表皮生长因子受体突变在晚期非小细胞肺癌靶向治疗中的临床价值研究

肖 琳 李代强 赵 帅

1.湘雅二医院病理科，湖南长沙 410011；2.长沙市三医院病理科，湖南长沙 410015

表皮生长因子受体突变在晚期非小细胞肺癌靶向治疗中的临床价值研究

肖 琳1李代强1赵 帅2

1.湘雅二医院病理科，湖南长沙 410011；2.长沙市三医院病理科，湖南长沙 410015

目的探讨以表皮生长因子受体 （EGFR）酪氨酸激酶抑制剂getfinibi为代表的靶向治疗晚期非小细胞肺癌（NSCLC）的可行性。方法选取2011年3月—2013年10月32例经铂类治疗方案失败的晚期 NSCLC患者应用getfinibi 250 mg/d治疗，采用RECIST标准评价疗效，并对接受getfinibi治疗的患者的肿瘤组织进行EGFR酪氨酸激酶域基因突变检测。结果32例标本中共检测出12例基因突变。4例为19号染色体缺失突变。8例为21号染色体错义突变，均为L858R变异（T＞G）。经getfinibi治疗后EGFR基因突变组的客观有效率达58.33%，疾病控制率达100.0%，均高于无EGFR基因突变组（分别为10.00%、20.00%）（P＜0.05）。结论getfinibi靶向治疗晚期 NSCLC疗效明显，getfinibi治疗效果明显的患者中EGFR基因突变的发生率高，因此，EGFR酪氨酸激酶域突变检测可作为患者应用getfinibi疗效的一个预测指标。

表皮生长因子受体突变；晚期非小细胞肺癌；靶向治疗

肺癌作为严重的恶性肿瘤，发病率和致死率最高，对人类的生命健康造成了严重的威胁。肺癌中大约80%为非小细胞肺癌(NSCLC)，采取化疗或放疗治疗NSCLC，其效果不明显，必须采取手术治疗，才能取到治愈效果。但只有30%NSCLC患者的手术切除。晚期NSCLC的标准一线治疗是全身化疗，可延长生存时间、改善生活质量。尽管新的化疗药物不断涌现，但无手术机会的晚期NSCLC预后仍然很差[1]。以铂类为基础的联合化疗总体有效率为20%～40%，中位生存期(MST)仅8～11个月，1年存活率30%～40%。因此，对于NSCLC的治疗迫切需要新的方案。为探讨以表皮生长因子受体 （EGFR）酪氨酸激酶抑制剂getfinibi为代表的靶向治疗晚期非小细胞肺癌（NSCLC）的可行性，选取2011年3月—2013年10月32例经铂类治疗方案失败的晚期 NSCLC患者，进行酪氨酸激酶抑制剂为代表的靶向治疗，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取32例经铂类治疗方案失败的晚期NSCLC患者，入选对象均知情同意。在32例晚期 NSCLC患者中，男20例，女12例，年龄在45～72岁之间，平均年龄为(63.16±5.81)岁。所有患者经组织学检查均诊断为局部晚期NSCLC或转移NSCLC，均无法进行手术治疗。入选标准：①参考RECIST标准，患者≥1个可测量病灶；②预计生存期超过3个月者；③在1个月内未接受抗肿瘤治疗者。排除标准：①心、肝、肾功能不全者；②骨髓造血功能缺损者。

1.2 方法

患者口服getfinibi 250 mg/片，1次/d。根据患者病情变化，适当调整剂量，直到患者出现不能耐受的毒性。

1.3 EGFR酪氨酸激酶域基因突变检测

1.3.1 仪器与试剂 仪器为TGL-16G低温高速离心机（上海安亭科学仪器厂生产）与ERICOMP公司生产的PCR仪。试剂为EGFR、APES（美国SIGMA公司生产）、细胞基因组DNA提取试剂盒（上海生物工程股份有限公司提供）、TaqDNApolymerase（大连宝生物工程有限公司提供）、DNA凝胶回收试剂盒 （广州博亚公司提供）。

表1 12例EGFR酪氨酸激酶域基因突变检测结果

表2 EGFR基因突变与未突变组近期客观疗效评价

1.3.2 基因组DNA提取 标本采用10%福尔马林固定，常规石蜡包埋与连续性切片时，每换一个石蜡块时均要彻底清洁切片机。标本切8～10张，切片厚度为10 μm，分别装在2个消毒的l.5 mL EP管中。然后置于组织的EP管离心5 s，加入l mL二甲苯，振荡30 min，以速率为12 000 r/min离心5 min，去上清，重复3～5步。然后加入1 mL 100%乙醇，混匀，以速率为12 000 r/min离心5 min，将乙醇吸出，自然风干，最后采用细胞基因组DNA提取试剂盒提取基因组DNA。

将200 μL TE与400 μL消化缓冲液加到干燥后的标本中，混匀，然后加入蛋白酶K 6～12 μL。以速率为12 000 r/min离心5 min，去上清，并在上清中加入260 μL无水乙醇混匀，然后将液体转移到UNIQ-10柱，以速率为8 000 r/min离心30 s，然后加入50 μL冲洗缓冲液，再离心30 s。将离心管的冲洗缓冲液取出后，离心30 s，转移到新的离心管中。然后在UNIQ-10柱DNA吸附膜中加入50 μL洗脱缓冲液，以速率为12 000 r/min离心5 min，以提取出基因组DNA。

1.4 观察指标

实体瘤近期客观疗效评定标准[2]，近期疗效包括：完全缓解（CR）、部分缓解 （PR）、稳定 （SD）和进展 （PD），以CR+PR计算有效率，以CR+PR+SD计算疾病控制率。

1.5 统计方法

资料均用SPSS18.0统计学软件处理，计数资料采用χ2检验。

2 结果

2.1 EGFR酪氨酸激酶域基因突变检测结果

32例标本中共检测出 12例基因突变。4例为 19号染色体缺失突变。8例为21号染色体错义突变，均为 L858R变异（T＞G）。经 getfinibi治疗后 EGFR基因突变组的客观有效率达58.33%，高于无 EGFR基因突变组的10.00%；疾病控制率达100.00%，高于无 EGFR基因突变组的20.00%（P＜0.05），如表1所示。

2.2 EGFR基因突变及末突变组近期客观疗效

EGFR突变组有效率为58.33%，明显高于无EGFR突变组的10.00%；疾病控制率为100.0%，明显高于无EGFR突变组的20.00%（P＜0.05），见表2。

3 讨论

肿瘤靶向治疗过程中，需要遵循肿瘤进展过程，细胞表面生长因子受体、细胞内信号传导通路中重要酶、蛋白质均可以成为作用靶点[3]。肿瘤细胞分化、周期、凋亡、迁移、浸润、淋巴转移和全身转移等过程的从DNA到蛋白水平的任何亚细胞分子可作为广义的分子靶点。随着特异性靶向治疗的出现，肿瘤的治疗应用方法越来越多，其治疗效果明显优于传统化疗[4]。目前非小细胞肺癌领域中靶向治疗研究比较多的是表皮生长因子受体(epiderma1 growth factor receptor，EGFR)阻断剂和血管内皮生长因子受体(vascular endothelial growth factor receptor，VEGFR)阻断剂。

EGFR作为一种糖蛋白受体，大多存储于哺乳动物的上皮细胞膜。在信号作用控制下，将难以控制细胞的生长。EGFR酪氨酸激酶具有复发率高、存活期短特征，作为肿瘤治疗的重要靶分子。相关研究表明[5]，选择性酶抑制剂可进行阻断酪氨酸激酶活化，抑制表皮生长因子受体激活、细胞凋亡。

在INTACTl中，共1 093例初治晚期NSCLC患者随机进入健择/顺铂(GP)方案+getfinibi 250 mg/d或+getfinibi 500 mg/d或+安慰剂3组治疗。在INTAC他中，共1 037例初治晚期NSCLC患者随机人组，化疗方案为紫杉醇+卡铂 (TP)[6]。研究显示，getfinibi联合 GP/TP方案化疗未见疗效提高或生存期延长。Getfinibi联合化疗组皮疹、腹泻不良反应高于安慰剂联合化疗组，其他化疗常见不良反应3组差异无统计学意义。Ⅲ期多中心临床研究中，在美国以外的国家进行的TALENT研究中，共1 172例未接受过化疗的晚期NSCLC患者，随机应用顺铂/健择方案联合getfinibi 150 mg/d或安慰剂治疗[7]。edotinib联合化疗组中位OS、PFS及1年生存率分别为301 d(95%CI：274～315)、167 d (95%CI：146-183)和41%，安慰剂联合化疗组分别为309 d(95% cI：282～343)、179 d(95%cI：154～202)和42%。getfinibi组与对照组对比，差异无统计学意义。在该次研究中的32例标本，基因突变的检出率为37.50（12/32），EGFR基因突变组的疾病控制率与客观有效率分别为100.00%、58.33%，明显高于无 EGFR基因突变组的20.00%、10.00%，与刘红梅等人[8]的报道相符。由此可见对晚期NSCLC采用getfinibi靶向治疗，治疗效果显著。因此，对于EGFR酪氨酸激酶域突变的检测可以作为患者接受getfinibi治疗效果的预测指标。

[1]赵子影，彭六保，李健和，等.吉非替尼在表皮生长因子受体突变的晚期非小细胞肺癌患者一线化疗中的成本-效果性分析 [J].中国医院药学杂志，2013，22(12)：183-184.

[2]侯晓玮，庄兴俊，宋谦，等.CT引导经皮肺穿刺活检检测晚期非小细胞肺癌表皮生长因子受体基因突变[J].介入放射学杂志，2013，2(8)： 125-128.

[3]仇晓军，姚登福，季斌，等.非小细胞肺癌58例表皮生长因子受体突变状态[J].江苏医药，2013，7(11)：804-806.

[4]孙晓军，李杰.非小细胞肺癌患者血浆表皮生长因子受体基因突变检测及其临床意义[J].中华临床医师杂志，2013，7(9)：2833-2837.

[5]杜艳萍,江兴堂,尹小文,等.表皮生长因子受体基因突变在晚期非小细胞肺癌维持治疗中的作用[J].中国新药杂志,2010（17）:1580-1584.

[6]Govindan R,Page N,Morgensztern D,et al.Changing epidemiology of small-cell lung cancer in the United States over the last 30 years:analysis of the surveillance,epidemiologic,and end results database.Journal of Clinical Oncology，2012，20：631-632.

[7]杜艳萍,江兴堂,尹小文,等.表皮生长因子受体基因突变在晚期非小细胞肺癌维持治疗中的作用[J].中国新药杂志,2010,17(22):1580-1584.

[8]刘红梅.表皮生长因子受体基因突变与晚期非小细胞肺癌的分子靶向治疗[J].南方医科大学学报,2009,29(11):2273-2275.

Study on the Clinical Value of Epidermal Growth Factor Receptor Mutations in the Targeted Therapy for Advanced Non-small Cell Lung Cancer

XIAO Lin1LI Daiqiang1ZHAO Shuai2
1.Department of Pathology,The Second Xiangya Hospital,Changsha,Hunan Province,410011,China;
2.Department of Pathology,The Third Hospital of Changsha,Changsha,Hunan Province,410015,China

ObjectiveTo discuss the feasibility of targeted therapy represented by epidermal growth factor receptor(EGFR)tyrosine kinase inhibitor getfinibi for advanced non-small cell lung cancer(NSCLC).Methods32 cases with advanced NSCLC failed the previous platinum based chemotherapy from March 2011 to October 2013 were selected and treated by getfinibi 250 mg/d. RECIST criteria were used to evaluate the curative effect.And the EGFR tyrosine kinase domain gene mutation in the tumor tissue of the patients with getfinibi treatment was detected.ResultsOf the 32 cases of specimens,there were 12 cases were detected with gene mutations,including 4 cases with chromosome 19 deletion mutation,8 cases with missense mutation of chromosome 21,all were L858R mutations(T＞G).After treatment with getfinibi,the objective response rate of the EGFR gene mutation group reached 58.33%,the disease control rate reached 100.0%,higher than 10.00%,20.00%of the non-EGFR gene mutation group,respectively(P＜0.05).ConclusionThe curative effect of getfinibi targeted therapy on advanced NSCLC is significant.And patients treated by getfinibi with a good effect have high incidence of EGFR gene mutation.Therefore,the EGFR tyrosine kinase domain gene mutation detection can be used as a predictive index for evaluating the curative effect of getfinibi.

Epidermal growth factor receptor mutation;Advanced non-small cell lung cancer;Targeted therapy

R734.2

A

1674-0742（2014）08（b）－0050-03

2014-05-04）

肖琳（1979.9-），女，本科，主治医师，研究方向：活体组织检查和细胞学标本的诊断。