苏子提取物对高脂血症家兔血脂调控效果及作用机理的研究

■黄 军王安忠赵 超

（1.河北农业大学成人教育学院，河北保定 071000；2.河北学业大学动物医学院，河北保定 071000；3.河北农业大学动物科技学院，河北保定 071000）

苏子是传统的药食两用植物，为唇形科紫苏属植物，传统医学认为苏子具有解表散寒、行气和胃的功效[1]。苏子提取物提炼自紫苏的种子，其中富含α-亚麻酸，据有关报道认为α-亚麻酸在紫苏油中含量高达56%～64%，甚至高达84.5%[2]。而α-亚麻酸具有调节血脂、抗氧化的功效。目前苏子及其提取物已在动物生产中广为应用，但是关于苏子提取物对动物血脂调控效果及其可能的调控机理研究还不多见，鉴于此，本研究系统研究了苏子提取物对高脂血症家兔血脂的调控效果并分析其对家兔体内调控脂质代谢相关酶类的影响，以期为实现畜产品绿色、保健而开发新型饲料添加剂做出贡献。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1苏子购自河北省安国市中药材市场，苏子提取物（EPS）由河北农业大学中兽医学院畜牧生产实验室提取，浓度为1 g/ml原药。

1.1.2 试验动物：4月龄力克斯兔100只，雌雄各半，由河北农业大学动物科技学院獭兔养殖基地提供。

1.1.3 试剂

胆固醇（上海源聚生物科技有限公司,批号：061030）；三酰甘油测定试剂盒、总胆固醇测定试剂盒、高密度脂蛋白测定试剂盒、低密度脂蛋白测定试剂盒,（均购自南京建成生物制品研究所）；载脂蛋白AI(APoAI)测定试剂盒、载脂蛋白B(APoB)测定试剂盒（中生北控生物科技股份有限公司）；卵磷脂胆固醇酰基转移酶(LCAT)测定试剂盒（sigma公司）；兔肝脂酶（HL）ELISA试剂盒（上海沪宇生物科技有限公司）；兔脂蛋白脂酶ELISA试剂盒（上海华壹生物科技有限公司）。

1.1.4 仪器

AV2700生化分析仪（olympus）；TissueLyserll高通量组织匀浆器（德国QIAGEN公司）；漩涡混匀器（合肥艾本森科学仪器有限公司）；5415R低温高速离心机（德国 EPPPENDORF公司）；恒温水浴锅（上海博迅）；TriStar LB941酶标仪（德国BERTHOLD）。

1.2 试验方法

1.2.1 分组

选取100只4月龄体重2.5 kg左右健康无病的力克斯兔，雌雄各半，随机分为正常对照组(NC)、高脂模型组（HLM）、低EPS处理组（low dosage of EPS,LD）、中EPS处理组（medium dosage of EPS,MD）、高EPS处理组（high dosage of EPS,HD），每组20只，每组设4个重复，每个重复5只。NC组饲喂基础日粮+10 ml/d蒸馏水灌胃，HLM组饲喂高脂日粮+10 ml/d蒸馏水灌胃，LD组饲喂高脂日粮+10 ml/d浓度0.2 g/ml的苏子提取物，MD组饲喂高脂日粮+10 ml/d浓度0.6 g/ml的苏子提取物，HD组饲喂高脂日粮+10 ml/d浓度为1.2 g/ml的苏子提取物，各组力克斯兔每日上午10点灌胃一次。基础日粮构成及营养成分含量见表1。高脂日粮参照王玉明等(2011)，胆固醇1%，蛋黄粉15%，猪油10%，基础日粮74%[3]。

表1 基础日粮构成及营养水平

1.2.2 饲养条件及样品采集

试验用兔单笼饲养，室内温度控制在20℃，湿度控制在70%，每天早中晚各饲喂一次，自由饮水。经10 d预饲养进入正式试验，试验期60 d。试验结束后第1 d，禁食12 h，空腹耳中动脉采血，分离血清，待测。每组没重复随机抽取力克斯兔一只，枕骨大孔处死，取肝脏，4℃生理盐水处理，于右肝距肝叶边缘5 mm处取1 g肝组织，加冰生理盐水9 ml，在4℃条件下制成10%肝匀浆，4 000 r/min离心10 min后取上清液[4]，待测肝脂酶（HL）、脂蛋白脂酶（LPL）。

1.3 数据处理

应用统计软件SPSS11.5中的LSD法统计。各组统计数据以“平均值±标准差”表示，样本比较采用t检验，P＜0.05为显著性差异。

2 结果与分析

2.1 EPS对血脂调控效果分析（见表2）

表2 EPS对血脂水平的影响（mmol/l）

由表2可知，在经过60 d饲养试验后HLM组TG、TC、HDL-C、LDL-C均高于NC组，差异达极显著水平（P＜0.01）;LD组TG、TC、LDL-C水平低于HLM组，且差异显著（P＜0.05）；MD、HD组TG、TC、HDL-C、LDL-C水平低于HLM组，差异极显著（P＜0.01）。说明EPS具有调控血脂的功效。

2.2 EPS对载脂蛋白的影响（见表3）

表3 EPS对载脂蛋白的影响

由表3可知，试验末期HLM组的ApoAⅠ、ApoAⅠ/ApoB低于NC组，ApoB高于NC组，差异极显著（P＜0.01）；各水平灌喂EPS组，ApoAⅠ高于HLM组，差异极显著（P＜0.01）；ApoAⅠ/ApoB高于HLM组，其中LD组与HLM组相比差异显著（P＜0.05），MD组、HD组与HLM组相比差异均达到极显著水平（P＜0.01）。ApoB方面各EPS处理组均低于HLM组，其中LD组、MD组与HLM组相比差异显著（P＜0.05），HD组与HLM组相比差异极显著（P＜0.01）。并且EPS在本试验应用范围内，呈现一定的剂量效应。

2.3 EPS对脂质代谢相关酶的影响（见表4）

表4 EPS对脂质代谢相关酶的影响

由表4可知，试验末HLM组的LCAT、HL、LPL低于NC组，差异极显著（P＜0.01）；各EPS处理组LCAT、HL、LPL高于HLM组，差异极显著（P＜0.01）；EPS能够起到调控脂质代谢相关酶的作用，随着EPS处理灌服水平的增高，LCAT、HL、LPL水平呈递增趋势，其中MD组的HL和LPL水平，HD组的LCAT和LPL水平，与NC组不存在统计学差异（P＞0.05）。

3 讨论

食物中脂肪含量和脂肪酸构成是影响人类高血脂症和心脑血管疾病发生率的重要因素。现代医学证明血清TC水平是导致冠心病的独立危险因素，血清TC水平每降低1%，冠心病的发生率减少2%[5]。血清HDL-C与LDL-C是一对对立体，正常比例在1∶2左右，HDL-C有消除胆固醇的作用，而LDL-C水平升高是导致动脉粥样硬化的主要诱因[6]。TG水平往往因摄入食物中胆固醇水平和脂肪水平变化很大，但过高的TG水平会诱发冠心病的重要因素。本研究发现苏子提取物能够起到降低血清TC、TG、LDL-C，提高HDL-C的作用，有利于维护动物心脑血管系统的健康。

ApoAⅠ、ApoB是动物体内两个重要的载脂蛋白，其中ApoAⅠ具有激活LCAT的功效，通过激活LCAT的活性而加强胆固醇的逆向转运，降低体内胆固醇水平[7]。ApoB主要存在于LDL-C，是LDL-C的主要载体蛋白，在体内起到运输内源性胆固醇、TG、LDL-C代谢起主要作用，其运输的上述物质在血管壁沉积是导致动脉粥样硬化的主要原因。HL和LPL是体内参与脂质代谢的两种主要酶类，主要作用是催化乳糜微粒（CM）和极低密度脂蛋白(VLDL)中的甘油三酯降解。而CM的主要作用是运输外源性甘油三酯和胆固醇，其所携带的甘油三酯水解有利于胆固醇被肝脏吸收、清除[8]。VLDL的主要功能是运输内源性甘油三酯，其水平升高会导致TG、TC升高[9]。本研究表明苏子提取物能够提高ApoAⅠ、LCAT、LPL、HL水平,降低ApoB水平，提高ApoAⅠ/ApoB。这一结果也从理论上与本研究在EPS对血脂水平影响中取得的结果一致。因此本研究认为苏子提取物能够通过改变载脂蛋白ApoAⅠ、ApoB水平，提高LCAT、HL、LPL活性调节脂肪代谢。但是脂肪代谢调控涉及到多因子、多酶系的协同作用，关于苏子提取物对其他途径的影响作用有待于进一步研究。