HPLC法测定注射用阿尼芬净的含量

李 娜，冯 中

（鲁南制药集团股份有限公司，山东临沂276000）

HPLC法测定注射用阿尼芬净的含量

李 娜，冯 中

（鲁南制药集团股份有限公司，山东临沂276000）

目的建立测定注射用阿尼芬净含量的高效液相色谱方法。方法采用Welch Ultimate XB－C8（4.6× 250 mm，5μm）色谱柱，以0.03 mol·L－1磷酸氢二钠溶液（以0.5 mol·L－1的氢氧化钠溶液调pH至5.0）－乙腈（70∶30）为流动相，检测波长为227 nm，流速1.0 mL·min－1。结果阿尼芬净浓度在25.13～175.92μg·m L－1浓度范围内线性良好（r＝0.999 8），平均回收率为99.53%，RSD为0.45%。结论本方法专属性强、准确度高，可用于注射用阿尼芬净的质量控制。

高效液相色谱法；注射用阿尼芬净；含量

阿尼芬净（anidulafungin）是第三代棘白菌素类的半合成抗真菌药，属于两性霉素B的衍生物，FDA批准其用于治疗假丝酵母（Candida）引起的某些感染。临床研究显示阿尼芬净在食道念珠菌病、念珠菌血症（candidemia）以及其他包括腹部脓肿和腹膜炎在内的假丝酵母感染的治疗中是安全且有效的，同其他棘白菌素类抗真菌药比较，分布容积更大，抗菌谱更广［1～7］。

目前尚无文献报道阿尼芬净含量测定的方法，笔者经过反复摸索，按照《中国药典》［8］要求，首次建立了测定注射用阿尼芬净含量的反相HPLC法，结果表明，该方法准确可靠，灵敏度高，可用于测定注射用阿尼芬净的含量。

1 仪器与试药

高效液相色谱仪（Agilent 1200型）；十万分之一电子天平（Mettler Toledo XS205），磷酸氢二钠为分析纯，乙腈为色谱纯，水为蒸馏水。阿尼芬净对照品（原料滴定法标定，纯度98.8%，批号：120101）；注射用阿尼芬净由山东新时代药业有限公司提供（批号为120701，120702，120703）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱为Welch Ultimate XB－C8（4.6×250 mm，5μm）；以0.03 mol·L－1磷酸氢二钠溶液（以0.5 mol·L－1的氢氧化钠溶液调pH至5.0）－乙腈（70∶30）为流动相，检测波长为227 nm，进样量20μL。理论板数按阿尼芬净峰计算不低于4 000。

2.2 溶液制备 取本品5瓶，将内容物混合均匀后精密称定（相当于阿尼芬净12.5 mg），加流动相溶解并稀释成含阿尼芬净0.125 mg·mL－1的溶液，作为供试品溶液；另取阿尼芬净对照品适量，精密称定，加流动相稀释成每1 mL中约含阿尼芬净0.125 mg的溶液，作为对照品溶液；另取注射用阿尼芬净空白辅料适量，同法配制作为阴性空白溶液。

2.3 专属性试验 按照上述色谱条件，分别取对照品溶液、供试品溶液和阴性空白溶液各20μL注入高效液相色谱仪，并记录色谱图，HPLC图谱见图1。试验结果表明：按阿尼芬净峰计算理论板数为10 324；空白辅料对本品的含量测定未见干扰，说明本法专属性较好。

图1 注射用阿尼芬净含量测定的HPLC色谱图

2.4 线性与范围试验 精密称取阿尼芬净对照品63.59 mg（约含阿尼芬净62.83 mg），置50 mL量瓶中，加流动相溶解并定容至刻度，摇匀后作为对照品储备液；精密量取上述储备液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4mL，分别置10 mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，精密量取20μL，注入液相色谱仪，记录色谱图。以浓度C（μg·mL－1）对主峰峰面积A进行线性回归，得线性方程为：A＝16.346C＋4.411 9（r＝0.999 8）。结果表明阿尼芬净含量在25.13～175.92μg·mL－1范围内时线性关系良好。

2.5 精密度试验 分别精密量取线性与范围试验项下的对照品储备液0.8、1.0和1.2 mL，分别置10 mL量瓶中，用流动相稀释制成浓度分别为100.53（80%）、125.66（100%）和150.79μg·mL－1（120%）的溶液，各3份，分别精密量取20μL注入液相色谱仪，记录色谱图，以峰面积计算精密度RSD分别为0.32%、0.13%、0.26%。

2.6 稳定性试验 分别配制供试品溶液与对照品溶液适量，在配制后0、1、2、4、6、8 h取样，依法测定并记录阿尼芬净峰面积，计算相对标准偏差。结果表明供试品溶液与对照品溶液峰面积的RSD分别为0.10%和0.08%，说明阿尼芬净溶液在8 h内稳定性良好。

2.7 回收率试验 精密称取阿尼芬净对照品10.12、 12.65和15.18 mg和空白辅料各3份，分别置于100 mL容量瓶中，加流动相溶解并定容至刻度，摇匀后作为供试品溶液。精密称取阿尼芬净对照品12.65 mg，置于100 mL容量瓶中，加流动相制成每1 mL中约含阿尼芬净0.125 mg的溶液，作为对照品溶液；取上述两种溶液，依法测定，按外标法以峰面积计算回收率，平均回收率为99.53%，RSD为0.45%（n＝9）。

2.8 样品测定 取注射用阿尼芬净3批样品，依法测定，含量分别为100.26%、99.59%和99.30%。

3 讨论

作为一种抗感染药物类全身用抗真菌药物，阿尼芬净不经过肝代谢和肾清除，使联合用药以及肝、肾功能不良患者无需调整剂量成为可能，且用药安全，耐受性好，对治疗念珠菌和霉曲菌引起的严重感染具有广阔的前景［9］。本文建立了测定注射用阿尼芬净含量的方法，经试验，该方法专属性强，精密度良好，准确度高，溶液稳定，可用于注射用阿尼芬净的含量测定。

［1］刘伟，杨庆宇.阿尼芬净与氟康唑治疗白色念珠菌引起念珠菌血症的疗效对比［J］.中国医院药学杂志，2013，33（10）：806－809.

［2］曹国颖，傅得兴.新型棘白菌素类抗真菌药阿尼芬净［J］.中国新药杂志，2005，14（11）：1358－1361.

［3］苗宇，关永霞.4″－正戊氧基－1，1′∶4′，1″－三联苯－4－甲酸的合成［J］.药学研究，2013，32（8）：492－493.

［4］陈頔，曹国颖，傅得兴，等.棘白霉素类抗真菌药的研究进展［J］.中国新药杂志，2007，16（14）：1082－1087.

［5］Verweij PE，Oakley KL，Morrissey J，et al.Efficacy of LY 303366 againstamphotericin B－susceptible and－resistant Aspergillus fumigatus in a murine model of invasive aspergillosis［J］.Antimicrob Agents Chemother，1998，42（4）：873－878.

［6］谢新宇.新型抗真菌药阿尼芬净的研究进展［J］.河北化工，2011，34（5）：33－34，57.

［7］苗宇，关永霞.4″－正戊氧基－1，1′∶4′，1″－三联苯－4－甲酸的合成［J］.药学研究，2013，32（8）：492－493.

［8］国家药典委员会.中华人民共和国药典2010年版（二部）［S］.北京：中国医药科技出版社，2010：附录V D.

［9］曹国颖，傅得兴.新型棘白菌素类抗真菌药阿尼芬净［J］.中国新药杂志，2005，14（11）：1358－1361.

Determ ination of Anidulafungin for Injection by HPLC

LINa，FENG Zhong
（Lunan Pharmaceutical Co.，Ltd.，Linyi276000，China）

ObjectiveTo establish an HPLCmethod for the determination of Anidulafungin for Injection.MethodsA stable HPLCmethod was established，and the chromatography was accomplished on a Welch Ultimate XB－C8（4.6×250 mm，5μm），themobile phase consisted of 0.03 mol·L－1sodium hydrogen phosphate solution（adjust pH to 5.0 by 0.5 mol·L－1sodium hydroxide solution）－acetonitrile（70∶30），the detection wavelength was 227 nm，the flow rate was 1.0 mL·min－1.Resu ltsThe calibration curve was linear in the range of 25.13～175.92μg·mL－1（r＝0.999 8）；The average recovery was 99.53%with corresponding RSD of0.45%.ConclusionThemethod was exclusive of strong，high accuracy，and can be used for the quality control of Anidulafungin for Injection.

HPLC；Anidulafungin for Injection；Content

R927.2

A

2095－5375（2014）11－0633－002

李娜，女，研究方向：药物研发，E-mail：13734352772＠163.com