副溶血性弧菌临床检验分析

杜 丽

哈尔滨市阿城区人民医院，黑龙江 哈尔滨 150300

副溶血性弧菌临床检验分析

杜 丽

哈尔滨市阿城区人民医院，黑龙江 哈尔滨 150300

目的探讨副溶血性弧菌的致病形态及临床检验方法。方法2010年5月～2012年9月，我院门诊收治由副溶血性弧菌引起的食物中毒及急性腹泻患者20例，经过对副溶血性弧菌提取培养后在不同环境生存时间进行检验对比。结果经反复试验对比分析副溶血性弧菌对不同水域环境适应性及对酸的耐受性时间，副溶血性弧菌淡水存活时间不到48小时，海水中存活时间超过47天，99%副溶血性弧菌在浓度2%的冰酸酸中将被杀死。结论通过对副溶血性弧菌的培养特性、生化反应、抵抗力、致病性等方面的检验分析能准确辨别其生存特性。

副溶血性弧菌；培养；检验

副溶血性弧菌属弧菌科、弧菌属，是一种嗜盐性细菌，存在于近海岸的海水、海底沉积物和鱼、虾、贝类等海产品中，通常分2个生物型：副溶血生物型，可污染食品，特别是海产品可引起食物中毒和急性腹泻；溶藻生物型，不能引起食物中毒，是弧菌属中最耐盐的致病菌，2个生物型都可引起局限性感染。

1 临床资料与方法

1.1 一般资料

选择2010年5月～2012年9月，我院门诊收治的由副溶血性弧菌引起的食物中毒及急性腹泻患者20例，其中男性患者13例，女性患者7例，年龄8～55岁，平均年龄35岁，临床主要症状为上腹绞痛、腹泻、大便呈水样，类似霍乱。经临床微生物检验显示均由食用大量海产品食物中毒所致。

1.2 采集方法与送检

采集患者大便标本l0 g左右，应盛于广口有塞的小瓶中，并注意防止溢出。肛门棉拭采样时，先将肛门棉拭蘸生理盐水湿润后，再徐徐插入肛门3～5 cm，肛拭共采3支，以供检验。采集的食品应盛于灭菌的广口瓶中[1]。采集后的标本送检时间为8小时以内，将标本置入碱性蛋白胨水中直接送检；超过8小时，则将粪便标本或直肠拭子置入Cary-Blais保存培养基中尽快送检。

1.3 检验方法

副溶血性弧菌的检验方法主要包括增菌培养和分离培养。（1）增菌培养：取食品5 g左右，加生理盐水10 ml，在无菌钵中研细成悬液或取粪便标本0.5～1.0 ml，以无菌操作接种到氯化钠甲紫增菌液中，37℃培养。如有副溶血性弧菌，一般数小时即出现明显浑浊，此时即可接种。（2）分离培养包括以下培养方式：①直接分离培养：取检材或40 g／L的氯化钠甲紫增菌液，分别接种到SS琼脂平板和嗜盐菌选择性琼脂平板各一个，37℃18～24小时培养后取出观察。②增菌后分离培养：取10 ml磨碎的食品样品，或粪便标本，加入100 ml增菌液中，放37℃ 8～16小时增菌后，涂上述平板进仃分离，37℃18～24小时培养后取出观察[2]。

1.4 统计分析

利用SPSS19.0软件建立数据统计库，分析采集的临床数据，计量数据采用χ2检验处理，结果显示P＜0.05，统计有统计学差异。

2 结果

经反复试验对比分析副溶血性弧菌的不同菌落（直径）在不同的培养基中呈现的颜色、形态，鉴定溶血反应出现后的致病株的形态结构，以及副溶血性弧菌对不同水域环境适应性及对酸的耐受性时间。发现副溶血性弧菌淡水存活时间不到48小时，海水中存活时间超过47天，99%副溶血性弧菌在浓度2%的冰酸酸中将被杀死。

3 讨论

副溶血性弧菌必须在普通营养琼脂或蛋白胨水中加入适量的食盐才能生长，最适食盐浓度为3.5%；副溶血性弧菌在无盐的培养基中则停止繁殖，而氯化钠含量超过8%亦不能生长。副溶血性弧菌生长所需的pH范围为7.0～9.5，最适pH为7.7。最适生长温度为37℃。副溶血性弧菌需氧性很强，副溶血性弧菌为革兰阴性，大小为0.7～1 μm的弧状、杆状、丝状等多形态的细菌，副溶血性弧菌无荚膜，无芽孢，在不同培养基中生长的细菌，菌体的形态可有不同，差异很大，排列一般不规则，多数是散在，偶或有成对的排列。副溶血性弧菌在不同培养基中培养形成分析如下：（1）副溶血性弧菌选择性培养基：形成直径1～2.5 mm大小，略隆起、浑浊、无黏性、菌落中心绿色较深。（2）SS琼脂平板：部分菌株不生长，能生长的菌落直径1～2 mm，扁平、无色、半透明，有时菌落中央呈一点突起，宛如蜡滴，菌落往往不易挑起，能被挑起的呈黏丝状，有辛辣味，培养48小时后菌落牢固的黏着于培养基。（3）营养琼脂：直径1.5 mm，菌落无色、圆整、隆起、浑浊、无黏性。（4）血琼脂平板：菌落直径约2 mm，圆形凸起、湿润，略带黄色或无色，某些菌株可形成甲型溶血。经血琼脂培养显示副溶血性弧菌主要呈卵圆形，一部分两端浓染并呈环形，少数呈球杆状或杆状，也有些呈丝状。副溶血性弧菌在28℃或37%的CO环境中培养时，菌体中央不染色者较多，副溶血性弧菌抗酸性较弱[3]。将副溶血弧菌接种于兔血琼脂平板中央成直径为l cm的涂面，置37℃环境下培养26～28小时后观察，如若周围有完全透明的溶血环出现，则为阳性。溶血反应是鉴定致病株与非致病株的一项重要指标。

副溶血性弧菌对酸敏感，在2%冰酸酸或普通食醋中5分钟死亡。人若食入其污染的食物，可引起食物中毒或急性肠炎，副溶血性弧菌的潜伏期3～24小时，多为l0～l4小时，副溶血性弧菌染病的主要症状为上腹绞痛、腹泻、大便呈水样，类似霍乱。对患者血清（从1∶5或1∶10开始做连续倍数稀释）做凝集试验，放置37℃环境中过夜，次日观察结果，阳性者可见有l∶20以上的效价，如在1∶40者可疑为阳性结果；一般阳性结果的效价为l∶80～1∶160。

综上所述，通过对副溶血性弧菌培养特性、生化反应、抵抗力、致病性等方面的检验分析，能准确辨别其生存特性。

［1］ 周春景，王健． 1起副溶血性弧菌食物中毒的实验室检测与分析[J]． 中国现代药物应用，2014 , 8（9）: 250．

［2］ 张倩华． 副溶血性弧菌实验室检测研究进展[J]． 吉林医学，2014（25）: 5720-5722．

［3］ 王均华，高海英，王亚平． 1起由副溶血性弧菌引起食物中毒的实验室检测报告[J]． 医学信息，2013，26(5): 360．

The Analysis on Clinical Testing of Vibrio Parahaemolyticus

DU Li, Acheng People’s Hospital, Haerbin Heilongjiang 150300, China

ObjectiveThe clinical test and morphology of vibrio parahaemolyticus is to be investigated.MethodsAnalyzed the treatment data selected from 20 cases of patients with food poisoning and acute diarrhea caused by vibrio parahaemolyticus who were treated in hospital from May 2010 to September 2012, tested and compared survival time of vibrio parahaemolyticus in different environments after extraction and nurture.ResultsBy testing consistently the adoption of vibrio parahaemolyticus to different aquatic environments and its tolerance to acid matters, it showed that the alive time of vibrio parahaemolyticus in freshwater was less than 48 hours, while, the alive time in seawater was more than 47 days, and 99 percent of vibrio parahaemolyticus could be killed if blended with 2 percent acid.ConclusionBy testing and analyzing the nurture characteristics, biochemical reactions, resistence, and pathogenicity and other aspects of vibrio parahaemolyticus, it can accurately distinguish its survival features of vibrio parahaemolyticus.

Vibrio parahaemolyticus, Nurture, Test

R440

B

1674-9316（2014）10-0050-02

10.3969/J.ISSN.1674-9316.2014.10.025