市售杜仲茶中主要成分含量的测定

摘要：实验确定了京尼平苷酸、桃叶珊瑚苷和芍药苷的质谱和液相的检测方法。绘制出了京尼平苷酸和桃叶珊瑚苷的标准曲线和药时曲线。

关键词：京尼平苷酸；桃叶珊瑚苷；芍药苷

中图分类号： S571.1 文献标识码： A 文章编号： 1674-0432（2014）-02-23-2

杜仲茶具有一定的降压效果，其中京尼平甘酸、桃叶珊瑚苷等成分具有很显著功能活性，而且含量较高。我们就是要建立一套完整的提取、检测方法，为以后的药代动力学研究作理论基础。

1 实验材料

1.1 仪器与试剂

市售杜仲茶，产地为湖南张家界。

正丁醇，J&K Chemical Ltd。

乙醇，J&K Chemical Ltd。

甲醇，J&K Chemical Ltd。

去离子水，选用哈尔滨市文景蒸馏水厂的。

高速中药粉碎机，选用浙江永康溪岸药具厂的。

Waters高效液相色谱仪，选用美国Waters公司的。

BS210S电子天平，选用北京赛多利斯有限公司的。

DT200A电子天平，选用江苏常熟长青仪器仪表厂的。

22R型高速离心机，选用德国Heaerussepatech公司的。

KQ-250DB型台式数控超声波清洗器，选用昆山市超声仪器有限公司的。

Agilent 1100高效液相色谱仪，选用美国AB公司的。

京尼平苷酸标准品，选用Sigma公司的。

桃叶珊瑚苷标准品，选用Sigma公司的。

芍药苷标准品，选用Sigma公司的。

1.2 实验动物

SD大鼠，雌雄各半，体重（240±20）克，清洁级，由哈尔滨医科大学附属肿瘤医院实验动物中心提供。

2 原料处理

称取杜仲茶50克，粉碎，溶解在500毫升水中，温度60℃热回流提取30分钟。然后过滤，滤渣溶解在500毫升水中，温度60℃热回流提取30分钟。过滤后，将两次滤液混合在一起。用等体积正丁醇萃取3次，将3次萃取液混合。混合后的萃取液用旋转蒸发仪处理，温度60℃，每次时间不超过30分钟。将最后得到的固体样品冻干，保存待用。

3 方法

3.1 液相方法

安捷伦C18 色谱柱（250 mm×4.6mm，5μm），流动相组成是水和甲醇，比例为57%水和43%甲醇，流速1.0毫升/分钟，进样量10微克。

3.2 质谱方法

质谱条件扫描方式采用负离子多离子反应监测模式MRM电压-4 500伏，离子源雾化温度300℃，雾化气82.7 千帕，气帘气68.9千帕。京尼平苷酸分子量373.2，碎片分子量211.1，DP电压-77伏，CE电压-18.5伏，CXP电压-10伏。桃叶珊瑚苷分子量345.2，碎片分子量182.9，DP电压-49伏，CE 电压-13伏，CXP电压-2伏。芍药苷分子量479.3，碎片分子量121.1，DP电压-60伏，CE电压-22伏，CXP电压-8伏。

4 制备及标准曲线的绘制

4.1 标准品的制备

称取一定量的京尼平苷酸[1]和桃叶珊瑚苷用甲醇溶解，配成浓度为1毫克/毫升的混合标准品标准液。称取一定量的芍药苷，用甲醇溶解，配成浓度为100纳克/毫升的标准液。用200微克的空白血浆、100毫升的芍药苷标准液、100毫升的混合标准品标准液（经稀释），混合后使得混合标准品的浓度分别为0.192，0.96，4.8，24，120，600，3000纳克/毫升。涡旋30秒后12000转/分离心10分钟取上清液。

4.2 血样的制备

血浆样品制备血样于12000转/分离心10分钟后取血浆200微克，加入100毫升的混合标准品溶液，100毫升芍药苷，涡旋30 秒，12 000 转/分离心10分钟，取上清液进行血浆中京尼平苷酸和桃叶珊瑚苷的LC-MS/MS测定。

4.3 标准曲线的绘制

用内标法绘制京尼平苷算和桃叶珊瑚苷[2]的标准曲线，芍药苷为内标。

5 大鼠给药

大鼠以每克体重给药1毫克的给药量进行口服给药，取血时间为0，0.5，1，1.5，2，2.5，3，3.5，4，5，6，8，10，12，24h。根据标准曲线测出血样中京尼平苷酸和桃叶珊瑚苷的含量，绘制药时曲线。

6 实验结果

6.1 标准曲线

图1 京尼平苷酸标准曲线

根据测得京尼平苷酸和桃叶珊瑚苷和混合标准品也内标芍药苷相应的浓度及峰面积，绘制出相应标准曲线图1、图2。其中京尼平苷酸的标准曲线为y=2.041x + 0.1482，R2 = 0.9999，桃叶珊瑚苷的标准曲线为y = 7.9851x + 0.5673，R2 = 0.9998。

图2桃叶珊瑚苷标准曲线

6.2 给药后血样中含量的测定

图3京尼平苷酸和桃叶珊瑚苷药时曲线

根据所绘制的京尼平苷酸和桃叶珊瑚苷的标准曲线，对大鼠口服给药后血样中京尼平苷酸和桃叶珊瑚苷对应的时间点和浓度作药时曲线图。

7 结论

原料经处理后给药，从药时曲线中可以看出，京尼平苷酸最大浓度可达大概45纳克/毫升，而桃叶珊瑚苷只能达到25纳克/毫升左右，浓度值略低，可考虑使用氯仿或四氯化碳等其他常见有机溶剂进行萃取。

参考文献

[1]彭婕，钱之玉，等.京尼平苷和西红花酸保肝利胆作用的比较.中国新药杂志，2003（2）.

[2]成龙，杨红军，等.京尼平苷及京尼平的药代动力学研究—排泄动力学.第六次全国中西医结合中青年学术研讨会. 2009.

作者简介：马宇亮，黑龙江工业学院环境工程系，硕士研究生，研究方向：生物及生物制药。

摘要：实验确定了京尼平苷酸、桃叶珊瑚苷和芍药苷的质谱和液相的检测方法。绘制出了京尼平苷酸和桃叶珊瑚苷的标准曲线和药时曲线。

关键词：京尼平苷酸；桃叶珊瑚苷；芍药苷

中图分类号： S571.1 文献标识码： A 文章编号： 1674-0432（2014）-02-23-2

杜仲茶具有一定的降压效果，其中京尼平甘酸、桃叶珊瑚苷等成分具有很显著功能活性，而且含量较高。我们就是要建立一套完整的提取、检测方法，为以后的药代动力学研究作理论基础。

1 实验材料

1.1 仪器与试剂

市售杜仲茶，产地为湖南张家界。

正丁醇，J&K Chemical Ltd。

乙醇，J&K Chemical Ltd。

甲醇，J&K Chemical Ltd。

去离子水，选用哈尔滨市文景蒸馏水厂的。

高速中药粉碎机，选用浙江永康溪岸药具厂的。

Waters高效液相色谱仪，选用美国Waters公司的。

BS210S电子天平，选用北京赛多利斯有限公司的。

DT200A电子天平，选用江苏常熟长青仪器仪表厂的。

22R型高速离心机，选用德国Heaerussepatech公司的。

KQ-250DB型台式数控超声波清洗器，选用昆山市超声仪器有限公司的。

Agilent 1100高效液相色谱仪，选用美国AB公司的。

京尼平苷酸标准品，选用Sigma公司的。

桃叶珊瑚苷标准品，选用Sigma公司的。

芍药苷标准品，选用Sigma公司的。

1.2 实验动物

SD大鼠，雌雄各半，体重（240±20）克，清洁级，由哈尔滨医科大学附属肿瘤医院实验动物中心提供。

2 原料处理

称取杜仲茶50克，粉碎，溶解在500毫升水中，温度60℃热回流提取30分钟。然后过滤，滤渣溶解在500毫升水中，温度60℃热回流提取30分钟。过滤后，将两次滤液混合在一起。用等体积正丁醇萃取3次，将3次萃取液混合。混合后的萃取液用旋转蒸发仪处理，温度60℃，每次时间不超过30分钟。将最后得到的固体样品冻干，保存待用。

3 方法

3.1 液相方法

安捷伦C18 色谱柱（250 mm×4.6mm，5μm），流动相组成是水和甲醇，比例为57%水和43%甲醇，流速1.0毫升/分钟，进样量10微克。

3.2 质谱方法

质谱条件扫描方式采用负离子多离子反应监测模式MRM电压-4 500伏，离子源雾化温度300℃，雾化气82.7 千帕，气帘气68.9千帕。京尼平苷酸分子量373.2，碎片分子量211.1，DP电压-77伏，CE电压-18.5伏，CXP电压-10伏。桃叶珊瑚苷分子量345.2，碎片分子量182.9，DP电压-49伏，CE 电压-13伏，CXP电压-2伏。芍药苷分子量479.3，碎片分子量121.1，DP电压-60伏，CE电压-22伏，CXP电压-8伏。

4 制备及标准曲线的绘制

4.1 标准品的制备

称取一定量的京尼平苷酸[1]和桃叶珊瑚苷用甲醇溶解，配成浓度为1毫克/毫升的混合标准品标准液。称取一定量的芍药苷，用甲醇溶解，配成浓度为100纳克/毫升的标准液。用200微克的空白血浆、100毫升的芍药苷标准液、100毫升的混合标准品标准液（经稀释），混合后使得混合标准品的浓度分别为0.192，0.96，4.8，24，120，600，3000纳克/毫升。涡旋30秒后12000转/分离心10分钟取上清液。

4.2 血样的制备

血浆样品制备血样于12000转/分离心10分钟后取血浆200微克，加入100毫升的混合标准品溶液，100毫升芍药苷，涡旋30 秒，12 000 转/分离心10分钟，取上清液进行血浆中京尼平苷酸和桃叶珊瑚苷的LC-MS/MS测定。

4.3 标准曲线的绘制

用内标法绘制京尼平苷算和桃叶珊瑚苷[2]的标准曲线，芍药苷为内标。

5 大鼠给药

大鼠以每克体重给药1毫克的给药量进行口服给药，取血时间为0，0.5，1，1.5，2，2.5，3，3.5，4，5，6，8，10，12，24h。根据标准曲线测出血样中京尼平苷酸和桃叶珊瑚苷的含量，绘制药时曲线。

6 实验结果

6.1 标准曲线

图1 京尼平苷酸标准曲线

根据测得京尼平苷酸和桃叶珊瑚苷和混合标准品也内标芍药苷相应的浓度及峰面积，绘制出相应标准曲线图1、图2。其中京尼平苷酸的标准曲线为y=2.041x + 0.1482，R2 = 0.9999，桃叶珊瑚苷的标准曲线为y = 7.9851x + 0.5673，R2 = 0.9998。

图2桃叶珊瑚苷标准曲线

6.2 给药后血样中含量的测定

图3京尼平苷酸和桃叶珊瑚苷药时曲线

根据所绘制的京尼平苷酸和桃叶珊瑚苷的标准曲线，对大鼠口服给药后血样中京尼平苷酸和桃叶珊瑚苷对应的时间点和浓度作药时曲线图。

7 结论

原料经处理后给药，从药时曲线中可以看出，京尼平苷酸最大浓度可达大概45纳克/毫升，而桃叶珊瑚苷只能达到25纳克/毫升左右，浓度值略低，可考虑使用氯仿或四氯化碳等其他常见有机溶剂进行萃取。

参考文献

[1]彭婕，钱之玉，等.京尼平苷和西红花酸保肝利胆作用的比较.中国新药杂志，2003（2）.

[2]成龙，杨红军，等.京尼平苷及京尼平的药代动力学研究—排泄动力学.第六次全国中西医结合中青年学术研讨会. 2009.

作者简介：马宇亮，黑龙江工业学院环境工程系，硕士研究生，研究方向：生物及生物制药。

摘要：实验确定了京尼平苷酸、桃叶珊瑚苷和芍药苷的质谱和液相的检测方法。绘制出了京尼平苷酸和桃叶珊瑚苷的标准曲线和药时曲线。

关键词：京尼平苷酸；桃叶珊瑚苷；芍药苷

中图分类号： S571.1 文献标识码： A 文章编号： 1674-0432（2014）-02-23-2

杜仲茶具有一定的降压效果，其中京尼平甘酸、桃叶珊瑚苷等成分具有很显著功能活性，而且含量较高。我们就是要建立一套完整的提取、检测方法，为以后的药代动力学研究作理论基础。

1 实验材料

1.1 仪器与试剂

市售杜仲茶，产地为湖南张家界。

正丁醇，J&K Chemical Ltd。

乙醇，J&K Chemical Ltd。

甲醇，J&K Chemical Ltd。

去离子水，选用哈尔滨市文景蒸馏水厂的。

高速中药粉碎机，选用浙江永康溪岸药具厂的。

Waters高效液相色谱仪，选用美国Waters公司的。

BS210S电子天平，选用北京赛多利斯有限公司的。

DT200A电子天平，选用江苏常熟长青仪器仪表厂的。

22R型高速离心机，选用德国Heaerussepatech公司的。

KQ-250DB型台式数控超声波清洗器，选用昆山市超声仪器有限公司的。

Agilent 1100高效液相色谱仪，选用美国AB公司的。

京尼平苷酸标准品，选用Sigma公司的。

桃叶珊瑚苷标准品，选用Sigma公司的。

芍药苷标准品，选用Sigma公司的。

1.2 实验动物

SD大鼠，雌雄各半，体重（240±20）克，清洁级，由哈尔滨医科大学附属肿瘤医院实验动物中心提供。

2 原料处理

称取杜仲茶50克，粉碎，溶解在500毫升水中，温度60℃热回流提取30分钟。然后过滤，滤渣溶解在500毫升水中，温度60℃热回流提取30分钟。过滤后，将两次滤液混合在一起。用等体积正丁醇萃取3次，将3次萃取液混合。混合后的萃取液用旋转蒸发仪处理，温度60℃，每次时间不超过30分钟。将最后得到的固体样品冻干，保存待用。

3 方法

3.1 液相方法

安捷伦C18 色谱柱（250 mm×4.6mm，5μm），流动相组成是水和甲醇，比例为57%水和43%甲醇，流速1.0毫升/分钟，进样量10微克。

3.2 质谱方法

质谱条件扫描方式采用负离子多离子反应监测模式MRM电压-4 500伏，离子源雾化温度300℃，雾化气82.7 千帕，气帘气68.9千帕。京尼平苷酸分子量373.2，碎片分子量211.1，DP电压-77伏，CE电压-18.5伏，CXP电压-10伏。桃叶珊瑚苷分子量345.2，碎片分子量182.9，DP电压-49伏，CE 电压-13伏，CXP电压-2伏。芍药苷分子量479.3，碎片分子量121.1，DP电压-60伏，CE电压-22伏，CXP电压-8伏。

4 制备及标准曲线的绘制

4.1 标准品的制备

称取一定量的京尼平苷酸[1]和桃叶珊瑚苷用甲醇溶解，配成浓度为1毫克/毫升的混合标准品标准液。称取一定量的芍药苷，用甲醇溶解，配成浓度为100纳克/毫升的标准液。用200微克的空白血浆、100毫升的芍药苷标准液、100毫升的混合标准品标准液（经稀释），混合后使得混合标准品的浓度分别为0.192，0.96，4.8，24，120，600，3000纳克/毫升。涡旋30秒后12000转/分离心10分钟取上清液。

4.2 血样的制备

血浆样品制备血样于12000转/分离心10分钟后取血浆200微克，加入100毫升的混合标准品溶液，100毫升芍药苷，涡旋30 秒，12 000 转/分离心10分钟，取上清液进行血浆中京尼平苷酸和桃叶珊瑚苷的LC-MS/MS测定。

4.3 标准曲线的绘制

用内标法绘制京尼平苷算和桃叶珊瑚苷[2]的标准曲线，芍药苷为内标。

5 大鼠给药

大鼠以每克体重给药1毫克的给药量进行口服给药，取血时间为0，0.5，1，1.5，2，2.5，3，3.5，4，5，6，8，10，12，24h。根据标准曲线测出血样中京尼平苷酸和桃叶珊瑚苷的含量，绘制药时曲线。

6 实验结果

6.1 标准曲线

图1 京尼平苷酸标准曲线

根据测得京尼平苷酸和桃叶珊瑚苷和混合标准品也内标芍药苷相应的浓度及峰面积，绘制出相应标准曲线图1、图2。其中京尼平苷酸的标准曲线为y=2.041x + 0.1482，R2 = 0.9999，桃叶珊瑚苷的标准曲线为y = 7.9851x + 0.5673，R2 = 0.9998。

图2桃叶珊瑚苷标准曲线

6.2 给药后血样中含量的测定

图3京尼平苷酸和桃叶珊瑚苷药时曲线

根据所绘制的京尼平苷酸和桃叶珊瑚苷的标准曲线，对大鼠口服给药后血样中京尼平苷酸和桃叶珊瑚苷对应的时间点和浓度作药时曲线图。

7 结论

原料经处理后给药，从药时曲线中可以看出，京尼平苷酸最大浓度可达大概45纳克/毫升，而桃叶珊瑚苷只能达到25纳克/毫升左右，浓度值略低，可考虑使用氯仿或四氯化碳等其他常见有机溶剂进行萃取。

参考文献

[1]彭婕，钱之玉，等.京尼平苷和西红花酸保肝利胆作用的比较.中国新药杂志，2003（2）.

[2]成龙，杨红军，等.京尼平苷及京尼平的药代动力学研究—排泄动力学.第六次全国中西医结合中青年学术研讨会. 2009.

作者简介：马宇亮，黑龙江工业学院环境工程系，硕士研究生，研究方向：生物及生物制药。