胃和冲剂II号对慢性萎缩性胃炎大鼠EGF和EGFR表达的影响

2014-01-20 07:36丽麻春杰杨喜平
世界中医药 2014年1期
关键词:冲剂萎缩性表皮

雷 丽麻春杰杨喜平

(1内蒙古自治区包头市肿瘤医院放疗科,包头,014030;2内蒙古医科大学中医学院中医基础教研室,呼和浩特,010020)

胃和冲剂II号对慢性萎缩性胃炎大鼠EGF和EGFR表达的影响

雷 丽1麻春杰2杨喜平2

(1内蒙古自治区包头市肿瘤医院放疗科,包头,014030;2内蒙古医科大学中医学院中医基础教研室,呼和浩特,010020)

目的:观察胃和冲剂Ⅱ号对CAG(Chronic Atrophic Gastritis,CAG)大鼠胃黏膜EGF和EGFR表达的影响,探讨胃和冲剂Ⅱ号治疗CAG的作用机制。方法:将72只雄性W istar大鼠随机分为正常对照组12只和造模组60只。除正常对照组外,其余各组大鼠均使用综合造模法成功复制CAG动物模型。然后将造模组分为5组,分别为模型组,维酶素对照组,胃和冲剂Ⅱ号低、中、高剂量组。对各组大鼠施加相应治疗因素60 d后,取各大鼠相同部位全层胃壁组织,采用免疫组化法分别检测胃黏膜组织的EGF和EGFR的表达水平。结果:EGF在胃和冲剂Ⅱ号高剂量组中的表达值为(1.25±0.16),低于CAG大鼠模型组的表达值(2.98±0.15),差异有统计学意义(P<0.01);胃和冲剂Ⅱ号高剂量组EGFR的表达值为(1.636±0.809),低于模型组的表达值(3.300±1.337),差异有统计学意义(P<0.01)。结论:胃和冲剂Ⅱ号可能通过降低胃黏膜组织的EGF和EGFR的表达,加快胃黏膜细胞的修复和抑制过度增殖,从而对CAG起到治疗作用。

胃和冲剂Ⅱ号;慢性萎缩性胃炎;EGF;EGFR

表皮生长因子(Epidermal Growth Factor,EGF)是分子量为6 045道尔顿的多肽,主要由颌下腺、胰腺和小肠分泌,是参与胃黏膜损伤修复过程中最重要的肽类物质。表皮生长因子受体(Epidermal Growth Factor Receptor,EGFR)是正常上皮、间质、神经源性组织中表达的一类蛋白受体。当EGFR与其配体表皮生长因子结合后,一方面可以抑制胃酸分泌,促进胃黏膜细胞分泌前列腺素,保护胃黏膜[1-2];另一方面对于细胞增殖、存活、黏附、转移及血管发生都发挥着重要作用[3-4]。90%的恶性肿瘤特别是在上皮源性的肿瘤,其表皮生长因子受体与细胞的凋亡、增殖、分化、迁移及细胞周期循环关系密不可分,在良、恶性病变转化过程中起着非常重要的作用。我们对表皮生长因子及其受体在慢性萎缩性胃炎中的表达及胃和冲剂II号的干预作用进行了研究。

1 材料与方法

1.1 设计 随机对照动物实验。

1.2 材料 雄性Wistar大鼠72只,体重(180± 20)g,内蒙古大学实验动物研究中心提供。合格证号:SCXK(蒙)2002-0001。

1.3 试剂和仪器 大鼠表皮生长因子(EGF)酶联免疫分析(ELISA)试剂盒,由美国ADLITTERAM DIAG-NOSTICLABORATORIES公司提供,标号:RT110371。鼠抗人上皮生长因子受体免疫组化单克隆抗体,福州迈新生物技术开发有限公司,批号:100803196A。DAB显色试剂盒,福州迈新生物技术开发有限公司,批号:100907414E。S-P超敏试剂盒,福州迈新生物技术开发有限公司,批号:10083197201。电热恒温箱XMT-152A;冰箱伊莱克斯BCD-263;压力锅AS18-35-80;电热恒温水槽cataNo.0415-21466c;组织切片机德国莱卡RM2235;光学显微镜OLYMPUSBX41;酶联免疫检测仪DG3022A型国营华东电子管厂制造;医用图像分析系统LOGENE-1(朗珈)。25%氨水,天津市大茂化学试剂厂。

1.4 方法

1.4.1 实验药物 胃和冲剂II号:半夏、党参、干姜、黄连、黄芩、丹参等组成,制成袋装,每袋12g,由内蒙古中蒙医院国家蒙药制剂中心提供,批号:20061001。维酶素片,河北环海药业有限公司生产,批号:20070609。

1.4.2 动物模型的复制 将72只Wistar大鼠随机分为正常对照组12只和造模组60只,按照《中药药理实验方法学》给大鼠1%氨水为饮料自由饮用[5],同时热盐水(55℃,150g/L氯化钠)灌胃[6],1次/d,每次2.5 mL,并结合饥饱失常(2d足食,1d禁食)。造模90d,经病理形态学确定成功后,将CAG大鼠再随机分为模型组、胃和冲剂II号低剂量组、胃和冲剂II号中剂量组、胃和冲剂II号高剂量组和维酶素阳性对照组。对照组大鼠每日灌服蒸馏水2.5mL。

1.4.3 给药方法 对照组:每日按10mL/kg大鼠体重灌服蒸馏水;模型组:每日按10mL/kg大鼠体重灌服蒸馏水;胃和冲剂II号低、中、高剂量组:给药剂量分别为2g/kg、4g/kg、8g/kg大鼠体重;维酶素组:按0.5g/kg大鼠体重给药。连续灌胃给药60d。

1.4.4 指标检测 实验结束,处死大鼠,取胃,用电子天平在腺胃部称取0.5g胃组织,眼科小剪刀尽快剪碎,置于匀浆器中,加入9倍量的冰生理盐水,用匀浆器制成10%的组织匀浆(匀浆器的末端置于放冰块的冷水中),3500r/min离心15min,取上清液置4℃冰箱保存,按大鼠表皮生长因子(EGF)ELISA试剂盒说明书要求在酶联免疫检测仪上检测EGF的含量;取各大鼠相同部位(沿胃小弯自前胃至幽门取全层胃壁1块(3mm×20mm)的胃组织条块固定在10%中性甲醛液中作常规的石蜡切片、HE染色等以观察病理组织变化及进行免疫组化,检测EGFR表达情况。

1.5 主要观察指标 各组大鼠胃黏膜组织表皮生长因子含量、表皮生长因子受体的表达量。

1.6 统计学分析 所有数据分析采用统计软件SPSS 16.0。数据以(±s)表示,组间差异采用单因素方差分析,P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 实验动物数量分析纳入大鼠72只,于造模过程中死亡1只,造模结束后抽样处死7只,64只进入结果分析。

2.2 免疫组化染色、图像分析采用双盲法进行观察,EGFR结果判断标准:阳性信号主要定位于细胞膜。根据染色反映的深度及阳性细胞的数量判断,按经典免疫组化评分标准进行评分,高倍镜下选择5个有代表性视野,出现黄色颗粒为阳性染色,将染色强度分为4级:无黄色颗粒为0级,计0分;淡黄色颗粒为1级,计1分;黄色颗粒为2级,计2分;棕色颗粒为3级,计3分。将细胞染色阳性百分比分为4级:阳性细胞数<25%为(-),26%~49%为(+),50%~75%为(+ +),>75%为(+++),分别计为0~3分。两者评分相加为最终评分。

2.3 通过检测各组大鼠胃组织EGF的含量,结果显示:与正常组相比,各造模组CAG大鼠胃组织EGF的含量显著升高(P<0.01);而给药干预各组大鼠胃组织的EGF的含量较模型组降低(P>0.05),特别是胃和冲剂高剂量组大鼠胃黏膜组织中的EGF含量降低明显(P<0.01)。具体数据见表1。

表1 胃和冲剂II号对大鼠胃黏膜EGF含量的影响

表2 胃和冲剂II号对大鼠胃黏膜EGFR蛋白表达的影响

2.4 通过测定不同组的CAG大鼠胃黏膜组织EGFR表达情况,发现与对照组大鼠相比,模型组大鼠胃黏膜组织中的EGFR蛋白表达明显升高(P<0.01);与模型组大鼠相比,胃和冲剂高剂量组大鼠胃黏膜组织中的EGFR蛋白表达明显降低(P<0.01),中剂量组大鼠胃黏膜组织中的EGFR蛋白表达降低(P<0.05);与维酶素组相比胃和冲剂高剂量组的大鼠胃黏膜组织中EGFR蛋白表达降低(P<0.05),中、低剂量组大鼠胃黏膜组织中的EGFR蛋白表达没有差异(P>0.05),具体数据见表2和图1。

图1 大鼠胃黏膜EGF免疫组化图片(200×)

3 讨论

慢性萎缩性胃炎是胃黏膜表面反复受到损害后导致的病变,表现为腺体萎缩、数量减少,胃黏膜变薄,或伴炎性反应、肠上皮化生及不典型增生,易反复发作,临床较难治愈,为胃癌癌前状态之一,癌变率为2.55%~7.46%[7]。

表皮生长因子与其受体结合后可进一步激活STAT3及MAPK信号传导通路,促进细胞增殖并抑制凋亡,在细胞增殖、存活、粘附、转移及血管发生中起重要作用[8-9]。作为一个广泛表达的基因,EGFR的突变和高表达在肿瘤的发生发展过程中起着非常重要的作用。研究发现EGFR在非萎缩性胃炎组织中表达最低[10],随着病变逐渐进展至萎缩性胃炎、肠化生和异型增生,EGFR的表达将会持续增高,持续过度表达则有促进慢性萎缩性胃炎发展和癌变的危险[11-12]。因此EGFR被认为与促进正常细胞恶性转化、刺激细胞无限增殖[13]最终导致胃癌发生有密切关系。

胃和冲剂Ⅱ号方由半夏、党参、干姜、黄连、黄芩、炙甘草、大枣、丹参等组成,临床中该方治疗慢性胃炎具有良好效果[14]。前期研究表明,胃和冲剂Ⅱ号能够明显改善大鼠CAG病损程度,增加CAG大鼠胃窦黏膜腺体层厚度,降低胃窦黏膜肌层厚度,恢复萎缩的腺体,减轻炎症反应[15],充分证实了胃和冲剂Ⅱ号对CAG大鼠的治疗作用,并能提高CAG大鼠血清抗氧化酶活性等。

本实验结果显示:高、中剂量胃和冲剂Ⅱ号的疗效显著优于维酶素;低剂量胃和冲剂Ⅱ号的疗效与维酶素无显著差异。中药复方从多系统、多靶位的整体水平治疗本病具有一定的优越性。因此,可以推论:高、中剂量胃和冲剂II号通过降低EGF及其受体EGFR在胃黏膜的表达,抑制胃酸分泌,促进胃黏膜细胞分泌前列腺素,促进未成熟壁细胞向成熟壁细胞方向分化,从而保护胃黏膜,同时抑制细胞增殖、存活、粘附、转移及血管发生,起到逆转肠化或癌变的作用。

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(2013-05-16收稿 责任编辑:徐颖)

The Effect of W eihe G ranule II on the Expression Level of EGF and EGFR in CAG Rats

Lei Li1,Ma Chunjie2,Yang Xiping2
(1 Department of Radiation Oncology,Baotou Tumor Hospital,Baotou 014030,China;2 College of Traditional Chinesesmedicine,Inner Mongolia Medical University,Hohhot 010020,China)

Objective:To explore the treatment effect ofWeihe granule IIon CAG by analyzing the expression level of EGF and EGFR in gastricmucosal ofmodel rats of CAG treated with Weihe granule II.Methods:Seventy-twomale Wistar ratswere random ly divided into two groups,control group(n=12)and model group(n=60).The ratmodel of CAG inmodel group was created using comprehensive modelingmethod.Then,all rats inmodel group were assigned into five sub-groups,namelymodel sub-group,Vitacoenzyme control subgroup,low-dose sub-group,mediate-dose sub-group and high-doseWeihe granule IIsub-groups.After all rats in each group were subjected to the corresponding treatments for 60 days,the expression level of EGF and EGFR in the same gastric tissue of each ratwere be examined and compared with other groups.Results:The expression of EGF in the high-doseWeihe granule IIsub-group(1.25±0.16)was lower than that in model sub-group(2.98±0.15),(P<0.01);the expression of EGFR,in the high-dose Weihe granule IIsubgroup(1.636±0.809)was lower than that inmodel sub-group(3.300±1.337)(P<0.01).Conclusion:Weihe granule IIcan treat CAG by decreasing the expression levels of EGF and EGFR in gastricmucosal to repair the gastricmucosal cells and inhibit the excessive proliferation for cancer prevention.

Weihe granule;Chronic atrophic gastritis;EGF;EGFR

R243;R573.3+2

A

10.3969/j.issn.1673-7202.2014.01.029

内蒙古卫生厅医疗卫生科研计划项目(编号:2010022)

杨喜平,E-mail:529224683@qq.com

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