正交试验法优选除湿口服液制备工艺研究

蒋秀娟 高希梅

1.山东省青州市人民医院药剂科，山东青州 262500;2.北京同仁堂，北京 100010

除湿口服液是我院经验处方，为我院皮肤科根据临床经验用药组方而成，临床使用多年，疗效显著，副作用小，安全可靠。该制剂处方由苦参、车前草、艾叶等组成；功能清热除湿，消肿止痒；主治皮炎、湿疹、瘙痒症等。为了对该处方进行进一步开发，并对其药效学及临床疗效进行研究，首先对该制剂的提取工艺进行了研究。

苦参为本方君药，其主要成分为苦参碱。药理研究表明，苦参碱具有抗炎、止痒、调节免疫功能[1-2]；因此用于治疗湿疹等皮肤疾病的市售药品及医院制剂多将苦参碱作为质量控制的重要指标[3-4]。本制剂为口服液，故本实验以苦参碱含量和干浸膏得率为指标综合评分，应用L9(34)正交试验表进行试验。选定加水量、煎煮时间、煎煮次数、浸泡时间作为考察因素，于2013年6月开始对该制剂的提取制备工艺进行研究，2014年2月完成实验研究，现总结研究结果如下。

1 仪器与试药

日本岛津LC-10AD 高效液相色谱仪；SPD-10A 紫外可见检测器；SIL-10A 自动进样器；C-R7A 数据处理机；Sartorius BP211D型分析天平；TDX 离心机。

苦参碱对照品（批号110805-200306，中国药品生物制品鉴定所）；所用药材：苦参、茯苓、车前草等药材均购自本院中药房。

甲醇为色谱纯，其它试剂均为分析纯。

2 试验方法与结果

2.1 正交试验设计

根据预试验，考虑剂型因素，选定加水量、煎煮时间、煎煮次数、浸泡时间作为考察因素。以苦参碱含量和干浸膏得率为指标综合评分，应用L9(34)正交试验表进行试验。重复试验1 次以计算误差。因素水平安排见表1。

表1 水提工艺因素水平表

2.2 干浸膏得率的测定

精密称取药材9 份，每份126 g，按L9(34)正交表所列实验条件煎煮，合并各次水提液，浓缩定容至100 mL。精密移取10 mL，置于已知重量的蒸发皿中，水浴蒸干后，置烘箱中干燥至恒重，减去皿重，计算干浸膏得率，结果见表2。

表2 水提工艺正交试验结果

2.3 苦参碱的含量测定方法

2.3.1 色谱条件 色谱柱：Diamonsil C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：甲醇-水-氨水（52：45：3）；流速：0.8 mL/min；检测波长：220 nm；柱温：50℃。

2.3.2 线性范围考察 精密称取苦参碱对照品10.20 mg，置于10 mL容量瓶中加甲醇定容，配成1.02 mg/mL 的溶液，取此对照品溶液50 μL，稀释至1mL，即浓度为0.051 mg/mL 的对照品溶液。在上述色谱条件下，分别取对照品溶液10、20、30、40、50 μL 注入液相色谱仪测定峰面积，以进样量为横坐标（X），峰面积为纵坐标（Y），进行线性回归，得回归方程：Y=588712.7X-1254.9，r=0.9999。结果表明：苦参碱在0.51～2.55 μg 内，进样量与峰面积呈现良好的线性关系。

2.3.3 样品供试液的制备 精密量取定容后的水提液10 mL，精密加入浓氨试液2 mL（调节pH 9～11），摇匀，精密加入二氯甲烷30 mL，振摇提取后3000 r/min 离心5 min，精密吸取下层溶液5 mL，于蒸发皿中水浴挥干溶剂，残渣加甲醇溶解并转移至2 mL 容量瓶内定容，摇匀，0.22 μm 滤膜滤过，作为供试品溶液。

2.3.4 测定方法 精密吸取样品供试液20 μL，注入液相色谱仪，测定峰面积，代入回归方程，计算样品中苦参碱含量，结果见表2，方差分析采用SPSS 10.0 软件，结果见表3。

表3 方差分析表

2.4 结果

由表2 的R 值和表3 的F 值可以看出，各因素对实验结果的重要性为C>A>B>D。方差分析结果表明，A、B、C 因素对结果有极显著意义（P＜0.01），D 因素无意义（P>0.05）。最佳水提工艺应该采用A1B3C3D3，即加8 倍量水，浸泡3 h，煎煮4 次，每次2 h。该工艺与正交试验中的3 号试验工艺完全相同，该方案平行2 次的试验中浸膏得率分别为15.75%、16.73%；苦参碱含量分别为1.263 mg/g、1.104 mg/g，均明显高于其它方案的得率。从表2 中影响因素D（浸泡时间）的R 值仅为0.401，远小于其它因素；表3 中因素D 的显著性分析为0.149，P>0.05，说明浸泡时间对结果无明显影响，因此为节省工时，最终确定该制剂的提取工艺为药材不浸泡，直接加8 倍量水，煎煮4 次，每次2 h。

3 讨论

①苦参是中医治疗各种皮肤疾患的常用药材，也是本方君药。本实验采用正交设计以苦参碱和浸膏得率为指标，对水提工艺进行优选。实验结果表明浸泡时间对浸膏得率及苦参碱含量影响不大，分析可能与苦参药材质地较疏松，以及处方药材多为叶类、花草等轻质药材有关[5]。故为生产过程中节约工时及能耗考虑，最终确定药材不浸泡，直接加8 倍量水，煎煮4 次，每次2 h 的最佳提取方案。并在中试研究中以此方案获得合格的中试产品。

②分析表2 数据可见，不同提取工艺条件下测得苦参碱含量0.601～1.263 mg/g，处方中的主要药效指标在优化条件下可以提高1 倍，充分说明对提取工艺筛选的必要性。

③本研究过程中曾试验以药材中苦参碱与氧化苦参碱的总量作为定量指标[6]，但是实验过程中发现因苦参碱与氧化苦参碱在加热过程中存在互相转化，以此综合指标测定结果不稳定，且多数研究文献表明苦参碱是苦参中抗炎、止痒[1-2]的主要药效成分，故最终以苦参碱含量作为测定指标。

④处方中另有车前草等药材也是清热利湿的主要组分，但是因条件所限在本研究中未能对车前草的指标性成分进行测定，在质量标准的建立中应考虑对该药材进行鉴别或定量分析。

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