青海高原毛肉兼用半细毛羊血清淀粉酶多态性研究

付弘赟，周佰成

（青海省畜牧总站，西宁 810001）

青海高原毛肉兼用半细毛羊血清淀粉酶多态性研究

付弘赟，周佰成

（青海省畜牧总站，西宁 810001）

采用聚丙烯酰胺凝胶垂直平板电泳法研究了青海高原毛肉兼用半细毛羊的血清淀粉酶（AMY）的多态性。结果表明：青海高原毛肉兼用半细毛羊AMY存在AMY1、AMY2和AMY3三种同工酶，但只有AMY2具有多态性；AMY2同工酶具有显现酶活性的AMY2 A和不显现酶活性的AMY2 O两种表型，其表型分布分别为27.59%和72.41%，以AMY2 O为优势基因型；青海半细毛羊AMY2受1对等位基因AMY2A和AMY2O的支配，其等位基因频率分别为0.149 1和0.850 9，基因杂合度和基因均质度指数分别为0.253 8和0.737 4。

青海高原毛肉兼用半细毛羊；血液淀粉酶；多态性

青海高原毛肉兼用半细毛羊（以下简称青海半细毛羊）是青海省于20世纪80年代培育的绵羊新品种，对青藏高原独特的自然环境具有良好的适应性，抵抗力强，产毛量和净毛率高，生长发育快，肉用性能好，深受广大农牧民喜爱。血清淀粉酶的多态性最早由Ashton［1］在牛中报道的，当时他将其命名为线蛋白，后来才证实它是一种α淀粉酶［2］。此后，佐佐木清纲［3］证实绵羊的AMY存在多态性，有9种电泳表型。Poжkoв及其同事对有蹄动物AMY进行了比较电泳研究，提出了有蹄动物血清AMY有AMY1、AMY2和AMY3三种同工酶。张才骏等［4］的研究也证实，绵羊AMY存在有AMY1、AMY2和AMY3三种同工酶，其中只有AMY2同工酶具有多态性，而且受AMYA和AMYO一对等位基因的控制。有关青海半细毛羊AMY多态性的研究报道甚少。鉴此，研究青海半细毛羊AMY多态性，为青海半细毛羊的遗传特性、品种选育、品种改良等方面提供依据。

1 材料与方法

1.1 试验动物

选择29只青海省海晏县哈勒景乡牧民自繁的成年青海高原毛肉兼用半细毛羊（全部临床健康）作为试验动物，终年放牧饲养，冬季给予适量的草料补饲。

1.2 血样采集及处理

出牧前从试验羊颈静脉采取非抗凝血5 mL，立即送实验室，3 000 r/min离心10 min，分离血清，并保存备用。

1.3 电泳

按胡能书等［5］记载的聚丙烯酰胺凝胶垂直平板电泳法分离所有试验羊的AMY同工酶酶谱，同一样本进行两次电泳，分别用加钙和不加钙的两种pH值为5.0，浓度0.15 mmol/L的醋酸-醋酸钠缓冲液孵育。AMY同工酶谱分析根据区带泳动速度、酶活性显现与否、钙离子的影响，参考张才骏等［4，6］的记载命名AMY同工酶、判定表型和分析酶谱。

1.4 数据分析

根据试验数据计算基因频率，根据AMY1、AMY2电泳变异体受显隐性等位基因控制的假设，由所显示的电泳表型直接推断基因型，计算基因频率。

基因杂合度：

式中Pi为某一位点第i个等位基因频率。

基因均质度指数：

式中n为等位基因数，P1，P2，…，Pn为基因频率。

有效等位基因数：

式中Pi为某一位点第i个等位基因频率。

2 结果

2.1 同工酶酶谱

被检羊的血清经电泳分离出AMY1、AMY2和AMY3三种表型，即AMY1的泳动速度最快，全部试验羊都显现一条酶活性区带（见图1）；AMY2在没有钙离子的孵育液中不显现酶活性，在含有钙离子的孵育液中，8只试验羊显现酶活性区带，而其余21只不显现酶活性（见图2）。

图2 青海高原毛肉兼用半细毛羊AMY2电泳图谱

2.2 基因型频率、基因频率

被检青海高原毛肉兼用半细毛羊AMY基因型频率、基因频率见表1。

表1 青海半细毛羊AMY基因型频率、基因频率、基因杂合度和基因均质度指数

3 讨论

1）由试验结果可见，青海半细毛羊血清AMY存在AMY1、AMY2和AMY3三种同工酶，AMY2同工酶只在加钙的孵育液中显现酶活性，AMY1和AMY3同工酶只有一条酶活性区带而呈单态，AMY2同工酶具有显现酶活性的AMY2 A和不显现酶活性的AMY2 O两种表型而表现出多态性，该结果与张才骏等［7-9］、雷良煜［10］对青海欧拉型藏羊、青海细毛羊AMY多态性的研究结果一致。

2）张才骏等［4］通过交配和系谱资料进行分析，证实绵羊AMY2位点受AMY2A和AMY2O一对等位基因的控制，其中AMY2A对AMY2O呈显性，显现酶活性的AMY2A应包括AMY2A/AMY2A和AMY2A/AMY2O两种基因型，而不显现酶活性的AMY2O的表型即为AMY2O/AMY2O型，与本试验结果一致。然而本试验结果与佐佐木清纲利用淀粉凝胶电泳对美利奴羊、萨福克羊和多帕羊等共500只羊的AMY研究中发现有A、B、C、AB、AC、BC、AA、BB、CC九种电泳表型［3］，以及尹镇华等［11］对3个品种150只羊AMY的研究中提出绵羊AMY受AMY1、AMY2、AMY3、AMY4、AMY5和AMY6六个等位基因的控制，存在12种基因型假设的报道均不一致。但是，不论是佐佐木清纲还是尹镇华等都没有通过配种资料分析确定AMY的遗传模式。作者等认为，本试验与上述两项研究结果不同的主要原因是他们均没有通过系谱资料进行后裔测定和分析，而将本应属于受3个基因座等位基因控制的3种AMY同工酶混合在一起分析和命名的结果。此外，因本次试验样本较少，可能某些位点的蛋白多态性没有表现出来。

［1］Ashton G C.A genetic mechanism for thread-protein polymorphism in cattle［J］.Nature，1958，182：65-66.

［2］Ashton G C.Serum amylase（thread protein）polymorphism in cattle［J］. Genetics，1965，51(3)：431-437.

［3］佐佐木清纲.家畜的血液型及其应用［M］.李世安，译.上海：上海科学技术出版社，1982：207-209.

［4］张才骏，张武学，张贞林，等.青海细毛羊血清淀粉酶的多态性研究［J］.中国养羊，1994（4）：22-24.

［5］胡能书，万国贤.同工酶技术及其应用［M］.长沙：湖南科学技术出版社，1985：112-117.

［6］张才骏，李军祥.青海藏羊血清淀粉酶多态性的研究［J］.青海畜牧兽医杂志，1994，24（5）：7-9.

［7］张才骏，李清军，杨殿斌，等.青南藏羊血清酯酶的多态性［J］.中国养羊，1992（4）：31-33.

［8］张才骏，王勇，卢福山.欧拉羊血清粉酶同工酶酶谱的研究［J］.青海畜牧兽医杂志，2007，37（1）：3-5.

［9］张才骏.青海半细毛羊血液生化遗传多态性的研究［J］.青海畜牧兽医杂志，2004，34（1）：3-5.

［10］雷良煜.欧拉型藏绵羊血清淀粉酶的多态性研究［J］.黑龙江畜牧兽医，2013，11（1）：66-67.

［11］尹镇华，谢曼琳，文浴兰，等.绵羊血液蛋白质多态性的研究［C］//中国畜禽遗传育种进展.长沙：湖南科学技术出版社，1993：147-151.

S826.1

A

2095-3887（2014）06-0027-03

10.3969/j.issn.2095-3887.2014.06.007

2014-09-12

青海加什科羊选育技术研究项目（2008-N-115）

付弘赟（1984-），女，畜牧师，硕士研究生。