物［6］。例如：抗过敏药氯雷他定（loratadine）在消化道被吸收后，很快脱去乙氧羧基侧链降解为对H受体活性更强的去羧氯雷他定（desloratadine，现已成为第二代新药）［7］。所以通过对药物代谢产物的研究是发现新药的一种途径。本课题组前期研究，提示DMDAI－L体外肝微粒体孵育代谢后结构发生了改变，导致其药效也发生了改变，本实验研究以含药血清的方法证明了DMDAI－L进过体内消化吸收生物转化后，其含药血清仍然对HL－60细胞有抑制作用。据文献分析，迄今含药血清实验方法偏重于药效的研究，没有对血清中的有效成分做进一步的分析，尚缺乏对血清中所有药物成分的定性、定量分析，药物在体内的代谢过程也未知。因此DMDAI－L含药血清中的具体成分值得进一步的研究，同时应该更深入的研究其代谢产物，并对其代谢产物的药效进行研究。

［1］潘卫松，刘美凤，石钺，等.血清药理学、血清化学和中药药代动力学［J］.世界科学技术（中药现代化），2002，4（3）：53－56.

［2］曾春，郭超，石玲东，等.左旋－二脱水伊地醇双甲磺酸酯对HL－60细胞增殖和凋亡的影响［J］.广西医科大学学报，2012，29（2）：183－186.

［3］韦焕英，姚树汉，周龙强，等.左旋－二脱水伊地醇双甲磺酸酯抗肿瘤作用及毒性［J］.癌症，1991，10（3）：193.

［4］王力倩，李仪奎，付胜光.血清药理学方法研究探索［J］.中药药理与临床，1997，13（3）：29－31.

［5］侯华新，黎丹戎，邝晓聪，等.氧化苦参碱对卵巢癌HO8910细胞凋亡影响的血清药理学研究［J］.中国现代应用药学，2006，23（5）：349－352.

［6］陈竞洪，李林，屈英微，等.药物代谢研究在新药研究中的作用［J］.河北工业科技，2005，22（2）：114－116.

［7］Henz BM.The pharmacologic profile of desloratadine：a review［J］.Allergy，2001，56（Suppl65）：7－13.

The effect of serum containing DMDAI－L on human myeloid leukem ia HL－60 cells

YANG Bin1，YANG Xiao-ye1，ZENG Chun1，LIU Yuan2，CAO Bin2
（1.Pharmaceutical College，Guangxi Medical University，Nanning 530021，China；2.Guangxi Institution of Chinese Medicine＆Pharmaceutical Science，Nanning 530022，China）

ObjectiveTo detect the effectof serum containing DMDAI－L on humanmyeloid leukemia HL－60 cells.M ethodsThe proliferation inhibitory effect of serum containing DMDAI－L on human myeloid leukemia HL－60 cells were detected by CCK－8 assay in vitro.ResultsThe high，medium and low－dose groups of serum containing DMDAIL can inhibit the growth of HL－60 cells，the inhibition rate of high，medium and low－dose groups for 48 hours were 30.29%，20.72%，13.97%and cyclophosphamide group was 18.16%，there was significantly difference related to the control group（P＜0.05）.ConclusionThe serum containing DMDAI－L can inhibit the growth of HL－60 cells effectively.

DMDAI－L；HL－60 cells；Medicated serum

R965

A

2095－5375（2014）11－0626－003

广西自然科学基金项目应用基础研究专项基金资助（No.桂科基0991013）

杨斌，男，教授，研究方向：肿瘤药理，E－mail：8160722＠qq.com

曹斌，女，副研究员，研究方向：中药药理学，Tel：13907863117，E－mail：zyyskjb＠163.com