HPLC法测定荨麻疹丸中欧前胡素的含量

蔡伊丽 周修森

（河南省信阳市食品药品检验所，信阳464000）

HPLC法测定荨麻疹丸中欧前胡素的含量

蔡伊丽 周修森

（河南省信阳市食品药品检验所，信阳464000）

目的建立荨麻疹丸中欧前胡素含量的测定方法。方法采用反相高效液相色谱法，使用DIONEX Acclaim 120 C18（250mm×4.6mm，5μm）色谱柱，以甲醇：水（55∶45）作为流动相，检测波长300nm，流速1.0 ml/min，柱温为30℃。结果欧前胡素在0.02～0.2μg范围内线性较好（r=0.9999），平均回收率为98.72%(RSD为0.75%)。结论该方法快速、简便、可靠、准确度高、重复性好，结果稳定，可用于荨麻疹丸中欧前胡素含量测定。

荨麻疹丸；欧前胡素；HPLC；含量测定

荨麻疹丸是由吉林龙鑫药业有限公司生产，其处方由白芷、防风、白藓皮等中药组成，具有清热祛风，除湿止痒作用。用于风、湿、热而致的荨麻疹、湿疹和皮肤瘙痒。荨麻疹丸中君药白芷来源于伞形科植物白芷Angelica dahurica（Fisch.ex Hoffm）Benth.et Hook.f.或杭白芷Angelica dahurica（Fisch.ex Hoffm）Benth.et Hook.f.var.formosana（Boiss.）Shan et Yuan的干燥根。具有解表散寒，祛风止痛，宣通鼻窍，燥湿止带，消肿排脓功效[1]，欧前胡素是被分离出来的白芷有效成分之一[2]，具有多种药理作用，为重要的天然活性物质。荨麻疹丸质量标准收载在卫生部药品标准中药成方制剂第十册，标准中无含量测定项，为了控制药品质量，本文建立了高效液相色谱法测定荨麻疹丸中欧前胡素含量的方法，现报道如下。

1 仪器与材料

1.1 仪器Agilent1200液相色谱仪，UV检测器（美国安捷伦公司）；METTLER AE-240电子分析天平（梅特勒-托利多仪器有限公司）；KQ-300型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；基因型1850D超纯水机（重庆摩尔制水设备有限公司）。

1.2 材料欧前胡素对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110826-200511），荨麻疹丸（吉林龙鑫药业有限公司，批号：110202，111016，130612）。甲醇为色谱醇（SIGMA-ALDRICH，批号：SHBC0053V），水为纯化水，其它化学试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件色谱柱：DIONEX Acclaim 120 C18（250mm×4.6mm，5μm）；流动相：甲醇-水（55∶45）[1]，检测波长：300nm，流速：1.0ml/min，柱温：30℃，进样体积为10μl，理论板数不低于10000。

2.2 试验溶液的制备

2.2.1 供试品溶液取本品适量，研细，取约4g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇溶液25ml，精密称定重量，超声处理30分钟，放冷至室温，再精密称定重量，用甲醇溶液补足减失重量，摇匀，经0.45μm微孔滤膜滤过，备用。

2.2.2 对照品溶液精密称定欧前胡素对照品10mg，置100ml量瓶中，加甲醇溶液适量，振摇使溶解，用甲醇溶液稀释至刻度，摇匀，作为贮备液，精密量取贮备液5ml，置50ml量瓶中，用甲醇溶液稀释至刻度，摇匀，即得浓度为10μg/ml的欧前胡素溶液，作为对照品溶液。

2.2.3 阴性供试品溶液取不含白芷的空白制剂样品，按照2.2.1项下供试品溶液制备方法制备。

2.3 系统适用性试验分别吸取2.2项下对供试品溶液，对照品溶液，阴性供试品溶液各10μl注入色谱仪记录色谱图，结果：供试品溶液和对照品溶液在9.2分钟出现欧前胡素峰，该峰与其它峰分离完全（见图1A、B）；阴性供试品溶液在欧前胡素出峰位置未见峰出现，对试验不产生干扰（见图1C）。

图1 荨麻疹丸HPLC色谱图

2.4 方法学考察

2.4.1 线性关系取上述对照品溶液分别进样2、5、10、15、20μl，按上述色谱条件测定峰面积，以峰面积为纵坐标，进样量（μg）为横坐标，绘制标准曲线（如图2），线性回归方程为：y＝1701.6x+1.0671（r= 0.9999）。表明欧前胡素在0.02～0.2μg范围内线性关系良好。

图2 欧前胡素线性关系图

2.4.2 稳定性试验取样品（批号：110202），按2.2.1项下方法制备。分别于0、4、8、12、16h进样分析，记录峰面积，其RSD为0.62%，其结果表明供试品溶液在16h内稳定。

2.4.3 精密度试验精密吸取2.2.1项下对照品溶液10μl，分别重复进样5次，结果欧前胡素峰面积的平均值为344，其RSD为0.43%。结果表明，仪器精密度良好。

2.4.4 重复性试验取同一批号(110202)的样品5份，按2.2.1项下方法制备，测定含量，结果见表1。

表1 重复性试验

结果表明方法重复性较好。

2.4.5 回收率试验取本品（批号：110202）适量，共9份，约为2g的80%、100%、120%，精密称定，精密加入2.2.2项下贮备液1.0ml，按2.2.1项下方法制备，注入高效液相色谱仪，测定，计算回收率。测得欧前胡素平均加样回收率(n=9)为98.72%，RSD=0.75%。测定结果见表2。

表2 回收率实验（n=9）

结果表明，用高效液相色谱法测定欧前胡素含量准确度高。2.4.6含量测定按2.2.1项下方法制备，用0.45μm滤膜滤过，取续滤液，按2.1项下色谱条件测定，计算含量。(见表3)。

表3 样品含量测定结果

3 讨论

3.1 提取溶剂的选择选用了甲醇、75%乙醇、95%乙醇作为提取溶剂[3-4]，测定欧前胡素的含量，结果基本一致，参照药典相关品种项下方法，选用甲醇作为提取溶剂。

3.2 提取方式选择提取方法比较了超声提取和回流提取，结果接近，因超声相对简单易操作，且节省能源，故选用超声提取。

3.3 提取时间选择超声处理时间比较了15、30、60分钟，结果超声15分钟不能将欧前胡素提取完全，而超声30、60分钟均能将欧前胡素提取完全，考虑到节省时间，故选用超声处理30分钟作为供试品的提取时间。

[1]国家药典委员会.中国药典[M].一部.北京:中国医药科技出版社，2010:97-98.

[2]杨小花，胡晓.欧前胡素与异欧前胡素的药理学研究进展[J].南昌大学学报(医学版)，2012，95(3):95-96.

[3]戚继红，岳莉，沈伟.高效液相色谱法测定风湿定胶囊中欧前胡素和异欧前胡素的含量[J].中国实验方剂学杂志，2014，20(8):93-95.

[4]刘笑笑，曹蔚，王四旺.欧前胡素的提取分离方法和药理学研究进展[J].现代生物医学进展，2010，10(20):3954-3956.

Content Determination of Imperatorin in Urticaria Pill by HPLC

Cai Yili Zhou Xiusen
(Xinyang institute of food and drug control,Xinyang464000,China)

Objective To establish a method for content determination of imperatorin in Urticaria Pill by HPLC.Methods The experimental condition of the RP-HPLC method was as follows:DIONEX Acclaim 120 C18 column(5μm,250×4.6mm),with linear gradient elution using methanol and Water（55：45）;Detected wavelength was 300 nm.，The flow rate was 1.0ml/min，Column temperature was 30℃.Results Imperatorin demonstrated good linear relationship in the range 0.05～0.4μg（r=0.9999）,The average recovery rate was 98.72%with RSD of 0.75%.Conclusion The method is simple,reliable,accurate,reproducible and stable，and It could be used in the determination of Imperatorin in Urticaria Pill.

urticaria Pill;imperatorin,HPLC;content determination

10.3969/j.issn.1672-2779.2014.24.089

1672-2779（2014）-24-0157-02

张文娟 本文校对：周修森

2014-10-22）