正交试验优选糖网合剂的提取工艺

李琼, 张海先, 王爽, 伍桂友, 曾锐

(西南民族大学民族医药研究院, 四川 成都 610041)

正交试验优选糖网合剂的提取工艺

李琼, 张海先, 王爽, 伍桂友, 曾锐

(西南民族大学民族医药研究院, 四川 成都 610041)

目的：优选糖网合剂的水提工艺. 方法: 采用L9(34)正交试验, 以桂皮醛含量和干膏率为评价指标, 以加水量、煎煮次数和煎煮时间为考察因素, 确定糖网合剂的最佳水提工艺.结果:最佳优化工艺条件为加12倍水, 提取三次, 每次0.5小时.结论:优选出的提取工艺合理可行, 质量可控.

正交试验; 糖网合剂; 提取工艺; 桂皮醛

糖网合剂由生蒲黄、益母草、肉桂等九味药组成, 具有温阳滋肾、活血利水、化瘀散结的功效. 用于增殖期糖尿病视网膜病变(尚未出现视网膜脱离), 糖尿病性黄斑水肿阴阳两虚患者. 该方原为临床经验方, 根据临床用药的需要, 拟制成合剂. 为控制提取工艺, 采用正交试验, 以制剂中肉桂的桂皮醛含量和干膏率为评价指标, 确定最佳水提工艺.

1 仪器与试药

Waters 2695型高效液相色谱仪、Waters 2996型紫外检测器、Odyssil C18色谱柱(4.6mm ×250mm, 5μm)、3Dikma Easy Guard Ⅱ通用HPLC保护柱、ZDHW型调温电热套(北京中兴伟业仪器有限公司)、ESJ200-4型电子天平(沈阳龙腾电子有限公司).

桂皮醛(批号: 110710-201016、供含量测定用, 纯度: 98.6%), 购于中国药品生物制品检定所、肉桂等药材均购于四川新荷花中药饮片股份有限公司、色谱乙腈(瑞典欧森巴克环境化学公司)、乐百氏纯净水(乐百氏(郑州)食品饮料有限公司)、其余所用试剂均为分析纯.

2 方法与结果

2.1 水提正交设计

加水量、煎煮时间、煎煮次数是影响煎煮效果的主要因素. 采用L9(34)正交试验, 根据预试, 确定因素水平,如表1

表1 因素水平表

2.2 评价指标的选择

蒲黄为方中君药, 因其有效成分的溶解性, 适于单独醇提. 而肉桂具有补火助阳、温经通脉的功效[1], 其中

的桂皮醛具有解热镇痛抗炎[2]、对实验性糖尿病大鼠创面成纤维细胞具有增殖作用[3], 故以桂皮醛含量及其干膏率为评价指标.

2.3 样品溶液的准备

按处方比例称取干益母草、肉桂等药材, 共60g, 加鳖甲药渣及其煎液, 共9份. 根据L9(34)正交试验因素水平表回流提取, 滤液合并, 且定容至一定体积.

2.4 干膏率测定

精密吸取各正交样品溶液10ml, 分别置已干燥至恒重的蒸发皿, 样品溶液水浴蒸干, 于105℃干燥3小时,置干燥器中冷却30min, 精密称定, 计算干膏率.

2.5 桂皮醛含量测定

2.5.1 色谱条件

Odyssil C18色谱柱( 4.6mm ×250mm , 5μm); 以乙腈-水(40:60)为流动相[4-5]; 柱温为30℃; 检测波长为290nm; 进样量为20μl.

2.5.2 对照品溶液的制备

精密称取桂皮醛对照品适量, 加甲醇制成浓度为19.47μg/ml的桂皮醛对照品溶液.

2.5.3 供试品溶液的制备

取正交试验各样品溶液1ml, 用甲醇定容至10ml, 滤过, 取续滤液作为供试品溶液.

2.5.4 测定法

精密吸取上述对照品和供试品溶液各20µl, 注入色谱仪, 记录峰面积, 计算桂皮醛含量.

2.6 结果与分析

试验结果采用SPSS 19.0软件进行处理, 结果见表2、表3.

表2 正交试验测定结果

表3 方差分析表

结果分析: 直观分析表明, 煎煮次数>加水量>煎煮时间, 经方差分析, 煎煮次数和加水量对提取有显著影

响, 煎煮时间对提取无显著影响, 故确定提取工艺为A3B3C1, 确定最佳优化工艺条件为加12倍水, 提取三次,每次0.5小时. 根据此条件, 验证3批.

2.7 验证试验

按处方比例称取药材, 总共3份, 按筛选出的工艺进行试验. 测定桂皮醛含量、干膏收率. 结果见表4

表4 验证试验结果

结果: 桂皮醛含量的平均值为18.9995mg/g, RSD为0.70%, 表明3次验证试验结果稳定, 该工艺稳定可行.故确定益母草、肉桂等优选的水提工艺为: 加水煎煮三次, 每次加12倍量水, 每次提取0.5小时.

3 讨论

(1) 本制剂制备过程中涉及肉桂、当归等芳香水的收集, 正交前的单因素考察中, 对肉桂煎液及芳香水中桂皮醛含量进行测定, 结果肉桂药材中, 桂皮醛在芳香水中的转移率为19.93%, 在芳香水煎液中的转移率为8.21%, 说明桂皮醛大部分存在于挥发油中. 故正交时考虑结果的可靠性, 将肉桂及其水提部分药材直接回流提取, 考察桂皮醛含量.

(2) 在进行供试品溶液制备时, 曾试过离心、浓缩、甲醇直接稀释三种方法, 结果甲醇直接稀释效果最好, 离心和浓缩均不同程度的降低桂皮醛含量, 故选择甲醇直接稀释提取液.

(3) 根据优选出的最佳工艺, 进行了三批中试放大生产, 结果稳定可行, 适宜于工业化生产.

[1] 国家药典委员会. 中华人民共和国药典一部[S]. 北京:中国医药科技出版社, 2010.

[2] 马悦颖, 李沧海, 李兰芳, 等. 桂皮醛解热镇痛抗炎作用的实验研究[J]. 中国临床药理学与治疗学, 2006, 11(12): 1336-1339.

[3] 李光善, 李萍, 盛巡, 等. 黄芪多糖、桂皮醛、川芎嗪对实验性糖尿病大鼠创面成纤维细胞增殖作用的影响[J]. 中国中医基础医学杂志, 2004, 04: 20-22.

[4] 王 莉, 郭东, 聂慧生. 正交试验法优选愈骨佳胶囊的提取工艺[J]. 陕西中医, 2012, 33(7): 894-896.

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Study on the optimization extraction process from Tangwang Mixture by orthogonal experimental design

LI Qiong1, ZHANG Hai-xian2, ZENG Rui3
(Ethnic Pharmaceutical Institute of Southwest University, Chengdu 610041, P.R.C.)

Objective:To optimize extraction technology from Tangwang Mixture.Methods:The optimal water extraction process is selected with the orthogonal table L9(34). The contents and yield of cinnamaldehyde are used as the factor level, and the water volume, extraction time and times, as the examine factors.Results:The optimal process conditions are as follows: with 12 times the amount of water, extracted with water for 3 times, and extraction time 0.5h each time.Conclusion:The optimized preparation process is reasonable and feasible, and the quality is controllable.

orthogonal experiment; Tangwang Mixture; extraction process; cinnamaldehyde

R28

A

1003-4271(2014)01-0063-03

10.3969/j.issn.1003-4271.2014.01.13

2013-05-16

曾锐(1976-), 男, 四川德阳人, 副教授, 研究方向: 药物制剂、药物分析及民族药学工作; E-mail:Mackzeng@gmail.com.

课题得到“十二五”科技部支撑计划(项目编号: 2012BAI27B07)的资助.