通窍鼻渊丸制备过程中栀子苷转移率的实验研究

肖正国，李喜香，刘效栓，姜玲艳

(甘肃省中医院，甘肃兰州730050)

通窍鼻渊丸为我院院内制剂，由栀子、辛夷、葛根、川芎等15味中药组成，为半粉末浓缩丸。栀子为其主药。栀子是茜草科植物Gardenia jasminoides Ellis的干燥成熟果实，性味苦寒，入心、肝、肺、三焦经，具有抗炎、镇痛、解毒之功效［1］。栀子属植物中含有黄酮类(栀子素类)、环烯醚萜类(栀子苷类)、三萜类(栀子花酸类)和有机酸脂类(绿原酸)等多种化合物，而栀子苷是栀子药材中环烯醚萜类的代表成分。2010版《中国药典》规定：栀子苷为栀子药材药效成分评价的指标［2-4］。本实验探讨了通窍鼻渊丸在制备的各个环节中，栀子苷含量变化的规律，以期为生产提供一定的理论依据。

1 药品、试剂与仪器

所用药材饮片购自兰州安泰堂中药饮片公司、兰州方正药业有限公司，经甘肃省中医院药物分析实验室检定，符合2010版《中国药典》各药材项下规定的标准。栀子苷对照品，供含量测定用，由中国药品生物制品检定所提供，批号110749-200714;甲醇(批号20100410)，乙腈(批号20100410)，为色谱纯，由天津市科米欧化学试剂开发中心提供;含量测定用水为娃哈哈纯净水;提取用水为饮用水。美国Waters 2695高效液相色谱仪，包括Waters 2487双通道紫外检测器;Sartorius R-200D电子天平，产地德国;HM500型电热套，北京科伟仪器公司产品;KQ2500DE型超声波清洗器，昆山超声仪器有限公司产品;HHS数显恒温水浴锅，北京科伟仪器公司产品;TYPE-YUG101型全自动速控中药制丸机、微波真空干燥仪，均为甘肃天水华圆制药设备有限公司产品。

2 方法与结果

2.1 药材细粉配料

按处方比例称取栀子、辛夷、葛根、川芎等15味药材细粉共 55.6 g，其中栀子6.3 g，辛夷3.3 g。细粉过120目筛，用倍研法混合均匀。

2.2 浸膏的制备

按处方比例称取栀子、辛夷、葛根、川芎等15味药材粗粉共209 g，其中栀子24 g，辛夷6 g。粗粉过3号筛，加水煎煮3次，加水量分别为10倍、8倍、8倍，合并滤液，减压浓缩至稠膏，收膏110 g，干燥失重45%，干膏得率52.6%。

2.3 成品总混合粉制备

浸膏与药材细粉按2∶1的比例混合，制丸成形，40℃微波真空干燥8 min，得丸剂110.5 g。取一定数量的浓缩丸粉碎，得总混合粉。

2.4 栀子苷含量测定

2.4.1 色谱条件

色谱柱(Symmetryshield RP18，4.6 mm ×250 mm，5 μm)，流动相为甲醇 ∶水(13∶87)，流速1 mL/min，检测波长238 nm，进样量10μL，柱温为室温。理论塔板数按栀子苷峰计，不低于1500［5-6］。

2.4.2 对照品溶液的制备

精密称取栀子苷对照品8.02 mg，加甲醇溶解，稀释定容至50 mL，制成160.4 mg/L的对照品储备液，备用。精密吸取储备液 0.2，0.6，1.0，4.0，8.0，10.0 mL置10 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，分别得到 3.208，9.624，16.04，64.16，128.32，160.40 mg/L的对照品甲醇溶液。

2.4.3 供试品溶液的制备

分别精密称取2.1，2.2，2.3 项下的细粉、浸膏、总混合粉各1 g，以及栀子药材(细粉∶粗粉质量比为6∶24)0.1 g，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25 mL，称定质量，超声处理20 min，放冷;再称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过;精密量取续滤液10 mL，置25 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，0.45μm微孔滤膜过滤即得。

2.4.4 阴性对照溶液的制备

按照2.1，2.2，2.3 项下的方法制备不含栀子的浓缩丸，精密称取1 g，参照2.4.3方法，制成阴性对照溶液。

2.4.5 线性关系考察

精密吸取2.4.2项下栀子苷对照品溶液各10μL进样测定，以峰面积(A)为纵坐标，浓度(C)为横坐标进行回归，得回归方程 A=320.619C+28 277.210，r=0.999 2(n=6)。表明：栀子苷在3.208～160.40 mg/L范围内峰面积与浓度的线性关系良好。

2.4.6 精密度试验

取3.208 mg/L的栀子苷对照品溶液按2.4.1项下色谱条件，连续进样6次，峰面积的RSD值为0.18%(n=6)。

2.4.7 稳定性试验

精密吸取2.4.3项下的供试品溶液在 0，2，4，8，10，12 h各进样10μL，记录峰面积。结果峰面积的RSD=0.28%，表明供试品溶液在12 h内稳定。

2.4.8 重复性试验

分别精密称取 2.1，2.2，2.3 中的样品各 5 份，照2.4.3的方法各制备5份样品溶液，进行测定。结果：栀子苷峰面积的 RSD值分别为 0.28%、0.42%、0.29%(n=5)。

2.5 含量测定

分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照品溶液各10μL进样，按上述色谱条件进行测定。结果表明，阴性对照溶液色谱图与样品溶液位置处无干扰(见图1～5)，此方法可行。

2.6 结 果

栀子原料药材中栀子苷含量以2.098%计，结果按下列公式计算［7］：

每g样品中栀子苷的含量=［实测浓度(mg/L)×25L/10 g/L］×0.025 L

每g细粉中栀子苷理论投入量=1×6.3/55.6×2.098% ×100% ×103

每g浸膏中栀子苷理论投入量=1×24/110×2.098% ×100% ×103

每g成品中栀子苷理论投入量=1×(30.3×2.098%) ×100%/110.5 ×103

栀子苷转移率=每g样品中栀子苷含量/理论投入量×100%，结果见表2。

表2 实验结果

3 讨论

根据《中国药典》规定［1］，栀子药材中之栀子苷的含量不低于1.8%。以此为依据，在目前的条件下，院内制剂通窍鼻渊丸中栀子苷含量应不低于0.45 mg/g;以此可作为鼻渊丸质量内控标准的依据。从表2的实验数据可知，我们以往采用的水提浓缩工艺相对落后，资源浪费较大。浸膏制作过程栀子苷只有7.25%被利用，由原料到成品转移率不到10%，究其原因，可能有以下几点：①提取不完全。据文献报道，与栀子环烯醚萜苷的溶解性相匹配的溶剂的极性，在乙酸乙酯与甲醇之间［8］，而大部分文献采用500～600 g/L)的稀乙醇提取［9］。②浓缩中破坏。即使在减压条件下，水提液浓缩时温度亦在60℃以上，生产上很难控制。③干燥时的温度［10］。尽管中药复方制剂成分复杂，只使用单一有效成分分析，难以全面表达制剂质量的全面性和系统性［11］，但由原料至成品，毕竟栀子苷损失了90%之多。如何提高栀子苷转移率，同时尽量减少其他有效成分的损失，是研究的关键。在进一步研究中，笔者采用乙醇为溶剂，以干膏得率和栀子苷含量结合，综合评分为考察指标，均匀设计优选出正确的提取工艺：即乙醇浓度为527.3 g/L，固液比为10.82倍，提取时间为60.91 min，提取次数为 3 次［12］。工艺验证中，栀子苷转移率提高到32.5%。

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