附子正丁醇萃取物的化学成分

何成军， 李小红， 耿 昭， 仰 莲， 郭 力， 彭 成

（成都中医药大学药学院，中药资源系统研究与开发利用省部共建国家重点实验室培育基地， 四川 成都611137）

附子正丁醇萃取物的化学成分

何成军， 李小红， 耿 昭， 仰 莲， 郭 力， 彭 成*

（成都中医药大学药学院，中药资源系统研究与开发利用省部共建国家重点实验室培育基地， 四川 成都611137）

目的 研究附子正丁醇萃取物的化学成分。方法 采用色谱技术进行分离纯化，利用理化性质及波谱技术鉴定化合物结构。 结果 从附子的正丁醇萃取物分离得到 9 个生物碱， 分别鉴定为尼奥灵 （1）、 附子灵 （2）、 异塔拉定（3） 、 subcusine（4） 、 塔拉萨敏 （5） 、 川附子碱 A（ 6） 、 易混翠雀花 碱 （7 ） 、 14-acetylkarakoline（8 ） 、 delstaphisine 8，14-deacetate（9）。 结论 化合物 9 为新天然产物， 化合物 8 为首次从该属中分离得到， 化合物 6 和 7 为首次从该植物中分离得到。

附子； 正丁醇萃取物； 生物碱； delstaphisine 8，14-deacetate； 新天然产物

附 子为毛 茛科植 物乌头 Aconitum carmichaelii Debx.子根的加工品， 收载于 《中国药典》 2010年版，其性大热，味辛、甘，有毒，入心、脾、肾，通行十二经络，具有回阳救逆、温里助阳、祛寒止痛的功效，用于亡阳虚脱、肢冷脉微、阳痿、宫冷、 心腹冷痛 等症［1］。 附子是我国传统医学临床治病 “回阳救逆” 要药。现代药理研究显示，附子具有强心、抗心率失常、提高免疫力、抗肿瘤、抗炎镇痛、舒张血管等药理活性，其中生物碱类成分被认为是其特征性活性成分［2-7］。

为进一步研究附子的物质基础，寻找生物活性的化合物，对附子的正丁醇部位进行了化学成分研究，从其中分离得到了9个化合物，其中化合物9为新的天然产物，化合物8为首次从该属中分得，化合物6和7为首次从该植物中分离得到。

1 材料

Bruker-400 型和 Bruker-600 型核磁共振波谱仪（德国 Bruker公司）； Waters Synapt G2 型质谱仪；XRC-1 型显微熔点测定仪 （ 未校正）； Búchi Gradient Former B-687 型中压液相色谱仪 （ Rp C18， 40-60 μ， Welch 公司）；MCI柱色谱 CHP 20P （日本Mitsubishi Chemical公司）； Sephadex LH-20 （瑞士Amershan Pharmacia公司）； 薄 层色谱 硅胶 GF254、柱色谱硅胶 （200-300 目）、 GF254硅胶制备薄层板（烟台江友硅胶开发有限公司）。 所用试剂均为分析纯；显色剂为改良碘化铋钾试液。

附子于 2010 年 7 月采自四川省江油市附子基地，经成都中医药大学中药鉴定教研室李敏教授鉴定为 毛茛 科 植 物乌 头 Aconitum carmichaelii Debx.的子根加工品，标本保存于成都中医药大学药学院标本馆 （SFZ-0710）。

2 提取与分离

干燥的附子药材粉末 5.5 kg，用 10 倍量 95%乙醇回流提取5次，每次3 h， 纱布过滤， 合并滤液，减压浓缩至无醇味，混悬于水中，依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取，回收溶剂分别得到石油醚部位、乙酸乙酯部位和正丁醇部位。正丁醇部位 （45 g） 用硅胶柱色谱分离， 三氯甲烷 -甲醇（100 ∶0-0 ∶100）梯度洗脱，得到 9 个洗脱部分A-I。 A部 分 经 MCI柱 色 谱、 反 复 硅 胶 柱 色 谱、Sephadex LH-20 柱色谱和制备薄层色谱等分离方法得到化合物 3 （18 mg）、4 （15 mg）、 6 （20 mg）、7 （30 mg） 和 8 （5.8 mg）。 B部分析出白色固体，经三氯甲烷重结晶，得到化合物 1 （2.5 g）。 I部分析出白色针晶，经甲醇重结晶，得到化合物2（1.0 g）； 剩余母液经 Sephadex LH-20 柱色谱和制备薄层色谱分离得到化合物 5 （10 mg） 和 9（5.5 mg）。

3 结构鉴定

化合物1： 白色块状结晶 （甲醇）； 碘化铋钾显色呈橘红色； mp 158 ～160 ℃； ESI-MS m/z438 ［ M +H］+； 460 ［ M+Na］+。1H-NMR（ CDCl3， 400 MHz）δ： 1.12 （3H， t， J=7.2 Hz， N-CH2CH3）， 3.32，3.32， 3.33 （ each 3H， s， 3 ×OCH3）。13C-NMR（ CDCl3， 100 MHz） δ： 72.3 （ C-1）， 29.4 （ C-2 ），30.0 （C-3）， 38.2 （ C-4），44.9 （ C-5）， 83.2 （C-6）， 52.2 （ C-7） ， 74.3 （ C-8）， 48.8 （ C-9 ） ， 40.4（C-10） ， 49.6 （ C-11 ）， 29.5 （ C-12 ）， 44.2 （ C-13），76.1 （ C-14）， 42.9 （ C-15 ）， 81.9 （ C-16 ），64.0 （ C-17 ）， 80.4 （ C-18 ）， 57.1 （ C-19 ）， 58.0（C-6'）， 56.5 （ C-16'）， 59.3 （ C-18'）， 48.4 （ NCH2CH3）， 13.2 （N-CH2CH3）。 以 上 数 据 与 文 献［8］ 报道基本一致， 确定化合物 1 为尼奥灵 （neoline）。

化合物2： 白色针状结晶 （甲醇）； 碘化铋钾显色呈橘红色； mp 208 ～209 ℃； ESI-MS m/z454 ［ M +H］+。1H-NMR（CD3OD， 600 MHz） δ： 1.43 （3H，t， J=6.6 Hz， N-CH2CH3）， 2.99 （2H， q， J= 6.6 Hz， N-CH2CH3）， 3.33， 3.35， 3.10 （each 3H，s， 3 ×OCH3）， 4.11 （1H， t， J=3.6 Hz， H-14β），4.41 （ 1H， d， J=6.6 Hz， H-15 ）。13C-NMR（CD3OD， 150 MHz） δ： 72.6 （ C-1）， 28.4 （ C-2），29.0 （C-3）， 39.3 （ C-4），45.3 （ C-5）， 83.6 （C-6）， 50.5 （ C-7） ， 79.2 （ C-8）， 48.6 （ C-9） ， 41.8（C-10） ， 51.0 （ C-11 ）， 31.6 （ C-12 ）， 43.7 （ C-13），79.9 （ C-14）， 76.1 （ C-15 ）， 92.6 （ C-16 ），64.4 （ C-17 ）， 79.2 （ C-18 ）， 57.6 （ C-19 ）， 58.5（C-6'）， 58.9 （ C-16'）， 59.5 （ C-18'）， 48.7 （ NCH2CH3）， 10.9 （ N-CH2CH3）。 以 上 数 据 与 文 献［9］ 报道基本一致， 确定化合物 2 为附子灵 （fuziline） 。

化合物 3： 白色无定形粉末 （甲醇）； 碘化铋钾显色呈橘红色； ESI-MS m/z408 ［M+H］+。1HNMR（CDCl3， 600MHz） δ： 3.04 （1H， J=8.4 Hz，H-18a）， 3.13 （ 1H， J=8.4 Hz， H-18b）， 3.32，3.35 （each 3H， s， 2 ×OCH3）， 3.76 （1H， br s，W1/2=5.8 Hz， H-1β） ， 4.22 （1H， t， J=4.8 Hz，H-14β）。13C-NMR（ CDCl3， 150 MHz）δ： 72.6 （ C-1）， 29.5 （ C-2） ， 25.0 （ C-3）， 37.9 （ C-4） ， 25.0（ C-6 ）， 45.5 （ C-7 ）， 74.0 （ C-8）， 47.8 （ C-9 ），44.4 （ C-10 ）， 48.9 （C-11）， 28.3 （ C-12）， 39.6（C-13） ， 75.9 （ C-14 ）， 42.0 （ C-15 ）， 81.9 （ C-16），79.2 （ C-18）， 56.5 （ C-19）， 56.3 （ C-16'），59.6 （ C-18'）， 14.2 （ N-CH2CH3）。 以上数据与文献 ［10］报道基本一致，确定化合物 3 为异塔拉定 （ isotalatizidine） 。

化合物 4： 白色无定形粉末 （甲醇）； 碘化铋钾显色呈橘红色； ESI-MS m/z424 ［M+H］+。1HNMR（CD3OD， 400 MHz） δ： 1.08 （3H， t， J= 7.2 Hz， N-CH2CH3）， 3.32， 3.34 （each 3H， s， 2 × OCH3）。13C-NMR（CD3OD，100 MHz） δ： 73.4 （ C-1）， 29.7 （ C-2） ， 30.0 （ C-3）， 39.2 （ C-4） ， 49.0（ C-5 ）， 73.5 （ C-6 ）， 51.2 （C-7）， 76.4 （ C-8 ），45.5 （C-9）， 42.0 （C-10）， 49.6 （C-11），31.5 （C-12）， 45.5 （ C-13）， 76.1 （ C-14 ）， 42.6 （ C-15 ），84.3 （ C-16 ）， 64.5 （C-17）， 81.0 （ C-18）， 58.6（C-19）， 57.1 （ C-16'），59.4 （ C-18'）， 48.4 （ NCH2CH3）， 12.7 （ N-CH2CH3）。 以 上 数 据 与 文 献［11］ 报道基本一致，确定化合物 4 为 subcusine。

化合物5： 白色无定形粉末 （甲醇）； 碘化铋钾显色呈橘红色； ESI-MS m/z 422 ［ M+H］+。1HNMR （ CDCl3， 400 MHz）δ：1.11 （ 3H，t， J= 7.2 Hz， N-CH2CH3）， 3.27， 3.28， 3.33 （each 3H， s， 3 ×OCH3）。13C-NMR（CDCl3， 100MHz） δ： 85.8（ C-1 ）， 27.6 （ C-2 ）， 31.9 （ C-3）， 38.6 （ C-4 ），45.8 （C-5）， 24.7 （ C-6），48.8 （ C-7）， 72.7 （C-8）， 49.7 （C-9）， 45.6 （C-10）， 48.4 （C-11）， 29.4（C-12） ， 36.9 （ C-13 ）， 77.2 （ C-14 ）， 38.6 （ C-15）， 82.1 （ C-16）， 63.5 （ C-17 ）， 77.3 （ C-18 ），53.4 （C-19）， 56.5 （ C-16'），59.5 （ C-18'），14.1（N-CH2CH3）。 以上数据与文献 ［12］ 报道基本一致， 确定化合物 5 为塔拉萨敏 （talatisamine）。

化合物6： 白色胶状物 （甲醇）； 碘化铋钾显色呈橘红色；ESI-MS m/z 438 ［M+H］+。1H-NMR（CD3COCD3， 600 MHz） δ： 1.08 （ 3H， t， J= 7.2 Hz， N-CH2CH3）， 3.28， 3.34， 3.41 （each 3H，s， 3 ×OCH3）。13C-NMR（CD3COCD3， 150 MHz） δ：73.1 （ C-1）， 28.5 （ C-2）， 31.2 （ C-3）， 37.9 （ C-4）， 45.5 （ C-5） ， 83.8 （ C-6）， 51.6 （ C-7 ） ， 75.9（C-8）， 46.6 （ C-9）， 45.6 （ C-10）， 49.0 （ C-11），30.7 （ C-12 ）， 41.0 （ C-13 ）， 77.0 （ C-14 ）， 41.6（C-15） ， 82.7 （ C-16 ）， 65.9 （ C-17 ）， 78.4 （ C-18），58.3 （C-19 ），57.5 （C-6'），56.0 （ C-16'），59.1 （ C-18'）， 49.4 （ N-CH2CH3）， 13.3 （ NCH2CH3）。 以上数据与文献 ［13］报道基本一致，确定化合物 6 为川附子碱 A （senbusine A）。

化合物7： 白色无定形粉末 （甲醇）； 碘化铋钾显色呈橘红色； ESI-MS m/z 450 ［ M+H］+。1HNMR（CD3COCD3， 600 MHz） δ：1.10 （3H， t， J= 7.2 Hz， N-CH2CH3）， 2.02 （3H， s， COCH3）， 3.02（1H， J=8.4 Hz， H-18a）， 3.16 （1H， J=9.0 Hz，H-18b）， 3.25， 3.28 （ each 3H， s， 2 ×OCH3）， 3.67（1H， br s， W1/2=5.6 Hz， H-1β）， 4.80 （1H， t，J=4.8 Hz， H-14β）。13C-NMR （ CD3COCD3，150 MHz） δ： 72.7 （ C-1）， 30.0 （ C-2），30.2 （C-3）， 38.5 （ C-4） ， 42.1 （ C-5）， 25.9 （ C-6 ） ， 47.1（C-7）， 74.5 （ C-8）， 44.3 （ C-9）， 44.6 （C-10），49.0 （ C-11 ）， 27.6 （ C-12 ）， 38.1 （ C-13 ）， 77.4（C-14） ， 42.9 （ C-15 ）， 83.4 （ C-16 ）， 64.2 （ C-17），79.6 （ C-18）， 57.3 （ C-19）， 56.1 （ C-16'），59.4 （ C-18'）， 49.0 （ N-CH2CH3）， 13.3 （ NCH2CH3）， 170.7 （-COCH3）， 21.1 （-COCH3）。 以上数据与文献 ［10］ 报道基本一致， 确定化合物 7为易混翠雀花碱 （condelphine）。

化合物8： 无色无定形粉末 （甲醇）； 碘化铋钾显色呈橘红色； ESI-MS m/z 420 ［ M+H］+。1HNMR （CDCl3， 400 MHz） δ： 0.90 （3H， s， CH3），1.14 （3H， t， J=7.2 Hz， N-CH2CH3） ， 2.07 （3H，s， CH3CO）， 3.27 （ 3H， s， OCH3）13C-NMR（ CDCl3， 100 MHz）δ： 72.2 （C-1）， 30.9 （ C-2），29.1 （C-3）， 32.8 （ C-4），43.3 （ C-5）， 29.5 （C-6）， 45.5 （ C-7） ， 74.8 （ C-8）， 46.2 （ C-9） ， 50.9（C-10） ， 49.1 （ C-11 ）， 29.7 （ C-12 ）， 44.7 （ C-13），76.7 （ C-14）， 42.6 （ C-15 ）， 82.0 （ C-16 ），63.1 （ C-17 ）， 36.6 （C-18）， 60.2 （ C-19）， 56.1（C-16'）， 170.5 （-COCH3）， 21.4 （-COCH3）， 48.5（N-CH2CH3）， 13.8 （ N-CH2CH3）。 以上数据与文献 ［14］报道基本一致， 确定化合物 8 为 14-acetylkarakoline。

化合物9： 无色无定形粉末 （甲醇）； 碘化铋钾显色 呈 橘 红 色； ESI-MS m/z 424 ［ M+H］+。1H-NMR （CDCl3，400 MHz）δ： 1.07 （3H，t， J= 7.2 Hz， N-CH2CH3）， 3.26， 3.30 （each 3H，s， 2 × OCH3）；13C-NMR（ CDCl3， 100 MHz） δ： 72.1 （ C-1）， 29.3 （ C-2） ， 30.0 （ C-3）， 37.9 （ C-4） ， 43.9（ C-5 ）， 82.3 （ C-6 ）， 53.4 （ C-7）， 74.4 （ C-8 ），47.9 （C-9）， 41.9 （C-10）， 49.6 （C-11），29.3 （C-12）， 45.4 （ C-13）， 77.4 （ C-14 ）， 44.7 （ C-15 ），72.3 （ C-16 ）， 63.7 （ C-17 ）， 80.1 （ C-18 ）， 57.2（ C-19 ）， 58.3 （ C-6'）， 59.2 （ C-18'） ， 48.3 （ NCH2CH3）， 12.7 （N-CH2CH3）。 以 上 数 据 与 文 献［15］ 报道基本一致， 确定化合物 9 为 delstaphisine 8，14-deacetate。

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Chem ical constituents of n-BuOH extract of lateral roots of Aconitum carmichaelii

HE Cheng-jun， LIXiao-hong， GENG Zhao， YANG Lian， GUO Li， PENG Cheng*
（Chengdu University of Traditional Chinese Medicine， State Key Laboratory Breeding Base of Systematic Research Development and Utilization of Chinese Medicine Resources， Sichuan Province and Ministry of Science and Technology， Chengdu 611137， China）

AIM To study the chemical constituents of n-BuOH extract of the lateral roots of Aconitum car-michaelii.METHODS The constituentswere isolated by column chromatography on silica gel and Sephadex LH-20， and identified by spectroscopic methods.RESULTS Nine alkaloids were isolated from the n-BuOH extract and identified as neoline（1） ， fuziline（2） ，isotalatizidine（3） ， subcusine（4） ， talatisamine（ 5） ，senbusine A（6） ， condelphine（ 7 ） ， 14-acetylkarakoline（ 8 ） ， delstaphisine 8，14-deacetate（9 ）.CONCLUSION Compound （9） is a new natural product， compound 8 is obtained from the genus Aconitum for the first time， and compounds6 and 7 are isolated from this plant for the first time.

lateral roots of Aconitum carmichaelii；n-BuOH extract；alkaloids；delstaphisine 8，14-deacetate；new natural product

R284.1

： A

： 1001-1528（2014）05-1004-04

10.3969/j.issn.1001-1528.2014.05.026

2013-06-20

“十二五” 国家科技支撑计划课题 （2010BAE00406）； 2012 年博士点基金联合资助课题 （0125132110006）

何成军 （1989—） ， 男， 硕士生， 研究方向： 天然药物化学。 Tel： 13699449413， E-mail： heye1217@163.com

*通信作者： 彭 成， 男， 教授， 博士生导师， 研究方向： 中药药理和毒理。 Tel： 13708001778， E-mail： pengchengchengdu@126.com

日期： 2013-12-26

网络出版地址： http： //www.cnki.net/kcms/detail/31.1368.R.20131226.1546.001.htm l