关于丹参及其制剂高效液相色谱指纹图谱参照物的选择研究概况

张 珺，程月发

（河北联合大学冀唐学院，河北唐山063300）

关于丹参及其制剂高效液相色谱指纹图谱参照物的选择研究概况

张 珺，程月发

（河北联合大学冀唐学院，河北唐山063300）

近年来，国内外学者在丹参及其制剂的高效液相色谱（HPLC）指纹图谱的建立上进行了大量研究。参照物的选择是指纹图谱研究过程中必不可少的内容，在图谱的建立与谱峰鉴别方面具有重要的意义。以丹参、HPLC指纹图谱和参照物为关键词，通过CNKI、万方数据库和Elsevier等专业数据库系统查阅相关文献，有参考价值的文献近40篇，本文综述了近十年来丹参及其制剂的HPLC指纹图谱参照物选择的情况，期望今后能够更好地为丹参HPLC指纹图谱标准化研究提供参考和依据。

丹参；高效液相色谱指纹图谱；参照物

高效液相色谱指纹图谱是针对中药化学成分的多样性与复杂性而提出的有效控制中药材及其制剂质量的一种技术方法，主要用来全面反映中药所含化学成分的种类与数量，进而反映中药的内在质量［1］。而制订指纹图谱就必须设立参照物，参照物是根据中药理论及有关化学和药理资料来确定选择对象，首先应选有对照品提供的君药中的主要有效成分，其次是其他有效成分，再次是大量存在的指标成分，最后才选一定的内标物作为参照物［2］。一般选取原则是选相对含量高并且性质稳定的药效成分的色谱峰作为参照峰，并且所选择的色谱峰应该保留时间适中、峰形对称性好且与相邻色谱峰均达到基线分离。丹参及其制剂中的有效成分主要分为两大类，分别为水溶性的酚酸类成分和脂溶性的二萜醌类成分，其指纹图谱的建立要求尽可能多地反映其中的有效成分，达到全面、系统评价丹参质量的目的［3］，但是各种研究所选择的指纹图谱的参照物并不一致。鉴于现版药典中所规定的评价丹参及其制剂质量的指标成分——丹酚酸B在提取过程中易分解，目前较多研究则选取非药典指标成分，例如原儿茶醛或隐丹参酮作为参照物。另外，由于指纹图谱评价方法的不断改进，采用双参照物的方法也将成为趋势。以丹参、HPLC指纹图谱和参照物为关键词，通过

CNKI、万方数据库和Elsevier等专业数据库系统查阅相关文献，本文总结了近十年来关于丹参及其制剂指纹图谱研究的参照物的选择，以期为丹参及其制剂指纹图谱的标准化研究提供参考依据。

1 丹参及其制剂HPLC指纹图谱参照物选择的类别与依据

目前丹参及其制剂HPLC指纹图谱的研究中，关于参照物的选择上主要有以下几类：

1.1 选择药典质量标准规定的丹参活性成分作为指纹图谱的参照物 《中国药典》2010年版（一部）规定评价丹参药材质量的定量指标是丹参酮ⅡA和丹酚酸B，丹参片、复方丹参片和复方丹参颗粒等制剂品种也是以丹参酮ⅡA和丹酚酸B作为含量控制指标，而复方丹参滴丸以丹参素的含量为指标［4］。由此，相关文献中大多采用这些指标成分作为丹参HPLC指纹图谱的参照物。王福刚等［5］建立了白花丹参药材的HPLC指纹图谱，在选定的色谱条件下，通过中药色谱指纹图谱相似度评价系统（2004A）确定14个色谱峰构成白花丹参药材指纹图谱的特征峰，经HPLC图谱比较，丹酚酸B峰较大，为丹参的主要成分之一，故选择丹酚酸B为参照峰。此外，一些关于丹参药材指纹图谱的研究中也大多采用了丹酚酸B作为指纹图谱的参照峰［6～9］。丹参的单方或复方制剂，如丹参片、复方丹参片的指纹图谱建立时也采用丹酚酸B的色谱峰作为参照峰［10～13］。其原因正如孙守国等［14］在建立复方丹参片HPLC指纹图谱时所指出的：经实验比较，丹酚酸B峰较大，为丹参的主要成分之一，且《中国药典》2005年版（一部）丹参项下采用其含量为质量控制指标，故选择丹酚酸B为参照峰，该研究以丹酚酸B为参照物，标示出了20个共有峰。而复方丹参滴丸指纹图谱的研究中则采用药典规定的成分丹参素作为参照峰［4，15］。有一些研究选择了丹参酮ⅡA作为丹参及其制剂指纹图谱研究的参照物［16，17］，原因是丹参酮ⅡA色谱峰在指纹图谱中峰位适中、峰形对称性好，且相对稳定。

1.2 选择非药典规定的丹参水溶性成分作为指纹图谱的参照物 目前，已从丹参中分离出的水溶性化合物主要有丹参素、原儿茶醛、迷迭香酸、迷迭香酸甲酯、紫草酸、咖啡酸、异阿魏酸和丹酚酸A、B、C、D和E等［18］。其中，丹参素和原儿茶醛含量较高，活性较强，是丹参治疗冠心病的主要有效成分［19，20］。而药典规定的指标成分丹酚酸B在药材炮制加工过程性质不稳定，会发生分解反应。因此，在一些关于丹参HPLC指纹图谱的研究，常选用水溶性成分丹参素（丹参素钠）或原儿茶醛作为指纹图谱的参照物。

唐旭利等［21］建立丹参药材水溶性成分HPLC指纹图谱时，指认了丹酚酸B、丹参素钠、原儿茶醛3个特征峰，三者均为丹参水溶性的主要活性成分。在结构上，丹参素钠和丹酚酸B属于α－羟基酚酸类成分，在水溶液中易失去一分子水生成稳定的共轭酚酸结构。原儿茶醛为高度共轭的酚醛类成分，化学性质上较为稳定，在色谱图中分离度好且容易辨认，因此选择了原儿茶醛为丹参药材指纹图谱的参照物。李婧等［22］在建立丹参注射液HPLC指纹图谱时，因原儿茶醛为主要活性成分之一，其积分面积在指纹图谱中所占的比例较大且相对稳定，所以选原儿茶醛作为参照物，并用此法建立了共有指纹图谱，包含20个共有峰，每个峰分离度好，并指认出5种特征水溶性有效成分。此外相当一部分研究也是选用了原儿茶醛作为 HPLC指纹图谱的参照峰［23～28］。

吴志军等［29］则选择了丹参素钠作为丹参药材HPLC指纹图谱的参照峰。而黄敏等［30］在建立山东栽培丹参水溶性成分指纹图谱时选择了出峰时间适中且分离良好的咖啡酸色谱峰作为参照峰。Hu等［31］选择了迷迭香酸为参照物，将其色谱峰作为丹参药材指纹图谱的参比峰。

1.3 选择非药典规定的丹参脂溶性成分作为指纹图谱的参照物 丹参脂溶性成分是丹参的主要有效成分，有较强的生理活性，该类化合物主要有：丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡA、丹参酮ⅡB、隐丹参酮、丹参酸甲酯、丹参新酮、二氢丹参酮Ⅰ及丹参二醇等［18］。其中，除丹参酮ⅡA外，隐丹参酮是丹参治疗冠心病的主要有效成分之一且抗菌活性较强［32］。因此，在研究丹参及其制剂HPLC指纹图谱时，还常选用脂溶性成分隐丹参酮或二氢丹参酮作为指纹图谱的参照物。

宋敏等［33］在研究丹参药材脂溶性成分指纹图谱时就选择了含量较高且与其他色谱峰能达到完全分离的隐丹参酮作为参比峰。王立萍等［34］采用HPLC法研究山东丹参脂溶性成分指纹图谱时也选用了隐丹参酮作为参照物，确定了12个色谱峰作为共有峰，并指认了丹参酮Ⅱ、丹参酮、丹参酮Ⅰ的色谱峰。刘刚等［35］在建立丹参药材乙醇提取物的指纹图谱时，以隐丹参酮为参照物，得出了主要共有峰相对保留时间和相对峰面积，作为丹参指纹图谱相关技术参数。

宋平顺等［36］在建立评价甘肃丹参质量优劣的指纹图谱分析方法是选择的指纹图谱参照峰为二氢丹参酮，因为其色谱峰分离度良好，保留时间居中，峰面积稳定。

1.4 选择丹参的两个活性成分作为参照物 目前，在一些研究中也有选用两个成分作为HPLC指纹图谱的参照物。孙国祥等［37］就以丹酚酸B和原儿茶醛为双参照峰，建立了丹参水溶性成分HPLC数字化指纹图谱的双参照物峰指纹系统标定方法。

1.5 选择内标物作为丹参及其制剂指纹图谱的参照峰 应用此种方法在已公开的文献中相对较少。阎正等［38］采用蒽作为内标物建立了丹参药材的HPLC指纹图谱。

2 总结与展望

综上所述，丹参及其制剂指纹图谱选择的参照物是不尽相同的，并没有统一的标准或规定。其原因在于丹参药材因不同种类或产地及气候等因素的影响而引起的成分间的差异，而不同剂型的制剂则会受原料药及加工炮制方法等因素的影响，故很难用选取一种固定的指纹图谱参照物做研究。而目前大多数研究都是围绕着丹参及其制剂HPLC指纹图谱的建立及应用于质量控制而进行的，关于HPLC指纹图谱的标准化研究相对较少。随着中药指纹图谱技术逐步被收入到国家标准中，指纹图谱标准化将成为今后研究的重点。只有实现指纹图谱的标准化才能使其成为丹参及其制剂质量控制的统一标准。事实上，绝对的标准化很难实现，但对不同厂家的相同或者相似的品种，或者提取工艺相同的提取物，在采用HPLC指纹图谱监控其质量时采用同一参照物，不但具有实际应用价值，而且对于指纹图谱标准化工作也具有十分重要的意义。

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The selection of reference involved in HPLC fingerprint analysis of salvia miltiorrhiza and its preparations

ZHANG Jun，CHENG Yue-fa
（Jitang College of Hebei United University，Tangshan 063300，China）

Many researches in the establishmentof the HPLC fingerprintof salviamiltiorrhiza and its preparations have been finished in recent years.In order to build the accurate fingerprints，the selection of reference should be paid more attention because it played an important role in establishing the HPLC fingerprints and identifying the peaks in the process of these tests.By using salvia miltiorrhiza，HPLC fingerprint and reference as keywords，about40 references were retrieved in CNKI，Wanfang and Elsevier databases.This paper reviewed the referencematerials in the studies of HPLC fingerprintabout salvia miltiorrhiza and its preparations in the past ten years，expected to provide some basic guides for the HPLC fingerprint standardized research in the future.

Salviamiltiorrhiza；HPLC fingerprint；Reference

R284.1

A

2095－5375（2014）11－0664－004

2013年唐山市科学技术研究与发展计划基金项目（No.13130298z）；河北联合大学2012年青年科学研究基金项目（No.z201242）

张珺，女，讲师，研究方向：药物分析，E－mail：zhangjun_2402＠163.com

程月发，男，博士研究生，副教授，研究方向：药理学，Tel：0315－8114108，E－mail：arthurcyf＠163.com