Fascin_1在肺癌中的表达及其临床意义

汪 睿，虞红珍，王 弦，吴 强

Fascin_1在肺癌中的表达及其临床意义

汪 睿1，2，虞红珍1，王 弦1，吴 强1

目的观察Fascin_1在人类肺癌及癌旁组织中的表达及其与肺癌患者临床病理特征之间的关系，并研究Fascin _1表达与肺癌的临床生物学行为的关系。方法采用免疫组化MaxVision两步法检测84例肺癌及癌旁组织中Fascin_ 1蛋白的表达。用Fascin_1在血管内皮细胞中的表达作为阳性对照，使用PBS代替一抗作为阴性对照。结果Fascin _1蛋白在84例肺癌组织及癌旁组织中分别为78例（92.9%）阳性与27例（32.1%）Fascin_1蛋白阳性，两者差异有统计学意义（P＜0.05）。Fascin_1表达在不同年龄、临床分期以及区域淋巴结转移间差异有统计学意义（P＜0.05），但是在不同性别、T分期以及病理类型间差异无统计学意义（P＞0.05）。肺癌组织中Fascin_1蛋白阳性表达强度不同的患者的生存时间差异有统计学意义（P＜0.05），而癌旁组织中Fascin_1蛋白阳性表达强度不同患者的生存时间差异无统计学意义（P＞0.05）。结论在肺癌中，Fascin_ 1的表达同肿瘤的侵袭和转移密切相关，同时癌组织中Fascin_1的不同表达对患者的生存时间有明显影响。因此考虑Fascin_1有望成为肺癌潜在生物学标志物。

肺癌；Fascin_1；免疫组织化学；生存时间

Fascin_1蛋白是一种细胞骨架蛋白，目前发现在人类多个上皮性肿瘤中表达上调，并且与临床病理学和预后不良相关。该基因主要是与F-肌动蛋白结合，并将其组装成平行排列的肌动蛋白束，是调节细胞运动的关键基因之一［1］。该研究采用免疫组化方法MaxVision两步法检测人肺癌及癌旁组织中Fascin_1的表达，分析其与患者临床病理特征之间的关系，并研究Fascin_1表达与肺癌的临床生物学行为的关系。

1 材料与方法

1.1 材料收集安徽医科大学第一附属医院病理科2007年2月～2008年4月病理资料齐全的肺癌手术石蜡标本84例，肿瘤组织切缘周边经病理学判断未见癌组织的部分为癌旁组织，作为参考对照。所取标本的患者年龄为38～80（60.77±9.44）岁。按WHO（2012年）肺癌中的标准进行分期。TNM分期：Ⅰ期37例、Ⅱ期32例、Ⅲ期15例。2013年3月进行生存期随访，其中40例患者获得随访，44例失访。标本均使用常规10%福尔马林溶液固定，然后石蜡包埋及4 μm厚切片。并采用HE和免疫组化法进行染色。

1.2 试剂免疫组化试剂使用免疫组化浓缩型鼠抗人Fascin_1单克隆抗体（SPM133）购自美国Santa Cruz公司；免疫组化检测试剂盒为即用型快捷免疫组化MaxVision试剂盒和DAB显色试剂盒均购自福州迈新公司。

1.3 方法免疫组化染色方法参照使用说明书操

作，采用MaxVision两步法进行免疫组化染色，简要步骤按如下操作：柠檬酸钠缓冲液高压抗原修复，切片中滴加Fascin_1一抗，4℃过夜，去除一抗后滴加二抗，然后试剂盒室温下孵育20 min，用DAB显色，苏木精对比染色。用Fascin_1在血管内皮细胞中的表达作为阳性对照，使用PBS代替一抗作为阴性对照。

1.4 结果判断免疫组化以癌及癌旁细胞质中出现棕黄色或棕褐色颗粒为阳性染色。免疫组化评定方法参考文献［2－3］标准。按染色强度记分：无色为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分；按染色程度记分：无阳性细胞数为0分，阳性细胞数1%～25%为1分，26%～50%为2分，51%～75% 为3分，76%～100%为4分。两项相加得分（0～7分），≥3分为阳性。

1.5 统计学处理采用SPSS 13.0统计软件进行分析。样本率的比较使用χ2检验，生存率用Kaplan-Meier法计算，生存率的比较使用Log-Rank检验。

2 结果

2.1 Fascin_1蛋白在肺癌及癌旁组织中的表达和分布Fascin_1蛋白在肺癌组织中呈弥漫性分布，癌巢周边部的癌细胞染色较强。Fascin_1免疫组化染色主要定位于阳性细胞胞质或胞膜上，呈局灶性或弥漫性黄色颗粒状。84例肺癌组织中，78例（92.9%）Fascin_1蛋白阳性，见图1。84例肺癌旁组织中，27例（32.1%）Fascin_1蛋白阳性，两者差异有统计学意义（χ2＝66.06，P＜0.05）。癌旁组织中Fascin_1主要表达于腺上皮细胞，呈膜质型定位，见图2。肺癌间质中的血管内皮细胞亦可见Fascin_ 1阳性染色。在癌旁组织中，毛细血管内皮细胞及树突状细胞中均呈阳性表达，而支气管肺泡上皮细胞及肺大血管内皮细胞中呈阴性表达。

图1 Fascin_1蛋白在肺癌组织中的阳性表达 DAB×400 A：鳞癌；B：腺癌

图2 Fascin_1蛋白在癌旁组织中的阳性表达 DAB×400 A：支气管上皮细胞；B：肺泡上皮细胞

2.2 肺癌中Fascin_1蛋白的表达与临床病理参数的关系为了研究Fascin_1表达同肺癌临床病理特征的关系，将84例患者按照年龄（≤61岁，＞61岁）、性别（男，女）、T分期（T1、T2、T3、T4）、N分期—区域淋巴结转移情况（N0、N1、N2）、临床病理类型（腺癌、鳞癌、大细胞癌、小细胞癌）以及TNM分期（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期）进行分组，使用χ2检验方法，比较Fascin_1在不同组之间的表达差异。结果表明Fascin_1表达在不同年龄、临床分期以及区域淋巴结转移间差异有统计学意义（P＜0.05），但是在不同性别、T分期以及病理类型间差异无统计学意义（P＞0.05），见表1。

表1 肺癌中Fascin_1表达与临床病理特征的关系（n）

2.3 肺癌中Fascin_1蛋白阳性表达与生存时间的关系40例随访患者中，到2013年3月随访截止时，病死21例，存活19例，总生存率47.5%，生存时间8～70个月。将Fascin_1蛋白阳性表达强度与患者生存时间进行分析显示，肺癌组织中Fascin_1蛋白阳性表达强度不同的患者之间中位生存期差异有统计学意义（P＜0.05），而癌旁组织中Fascin_1蛋白阳性表达强度不同患者的中位生存期差异无统计学意义（P＞0.05），见表2、图3。多因素Cox回归分析也显示肺癌组织中Fascin_1蛋白阳性表达强度与患者生存期之间存在关联［风险比（HR）＝4.505，95%CI＝1.615～12.569，P＝0.004］。

表2 Fascin_1表达与中位生存时间之间的关系

图3 肺癌组织中Fascin_1蛋白阳性表达程度不同的患者之间总生存曲线

3 讨论

肺癌发生转移是导致肺癌治疗失败、患者死亡的主要原因，因此寻找、研究肺癌转移的相关机制或是相关基因对于肺癌的治疗及预后有着十分重要的临床意义。

人类Fascin_1基因在1994年被克隆，其染色体定位于7q22，该基因的蛋白质编码产物是分子质量为5.5×104ku的细胞内蛋白，其主要作用就是与F-肌动蛋白结合。Fascin_1蛋白的第39位的丝氨酸是蛋白激酶C的磷酸化位点，磷酸化后的该位点可调节Fascin_1蛋白与F－肌动蛋白的结合活性，抑制Fascin_1肌钙蛋白的组装功能并影响到细胞膜表面伪足和微棘的形成［4］。

有研究［5－6］显示，Fascin_1蛋白在多种肿瘤，如乳腺癌、鼻咽癌肿瘤细胞中有着异常高表达，并且其表达同肿瘤的转移及侵袭存在密切的相关性。但是，目前对于Fascin_1在肺癌中表达研究的报道较少。

本研究观察了肺癌手术病理标本中Fascin_1表达，结果显示Fascin_1主要定位于肺癌阳性细胞胞质或胞膜上，呈灶性或弥漫性黄色颗粒状。但是Fascin_1蛋白的表达与肺癌患者的性别、T分期、肿瘤的病理类型之间无明显的相关性。国内相关的报道中于维霞等［7］分析了Fascin_1在51例肺癌中的表达，其中在肺鳞癌患者中的表达阳性率为66.7%，而肺腺癌患者中表达阳性率为43.5%，但是在分化差的肺癌中Fascin_1表达上调，而且具有性别差异，其中男性表达率较高。该结果与本组研究结果不一致。

既往高翔等［8］对肺癌的研究结果中报道肺癌组织表达的Fascin_1蛋白与正常组织表达，差异无统计学意义。本组实验结果显示Fascin_1蛋白在肺癌组织中与肺癌旁组织中的表达相比较高。因此考虑高翔等［8］的研究中患者可能发生了上皮间质的转化，具体原因有待于进一步研究。另发现肺癌组织中Fascin_1蛋白阳性患者较阴性患者总生存率及总生存时间下降，提示Fascin_1蛋白的阳性表达可能预示着患者的不良预后及低生存率，这一结论也与其他学者的研究［9－11］一致。

国外Pelosi et al［12］研究报道了220例Ⅰ期的非小细胞肺癌中有关Fascin_1蛋白的表达，结果显示，98%的肺鳞癌患者为Fascin_1阳性表达，78%肺腺癌患者为Fascin_1阳性表达，而在癌栓中普遍表达。另外在具有对侧恶性胸腔积液或远处转移的腺癌患者中Fascin_1更是呈弥漫性表达，而对于肺鳞癌患者，癌旁组织同角化珠相比，Fascin_1的免疫反应强度较弱，呈弱表达。从随访结果看，Fascin_1呈弥漫性或强阳性表达的患者预后差。该研究首次证明了Fascin_1蛋白在侵袭性的肺癌中表达上调，并结合临床的角度反映出Fascin_1蛋白作为肺癌患者一个独立的预后因素的可能性。之后，该研究继续评估了Fascin_1蛋白在128例经手术切除的肺神经内分泌肿瘤中的表达分析以及其与淋巴结转移的关系。结果显示，在肺典型类癌和肺非典型类癌当中，Fascin_1蛋白的表达同区域淋巴结转移的关系密切相关［13］。本组研究中同样得出结果，显示Fascin_1表达在区域淋巴结转移以及临床分期不同的患者中差异有统计学意义。区域淋巴结转移范围越广、临床分期越晚的患者，标本中Fascin_1表达越高。多因素分析表明，Fascin_1可以作为独立的预测肺癌患者淋巴结转移的标志物［14］。

因此，根据本组试验结合既往相关研究综合分析，Fascin_1蛋白对人类肺癌细胞的淋巴结转移具有密切相关性，同时癌组织中Fascin_1的不同表达对患者的生存时间有明显影响。因此考虑Fascin_1有望成为肺癌潜在生物学标志物。

［1］Adams J C.Fascin protrusions in cell interactions［J］.Trends Cardiovasc Med，2004，14（6）：221－6.

［2］Soumaoro L T，Uetake H，Higuchi T，et al.Cyclooxygenase-2 expression：a significant prognostic indicator for patients with colorectal cancer［J］.Clin Cancer Res，2004，10（24）：8465－71.

［3］Masunaga R，Kohno H，Dhar D K，et al.Cyclooxygenase-2 expression correlates with tumor neovascularization and prognosis in human colorectal carcinoma patients［J］.Clin Cancer Res，2000，6（10）：4064－8.

［4］Larsson C.Protein kinase C and the regulation of the actin cytoskeleton［J］.Cell Signal，2006，18（3）：276－84.

［5］昂 琳，吴正升，王 弦，等.乳腺癌FSCN1表达及其对癌细胞增殖活性的影响［J］.临床与实验病理学杂志，2013，29（3）：240－3.

［6］刘 莉，安胜利，官 键，等.Fascin-1在鼻咽癌中表达及其临床意义［J］.广东医学，2010，31（8）：976－8.

［7］于维霞，熊胜道，卢朝辉，等.Fascin与Ki-67在分化差的非小细胞肺癌中的表达［J］.中国实用内科杂志，2005，25（8）：705 －7.

［8］高 翔，吴德华.FSCNl蛋白在人上皮性肿瘤组织中的表达及其临床意义［J］.南方医科大学学报，2008，28（6）：953－5.

［9］Wu D，Chen L，Liao W，et al.Fascinl expression predicts poor prognosis in patients with nasopharyngeal carcinoma and correlates with tumor invasion［J］.Ann Oncol，2010，21（3）：589－96.

［10］Oh S Y，Kim Y B，Suh K W，et al.Prognostic impact of fascin-1 expression is more significant in advanced colorectal cancer［J］.J Surg Res，2012，172（1）：102－8.

［11］Yoder B J，Tso E，Skacel M，et al.The expression of fascin，an actin-bundling motility protein，correlates with hormone receptornegative breast cancer and a more aggressive clinical course［J］.Clin Cancer Res，2005，11（1）：186－92.

［12］Pelosi G，Pastorino U，Pasini F，et al.Independent prognostic value of fascin immunoreactivity in stageⅠnonsmall cell lung cancer［J］.Br J Cancer，2003，88（4）：537－47.

［13］Pelosi G，Pasini F，Fraggetta F，et al.Independent value of fascin immunoreactivity for predicting lymphy node metastases in typical and atypical pulmonary carcinoids［J］.Lung Cancer，2003，42 （2）：203－13.

［14］Zhang F R，Tao L H，Shen Z Y，et al.Fascin expression in human embryonic，fetal，and normal adult tissue［J］.J Histochem Cytochem，2008，56（2）：193－9.

Clinical significance of Fascin_1 expression in lung cancer

Wang Rui1，2，Yu Hongzhen1，Wang Xian1，et al
（1Dept of Pathology，Anhui Medical University，Hefei 230022；2Dept of Oncology，Anhui Chest Hospital，Hefei 230032）

ObjectiveTo observe the relationship of Fascin_1 expression in human lung cancer and para-cancer tissues to clinicopathological characteristics in lung cancer patients，and to investigate the correlations of Fascin_1 expression with the biologic behaviors of lung cancer.MethodsImmunohistochemistry MaxVision method was adopted to detect the protein expression of Fascin_1 in 84 cases of lung cancer and para-cancer tissues.Fascin_1 expression in vascular endothelial cells was used as the positive criteria，while PBS displaced primary antibody as the negative criteria.ResultsThe positive rates of Fascin_1 expression in lung cancer tissues and para-cancer tissues were 92.9%（78／84）and 32.1%（27／84）respectively，with significant difference（P＜0.05）.Fascin_1 expression was correlated with age，clinical stage and regional lymph node metastasis，with significant differnence（P＜0.05）.Whereas it was not correlated with gender，T stage and pathology type，with no statistical difference（P＞0.05）.The overall survival time was significantly different among the different intensities of Fascin_1 expression in lung cancer tissues（P＜0.05），while there was no statistical difference among the different intensities of Fascin_1 expression in para-cancer tissues（P＞0.05）.ConclusionFascin_1 plays an important role in the invasiveness and metastasis of lung cancer.Fascin_1 expression in cancer tissues has an obvious influence on the overall survival time of patients.Fascin_1 might be potential candidate of biological biomarkers for lung cancer.

lung cancer；Fascin_1；immunohistochemistry；survival time

R 73-3

1000－1492（2014）05－0658－04

2014－02－25接收

国家自然科学基金（编号：81101597、81172533）；安徽高校省级科学研究（编号：KJ2012z142）；安徽医科大学校基金及追加基金（编号：2012xkj001zj）

1安徽医科大学病理学教研室，合肥 230032

2安徽省胸科医院肿瘤科，合肥 230022

汪 睿，男，主治医师，硕士研究生；

吴 强，男，教授，博士生导师，责任作者，E-mail：aydjohn ＠yahoo.com