过氧化物还原酶4在大肠癌组织中的表达及其意义

易 楠，肖明兵，江 枫，倪润洲

（南通大学附属医院消化内科，江苏226001）

过氧化物还原酶4在大肠癌组织中的表达及其意义

易 楠，肖明兵，江 枫，倪润洲

（南通大学附属医院消化内科，江苏226001）

目的：研究过氧化物还原酶4（peroxiredoxin 4，Prx4）在大肠癌组织中的表达及其临床意义。方法：采用免疫组织化学法检测59例手术切除大肠癌及26例癌旁正常组织中Prx4蛋白的表达情况，并分析其与患者临床病理特征的关系。结果：大肠癌组织中Prx4蛋白阳性率明显高于相应的癌旁组织（P<0.05）；Prx4蛋白的表达强度与大肠癌的肿瘤浸润深度、淋巴转移、Dukes分期及生存期均有相关性（P<0.05）。结论：Prx4在大肠癌组织中表达水平高于癌旁正常组织，并与是否伴有淋巴转移、肿瘤浸润深度和Dukes分期有关，提示Prx4与大肠癌的发生发展有关。

大肠癌；过氧化物还原酶4；免疫组织化学法；预后

我国大肠癌发病率近年来每年增加4.2%，5年总体生存率50%～60%，早期大肠癌5年生存率大于90%，而晚期低于10%[1]，因此在无症状人群中进行大肠癌的早期诊断至关重要。Peroxiredoxin蛋白在多数肿瘤中表达上调，与肿瘤的分期、侵袭、复发与预后相关。目前普遍认为Peroxiredoxins蛋白的高表达由肿瘤细胞内高活性氧水平诱导，与其抗凋亡功能有关[2]，甚至有人认为Peroxiredoxin可能是潜在的肿瘤指标。本文选择2004年4月—2008年2月在本院住院的大肠癌患者手术切除组织石蜡标本59例，利用免疫组织化学法检测过氧化物还原酶4 （peroxiredoxin 4，Prx4）在大肠癌组织的表达，并探讨其与大肠癌各临床病理参数之间的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料 大肠癌患者手术切除组织石蜡标本59例，其中26例有癌旁组织。59例中男36例，女23例；年龄：＜69岁29例、≥69岁30例。右半结肠33例，左半结肠及直肠26例。肿瘤直径≤5cm 32例，＞5cm 27例。肿块型27例，溃疡型32例。所有病例均经手术病理证实。病理类型均为腺癌，其中高分化10例，中分化42例，低分化7例。伴有淋巴转移17例，无淋巴转移42例；伴有远处转移7例，无远处转移52例。浸润深度：T1 2例、T2 12例、T3 41例、T4 4例；病理分级：采用常用国际Dukes分期法，A期15例、B期26例、C期14例、D期4例。大肠癌诊断及分期根据2002年国际抗癌联盟（UICC）制定的标准[4]。所有患者随访至2011年6月。

1.2 方法 采用免疫组织化学法进行检测。取所有组织标本蜡块，切片、脱蜡。应用二步法染色试剂盒PV-9003（北京中杉金桥公司）检测Prx4表达。一抗为Prx4兔抗人多克隆抗体（Ab FRONTIER公司）。阴性对照采用PBS替代一抗。结果判断综合考虑染色强度和阳性细胞数。染色强度分数标准：棕褐色3分；棕黄色2分；淡黄色1分；无着色0分。同样物镜下计数阳性细胞数：一个视野内着色细胞>75%计4分；51%～75%计3分；11%～50%计2分；≤10%1分；阴性0分。两项得分相乘：0～3分为阴性表达“-”；满3分为“+”；4分为“++”；5分以上为“+++”。“+～+++”为阳性表达。对大肠癌组织中Prx4的表达与性别、年龄、肿瘤部位、肿瘤直径、病理类型、肿瘤分化程度、有无远处转移等进行相关性研究。免疫组化结果由两位病理科医生采用双盲法进行判定。

1.3 统计学处理 应用SPSS 15.0统计软件对结果进行数据分析，等级资料组间差异性比较采用轶和检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 Prx4在大肠癌组织中的表达 Prx4蛋白表达主要位于胞浆内质网和细胞外基质中，偶见于胞核，随表达强度不同着色可依次表现为淡黄、棕黄至棕褐色不等。26例大肠癌组织中Prx4表达阳性23例，阳性率为88.5%，明显高于癌旁正常组织17例，阳性率65.4%（P＜0.01），且强阳性（++、+++）主要集中在大肠癌组织，而癌旁组织大部分为弱阳性（+）表达（图1）。

图1 Prx4在大肠癌组织中的表达（400×）

2.2 大肠癌组织中Prx4蛋白的表达与临床病理学参数的关系 大肠癌组织中Prx4的表达情况与患者的性别、年龄、肿瘤部位、肿瘤直径、病理类型、肿瘤分化程度、有无远处转移等临床病理参数之间没有明显的相关性（P均＞0.05），而与肿瘤浸润深度、有无淋巴结转移、Dukes分期、3年生存数和5年生存数，差异均有统计学意义（P均<0.05），见表1。

3 讨 论

Prx 4作为Peroxiredoxin家族的成员之一，主要定位于内质网（ER）和细胞外基质[3-4]，Prx 4蛋白在胰腺、肝脏和心脏组织中表达最高，在脑组织和血液粒细胞中表达最低[5]，其除了具有家族共同的抗氧化功能，还具有促进细胞增殖与分化、细胞信号转导和保护其他蛋白被氧化功能。Parkin等[6]提出了全世界人类约20%的癌症是由于感染或炎症疾病导致，例如消化系统中，炎症性肠病可导致大肠癌，慢性胰腺炎可导致胰腺癌，酒精性肝病可导致肝癌[7]，在这些条件下激活的炎症细胞会产生高浓度的各种活性氧。目前普遍认为Prx4蛋白的高表达是肿瘤细胞内高活性氧水平诱导的，与其抗凋亡功能有关[2]。

本次研究利用免疫组织化学方法研究大肠癌及癌旁组织中Prx4蛋白的表达情况，结果发现本组59例大肠癌组织和26例癌旁组织中，Prx4蛋白阳性表达率高于癌旁组织，且强阳性主要集中在大肠癌组织，而癌旁组织大部分为弱阳性表达，提示Prx4蛋白的高表达与大肠癌有关。而分析大肠癌组织中Prx4的表达与临床病理参数间的关系中发现，大肠癌组织中Prx4的表达情况与大肠癌的分化程度、浸润深度、是否合并有淋巴转移及远处转移、Dukes分期等因素都与患者的生存期相关，提示Prx4的表达可能在大肠癌的浸润增殖及淋巴转移中发挥重要作用，Prx4有望成为有潜在应用价值的判断大肠癌预后的指标，为研究大肠癌的药物治疗提供潜在靶点。

表1 大肠癌组织中Prx4蛋白的表达与临床病理学参数的关系

[1]Jemal A，Siegel R，Ward E，et al.Cancer statistics，2008［J］. CA Cancer J Clin，2008，58（2）：71-96.

[2]Lehtonen ST，Markkanen PM，Peltoniemi M，et al.Variable overoxidation of peroxiredoxins in human lung cells in severe oxidative stress［J］.Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol，2005，288（5）：L997-1001.

[3]Haridas V，Ni J，Meager A，et al.TRANK，a novel cytokine that activates NF-kappa B and c-Jun N-terminal kinase［J］. J Immunol，1998，161（1）：1-6.

[4]Tavender TJ，Bulleid NJ.Peroxiredoxin IV protects cells from oxidative stress by removing H2O2 produced during disulphide formation［J］.J Cell Sci，2010，123（Pt 15）：2672-2679.

[5]Jin DY，Chae HZ，Rhee SG，et al.Regulatory role for a novel human thioredoxin peroxidase in NF-kappaB activation［J］.J Biol Chem，1997，272（49）：30952-30961.

[6]Parkin DM.The global health burden of infection-associated cancers in the year 2002［J］.Int J Cancer，2006，118（12）：3030-3044.

[7]Loguercio C，Federico A.Oxidative stress in viral and alcoholic hepatitis［J］.Free Radical Biology and Medicine，2003，34（1）：1-10.

The expression and significance of Peroxiredoxin 4 in colorectal carcinoma

YI Nan,XIAO Mingbing,JIANG Feng,NI Runzhou （
Department of Gastroenterology,Affiliated Hospital of Nantong University,Jiangsu 226001）

Objective:To investigate the expression and clinical significance of Peroxiredoxin 4（Prx4）in human colorectal carcinoma tissues.Methods:The expression of Prx4 protein was detected by immunohistochemical EnVision staining in 59 colorectal carcinoma specimens and 26 cases of adjacent normal tissues.The correlations between Prx4 and clinicopathological parameters such as age，gender，histologicalgrade and metastasis were analyzed.Result: Immunohistochemical results showed that the expression of Prx4 protein was higher in colorectal carcinoma than that in the adjacent tissues（P<0.05）;The expression intensity of Prx4 protein was correlated with invasive depth，lymph node metastasis and Dukes classification in colorectal carcinoma（P<0.05）.Conclusions:The expression of Prx4 was higher in colorectal carcinoma than in the adjacent non-cancerous tissues.The expression level was correlated with invasive depth，lymph node metastasis，Dukes classification and survival time，suggesting that Prx4 might be associated with carcinogenesis and development of colorectal carcinoma.

colorectal carcinoma;peroxiredoxin 4;immunohistochemical;prognosis

R735.3+4

A

2014-08-15

1006-2440（2014）06-0593-03

易楠，女，汉族，江苏南通人，生于1981年8月，硕士，主治医师。研究方向：消化道肿瘤。通信作者：倪润洲，E-mail:nirz@163.com