铜与锌对钼中毒小鼠免疫功能的影响

■王 珅 毕聪明 梁军生 肖银霞

(辽宁医学院畜牧兽医学院，辽宁锦州121001)

钼(Mo)是黄嘌呤氧化酶的组成成分,参与和影响机体内多种物质的代谢,是动物必需的微量元素，具有重要的生物学作用。同时，Mo也是动物消化道微生物的生长因子，被微生物吸收，适量的Mo可以促进消化。动物一般不出现Mo缺乏症，但易出现中毒现象。目前，关于钼对羊、小鼠、鸡的营养物质消化代谢影响以及钼中毒对免疫功能的影响的研究报道较多[1-3]。锌、铜合理的营养水平可强化动物的防御和免疫系统，增强动物对疾病的抵抗能力，但有关锌、铜对小鼠高钼的免疫保护的研究未见详细报道。本研究拟以小鼠为试验动物，探讨高Mo添加水平对小鼠免疫功能的影响，以期为钼中毒的免疫保护研究提供参考。

1 材料与方法

1.1 试验材料

钼酸钠、硫酸铜、硫酸锌，粉末状固体，饲料级，由辽宁凯为生物科技有限公司提供。

1.2 试验动物及设计

采用完全随机分组试验设计，选用100只昆明小鼠，日龄和体重相近，试验前基础日粮预饲1周，随机分为5个组，每组4个重复，每个重复5只，试验分组见表1，试验期为30 d。

表1 试验分组

1.3 饲养管理

试验在辽宁医学院畜牧兽医学院临床实验室进行，在试验前，对饲养室进行全面刷洗，消毒，自然光照通风，正试期小鼠自由采食，水槽供水。

1.4 试验方法

定期采血，作全血涂片，福尔马林-丙酮缓冲液固定。醋酸染色液常温染色浸染2 h，水洗晾干，1%甲基绿溶液复染1 min，冲洗晾干。油镜下计数100个淋巴细胞，淋巴细胞细胞质中有褐红色颗粒为T淋巴细胞，没有褐红色颗粒的为B淋巴细胞。计算出T、B淋巴细胞的百分率，并根据白细胞计数和分类计数结果计算其绝对值。球蛋白含量的测定采用美国IDEXX全自动血液生化分析仪测定。

1.5 数据处理

应用SPSS13.0统计软件中的One-way ANOVA进行单因素方差分析，LSD进行多重比较，P＜0.01为差异极显著，P＜0.05为差异显著，数据采用“平均值±标准差”表示。

2 结果与分析

2.1 外周血T淋巴细胞百分率变化（见表2）

表2 外周血T淋巴细胞百分率变化(%)

从表2结果可以看出，30 mg/kg钼添加剂量能降低小鼠外周血T淋巴细胞百分率，试验Ⅰ组小鼠26 d与1 d相比T淋巴细胞百分率下降了12.2%；试验Ⅱ组、Ⅲ组、Ⅳ组26 d与1 d相比小鼠T淋巴细胞百分率分别降低了7.3%、3.1%、1.1%。26 d试验Ⅳ组与试验Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组相比差异显著（P＜0.05），说明铜锌联合组能有效地拮抗钼酸钠引起的外周血T淋巴细胞百分率下降，并且其效果优于单独添加铜和锌。

2.2 外周血B淋巴细胞百分率变化(见表3)

表3 外周血B淋巴细胞百分率变化(%)

从表3可以看出，30 mg/kg钼添加剂量能降低小鼠外周血B淋巴细胞的百分率，试验I组小鼠26 d B淋巴细胞百分率比1 d下降了15.1%；26 d与1 d相比，铜添加的试验II组、锌添加的试验Ⅲ组和铜锌联合添加的试验Ⅳ组B淋巴细胞分别下降了5.6%、3.8%、2.3%，试验26 d试验Ⅳ组与试验Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组相比差异显著（P＜0.05），与对照组比较差异不显著（P＞0.05）,说明铜锌联合添加能很好地对抗钼酸钠的免疫损伤。

2.3 血清球蛋白含量的变化(见表4)

表4 血清球蛋白含量的变化(g/l)

由表4可知，试验Ⅰ组（30 mg/kg钼添加剂量）在第16 d开始降低小鼠血清中球蛋白的含量，与对照组相比差异显著（P＜0.05）；试验Ⅱ组和试验Ⅲ组也是从16 d开始大幅度降低血清球蛋白的浓度，与对照组相比差异显著（P＜0.05），但Ⅰ组和Ⅱ、Ⅲ组之间差异不显著，说明单独添加铜和锌对小鼠钼中毒造成的免疫损伤不能起到很好的保护作用；试验Ⅳ组和对照组相比差异不显著（P＞0.05），说明铜与锌联合使用能够协同保护钼中毒小鼠的免疫损伤。

3 讨论

3.1 钼对小鼠免疫功能的影响

微量元素钼是动物营养中必需微量元素，具有许多生物学功能，能促进动物生长，提高动物的生产性能，对动物的免疫、代谢及发育等都起着重要的作用[4]。动物缺钼时发育受阻，幼龄动物尤其表现明显。研究证实，适量的钼对肉牛有促生长作用，对乳牛有促进产奶量的效果。适量的钼能提高机体细胞的免疫力，试验证明，适量的钼可以提高雏鸡和小鼠免疫器官的质量、生长指数，而过量的钼可以引起免疫器官的病理损伤[5]。试验表明，饲料中添加30 mg/kg的钼对小鼠造成了免疫损伤，降低了小鼠外周血中的淋巴细胞比率，并且降低血清中的免疫球蛋白含量。

3.2 铜与锌对小鼠免疫功能的影响

铜缺乏可以引起胸腺、脾脏的萎缩，淋巴细胞减少，脾脏生产IL-1、巨噬细胞产生IL-1B和IL-6的能力以及淋巴细胞合成IL-2的能力减弱。本试验表明，添加15 mg/kg铜在一定程度上降低了钼所致的免疫损伤，但保护作用不明显。研究表明，铜与钼有吸收拮抗作用，但添加铜未见到明显的保护。锌是动物免疫系统发育和维持功能的关键物质，研究表明，补锌可以提高外周淋巴细胞转化率。本试验证明，补锌可以降低由于钼中毒所致的淋巴细胞减少幅度，但单独补锌对血清球蛋白的降低未见明显的保护作用。试验表明，在饲料中同时添加铜和锌对钼中毒所致的淋巴细胞减少和血清球蛋白降低有很好的保护作用。

4 结论

每千克饲料中同时添加15 mg的铜与锌能有效保护钼中毒小鼠的免疫损伤，锌在蛋白质中与巯基结合比较稳定，在其他元素间的调控中起着主导作用。锌能作用于造血系统的不同环节，协同完成造血功能，从而在对抗钼中毒中发挥提升外周血T淋巴细胞和B淋巴细胞的作用。锌也能抑制钼在肠道的吸收，降低钼毒性，锌有竞争性置换钼的作用，从而治疗中毒。