婴幼儿急性下呼吸道感染呼吸道病毒抗原检测分析

张碧清 李小梅 邵 英 范楚平

湖南省郴州市第一人民医院 423000

急性呼吸道感染是儿童的常见病、多发病。目前已证明，大部分的呼吸道疾病是由细菌外的病原体引起，其中以呼吸道病毒最常见。并且随着病毒的不断变异，新的高致病性病毒还在不断地被发现，给临床工作造成了极大困难。因此呼吸道病毒感染的快速检测对临床及时诊断和疫情报告均有重要意义。本文采用直接免疫荧光法检测常见的七项呼吸道病毒，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 在2013年因急性下呼吸道感染入我院就诊（包括门诊和住院病例）的婴幼儿中随机选取男性及女性患儿各1 000例，年龄1个月～3岁，临床疾病诊断标准参照《诸福棠实用儿科学》第7版［1］，即喉部以下呼吸道，包括气管、支气管、肺部等的急性感染。

1.2 标本采集 于患儿就诊当日或次日取其鼻咽深部刷检物。在患儿安静状态下，用植绒拭子从鼻孔插入，到达鼻咽部来回旋转2～3次后抽出，将拭子放入存有PBS溶液的试管中送检。

1.3 仪器和试剂 D3Ultra DFA Respiratory Virus Screen ＆ID Kit试剂盒，OLYMPUS CX21荧光显微镜。

1.4 标本涂片制备 将存有植绒拭子的标本在漩涡混匀器上混匀后去掉拭子，用2 500r离心弃上清液，洗涤2次后用少量PBS缓冲液调成略混浊的悬液，制作玻片，置干燥机干燥后用预冷的100%丙酮固定。

1.5 判断结果 使用存有单克隆抗体的试剂盒分别检测：呼吸道合胞病毒（RSV）、腺病毒（ADV）、流感病毒A型（IFV－A）、流感病毒B型（IFV－B）、副流感病毒1型（PIV－1）、副流感病毒2型（PIV－2）、副流感病毒3型（PIV－3）。荧光显微镜下每视野找到≥2个绿色荧光细胞即为阳性，否则为阴性。

1.6 统计分析 所有数据采用SPSS19.0统计软件进行分析处理，率的比较采用χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 呼吸道病毒七项检出率 在2 000例送检标本中，检出阳性549例，总检出率27.45%（549／2 000），各种病毒阳性率见表1。其中，RSV阳性率最高，为10.15%（203／2 000），占总阳性例数的36.98%（203／549），其次为PIV－1，阳性率为5.1%（102／2 000），占总阳性例数的18.58%（102／549）。而PIV－3、ADV、IFV－A、PIV－2、IFV－B阳性率分别为4.7%、3.1%、1.65%、1.45%、0.65%。混合感染的阳性率为0.65%。

表1 七项呼吸道病毒感染阳性率的情况

2.2 病毒感染与性别的关系 在呼吸道病毒七项检测 的 阳 性 病 例 中，RSV、ADV、IFV－A、IFV－B、PIV－1、PIV－2感染的婴幼儿中男性与女性感染率的比较，两者均无显著差异（P＞0.05）。PIV－3感染的婴幼儿中男57例（占2.85%），女37例（占1.85%），χ2＝4.465，P＝0.035，两者差异有统计学意义（P＜0.05）。见表2。

表2 七项呼吸道病毒感染在性别中的分布情况

3 讨论

病原体的分离培养常被作为“金标准”，但由于其培养时间长、操作繁琐、技术难度大、阳性率低等缺点，已逐渐被取代［2］，荧光免疫技术已发展了二十多年，是一种快速而准确的方法，直接免疫荧光法特异性达86%，敏感性达95%。且需时较短，标本在送到实验室2h内就可得出结果，而设备仅需荧光显微镜，在普通实验室即可开展［3］，本研究中随机抽取了采用直接免疫荧光法检测呼吸道病毒七项的婴幼儿急性下呼吸道感染者2 000例，阳性率27.45%，所检测的七种呼吸道病毒中RSV的阳性检出率最高，共检测出203例，占阳性病例的36.98%，与钱雄杰、黄凌等的报道相近［4］。其他病毒的阳性检出率由高到低依次为PIV－1、PIV－3、ADV、IFV－A、PIV－2、IFV－B。从此病毒谱中可以看出PIV－1与PIV－3也是婴幼儿急性下呼吸道感染的重要致病原，应引起重视。本研究显示在RSV、ADV、IFV－A、IFV－B、PIV－1、PIV－2感染的下呼吸道婴幼儿中，男女不同性别感染率差异无统计学意义（P＞0.05），而仅PIV－3男57例（占2.85%），女37例（占1.85%），P＜0.05，两者差异有统计学意义，表明男性婴幼儿易感。与章爱莲等报道有差异［5］，可能与观察对象年龄、各地区病毒流行强度、疾病谱构成、病原谱构成不同有关。

综上所述，因小婴儿呼吸系统生理及解剖特点、全身器官及免疫系统发育不成熟，尤其是细胞免疫功能的不完善等因素［6］，导致其易患呼吸道病毒感染。而其高致死率很大程度上是由于病情救治不及时和临床诊断失误等的原因，了解呼吸道感染病原体的检测手段和开展快速检测手段，已成为当务之急［7］，直接免疫荧光法是一种快速、简便、特异性及敏感性高的诊断呼吸道病毒感染的方法。早期进行抗病毒治疗还可以减少抗生素使用和缩短患者住院时间［8］，因此，在急性呼吸道感染患儿中进行直接免疫荧光法检测呼吸道病毒七项具有较大的临床意义，值得推广。

［1］ 胡亚美，江载芳.诸福堂实用儿科学〔M〕.第7版.北京：人民卫生出版社，2002：1163－1199.

［2］ 秦茵茵，吴国锋，秦笙.九项呼吸道联检试剂对多种呼吸道感染病原体检测的临床意义〔J〕.中华生物医学工程杂志，2012，18（2）：124－127.

［3］ 黄蓉，段荣.呼吸道病毒检测方法进展与临床意义〔J〕.实验与检验医学，2009，27（4）：393－395.

［4］ 黄凌，安邦权，周燕明，等.直接免疫荧光法对七种呼吸道病毒检测的临床应用〔J〕.贵州医学，2009，33（5）：422－423.

［5］ 章爱莲，吴鸣，张旭，等.住院儿童常见呼吸道病毒检测结果〔J〕.浙江预防医学，2013，25（4）：62－64.

［6］ 丁小芳，张兵，钟礼立，等.100例重症社区获得性肺炎住院儿童的病毒病原学分析〔J〕.临床儿科杂志，2012，30（9）：857－861.

［7］ 徐军，赵敏，李伯安，等.不明原因呼吸道感染疫情病原学分析〔J〕.解放军医学杂志，2010，35（3）：252－255.

［8］ 钱雄杰，沈昊.急性呼吸道感染患儿呼吸道病毒检测结果临床分析〔J〕.吉林医学，2013，34（19）：3808－3809.