油炸小食品中乙二胺四乙酸二钠的高效液相色谱法测定

陈肇臻，刘小刚

（龙岩市产品质量检验所，福建 龙岩364000）

油炸小食品中乙二胺四乙酸二钠的高效液相色谱法测定

陈肇臻，刘小刚

（龙岩市产品质量检验所，福建 龙岩364000）

目的 文中建立一种测定油炸食品中乙二胺四乙酸二钠的液相色谱检测方法。方法 油炸小食品经无水乙醚除油并挥去乙醚，水萃取，加入氯化铜溶液及抗坏血酸溶液形成Cu-EDTA络合物。色谱分离时使用C18分析柱，甲醇、四正丁基溴化铵缓冲液为流动相，梯度洗脱，245nm波长检测。结果 该方法线性范围20.00μg•ml-1～ 400.00μg•ml-1，相关系数r：0.9999,检出限6.5mg•kg-1，定量限21mg•kg-1。回收率：93.7～100.7%；精密度: RSD60.2%。结论 该方法的准确性和精密度满足检测要求需要。

油炸小食品；乙二胺四乙酸二钠；梯度洗脱；反相高效液相色谱法

1 引言

乙二胺四乙酸二钠，GB2760-2011食品添加剂使用标准[1]定义其功能类别为鳌合剂、防腐剂、抗氧化剂、加工助剂，易溶于水，不溶于乙醚。EDTA是含有羧基（硬碱）和氨基（中间碱）的螯合剂，其分子中两个羧基上的H+转移到N原子上，形成双极离子。由于它的分子中含有两个氨氮与四个羧氧基，具有氨氮与羧氧的络合能力，若溶液的酸度很高，它的两个羧基可再接受H+，形成H6Y2-，这样EDTA就相当于六元酸，有六级离解平衡，几乎能与所有的金属离子络合，具有广泛的配位性能，与金属离子形成稳定的螯合物，具防腐护色作用。油炸小食品中微量的铁、铜等会促进油脂氧化、变色，添加乙二胺四乙酸二钠可提高油炸小食品抗氧化及防止油炸食品氧化变色。目前，国内检测乙二胺四乙酸二钠的方法主要有国家标准[2]、高效及超高效液相色谱法[3-8]和离子色谱法[9-10]等，而GB2760-2011食品安全国家标准 食品添加剂使用标准[1]未许可油炸小食品添加乙二胺四乙酸二钠，特建立本测定方法利用保留时间定性,外标峰面积法定量检测油炸小食品中乙二胺四乙酸二钠含量。

2 材料与方法

2.1试剂

乙二胺四乙酸二钠标准物质（纯度99.96%）；无水乙醚；乙酸；0.5%氯化铜；5%抗坏血酸；磷酸；四正丁基溴化铵；无水乙酸钠；甲醇（色谱纯）；除另有规定外，试剂均为分析纯，水为超纯水。

2.2仪器

Waters e2695高效液相色谱仪（2998二极管阵列检测器）梅特勒-托利多XS205DU分析天平、莱驰GM200捣磨机；漩涡混合器；湘仪TGL-20M高速冷冻离心机；超声波清洗器SK5200H；101-1E烘箱；pHS-3C酸度计；SHB-B95A循环水式真空泵。

2.3色谱条件

检测器：二极管阵列检测器，波长245nm，保留时间及光谱图定性，外标峰面积法定量。

色谱柱：Waters Funfire C18 250×4.6mm 5μm不锈钢柱，柱温32℃。

流动相：A:甲醇，B：缓冲盐［（6.45g四正丁基溴化铵+2.46g无水乙酸钠）/L］。

流速：变流速梯度洗脱；进样量：10μl。

时间程序如表1所示

表1 梯度洗脱的时间程序

2.4 标准溶液的配制

乙二胺四乙酸二钠标准储备溶液：精确称取1.0004g预先于85℃烘箱中烘至恒重的乙二胺四乙酸二钠于100.0ml容量瓶中超纯水定容摇匀，浓度为10.00mg•ml-1。

乙二胺四乙酸二钠工作标准使用液：移取5.00ml乙二胺四乙酸二钠标准储备溶液于50.0ml容量瓶中超纯水定容摇匀，浓度为1.0mg/ml, 再 稀 释 成 20.00、40.00、100.00、200.00、400.00μg•ml-1。

2.5 样品的前处理方法

样品用GM200捣磨机粉磨，装瓶待用。试样提取：精确称取2g样品于50ml离心管中，105℃烘干，加15ml无水乙醚漩涡混合2min，超声10min，8000rpm离心5min，去有机相，再用无水乙醚除油两次，试样常温挥干后经65℃烘箱除乙醚，除油后的样品加30ml超纯水摇匀后超声20min，加2.5ml0.5%CuCl2及0.5ml5%抗坏血酸，超纯水定容50.0ml摇匀，8℃10000rpm离心8min，上清液用0.45μm一次性尼龙过滤器过滤于样品瓶中备用。

加 标 回 收： 移 0.2ml，0.5ml、1.0ml、1.5ml200.00μg•ml-1乙二胺四乙酸二钠工作标准使用液于事先称有样品离心管中，后同试样提取。

3 结果与讨论

3.1 色谱条件的选择

3.1.1流动相

甲醇比例影响保留时间，比例高时保留时间短。目标物出峰后提高总流速及甲醇比例，使样品中强保留物尽快流出从而避免干扰下一样品。流动相缓冲盐未调pH目标物保留时间较磷酸调缓冲盐pH4.0提前出峰约1min，拖尾因子0.99，色谱峰未见异常，本方法流动相缓冲盐未调pH。

3.1.2检测波长

EDTA-2Na的紫外响应非常弱，波长扫描无特征吸收峰。通过转化为Cu-EDTA，最大特征吸收峰为242nm。本方法采用245nm波长检测，光谱图匹配辅助定性。

3.1.3样品pH值

当pH3.8-4.0时EDTA与Cu生成比较稳定的络合物，EDTACu可稳定3h，EDTA与Fe在pH在小于1.5形成稳定络合物；EDTA与AL形成稳定络合物pH在2-3，EDTA与Ca在碱性条件下形成稳定的络合物，在酸性条件下Ca难于被EDTA络合，本方法样品中的钙、铁、铝不干扰EDTA-2Na的检测。

3.1.4当样品中EDTA2Na浓度超过1g/ml时所加的氯化铜不足以完全转化EDTA2Na，检测结果偏低。

3.2 标准曲线

乙二胺四乙酸二钠保留时间23.7min左右,基线分离。以浓度为X轴，峰面积为Y轴建立校正曲线，标准曲线回归方程ρ(μg•ml-1)=-0.02450+2.0046×10-6S,相关系数r=0.99989线性范围：20.0～400.0μg/ml，相关系数0.9998。样品加标回收率93.7～100.7%。以3倍噪声作为方法的检出限（噪声0.0153mV），检出限为6.5mg/kg(2g样品，定容50.0ml计)；定量限21mg/kg（10倍噪声计）。

图1 油炸地瓜干样品色谱图

图2 EDTA2Na标样色谱图（200.0μ g•ml-1）

图3 EDTA2Na标样吸收光谱图

图4 EDTA2Na工作曲线图

3.3 加标回收率及重复性试验

表2 回收试验

样品提取液按1.2色谱条件连续6次进样，保留时间RSD6为0.15%，峰面积RSD6为0.10%。

称取样品6个按2.5提取，2.3色谱条件依次进样，保留时间RSD6为0.20%，样品中EDTA2Na含量RSD6为0.11%。

4 结论

该方法的灵敏度、准确性、精密度、重复性完全可满足检测要求。

[1] GB2760-2011食品安全国家标准 食品添加剂使用标准[S].

[2] SN/T1018-2011出口食品罐头中乙二胺四乙酸含量检测方法[S].

[3] 吕晓华，文红，许红琴. 高效液相色谱法测定板栗罐头中乙二胺四乙酸二钠的含量[J]. 中国卫生检验杂志，2009年，3：517-518.

[4] 施旭霞，陈笑梅, 反相高效液相色谱法测定罐头食品中乙二胺四乙酸的残留量[J]. 色谱, 2000，18（5）：445-448.

[5] 刘鹏春，李鸿鸣，王冰高效液相色谱法测定酱菜中EDTA-2Na的含量[J]. 中国公共卫生，2001, 17(11)：1027-1027.

[6] 罗袆，赵永彪，李淑娟. 反相高效液相色谱法测定食品中EDTA的含量[J]. 中国食品添加剂，2006, (4)：156-159.

[7] 王清燕. 高效液相色谱法测定食品中乙二胺四乙酸二钠[J]. 黎明职业大学学报，2011，1，41-43.

[8] 何树坤. 超高效液相色谱法测定地瓜干中EDTAB的研究[J]. 福建轻纺，2009，6，31-33.

[9] 黄建，李文仙，霍军生. 反相离子对高效液相色谱法测定果味饮料中的乙二胺四乙酸二钠[J]. 中国食品工业，2009，6，5-56.

[10] 李琛，李迎丽，唐开红. 离子色谱法测定罐头、酱菜等食品中的EDTA-2Na含量[J]. 中国卫生检验杂志，2005，10，1233-1234.

Determination of Disodium EDTA in Fried Small Foods by Using HPLC Method

CHEN Zhao-zhen, LIU Xiao-gang
(Longyan Provincial Central Inspection Institute, Longyan 364000, Fujian, China)

Objective:A method of determination of disodium EDTA of fried small foods by HPLC is established in this paper. Method: Through removing oil by anhydrous ether, evaporating ether subsequently, EDTA in fried small foods is then extracted by water. Addition of CuCl2solution and ascorbic acid solution, then the Cu-EDTA complex combond can be formed. In the chromatographic separation, C18 analysis column is served as isolated column, methanol mixed with tetra-n-butylammonium bromide buffer solution(pH=4.0)is used as mobile phase, gradient elution program is made and the detection wavelength is 245 nm. Result: Linear range of the standard curve is 20.00μg • ml-1～ 400.00μg • ml-1with the correlation coefficient r=0.9999. The recovery rate of the method is 93.7 ～ 100.7%.The detection limit is 6.5mg•kg-1and the quantitative limit of the method is 21mg•kg-1. Conclusion Precision and accuracy of this method meets the requirements of the detection.

Fried small foods; Disodium EDTA; Gradient elution; RP-HPLC

2013-05-06

陈肇臻，男，龙岩市产品质量检验所，光谱色谱检验室主任

刘小刚，男，龙岩市产品质量检验所，副所长，工程师