大麻药生品和三种炮制品的急性毒性比较

陈旅翼，兰 洲，林亲雄，邓旭坤，赵喻丹，何凤莲

(1中南民族大学药学院，武汉430074;2湖北中医药大学药学院，430065)

大麻药(Radix Dolichosae)为豆科植物镰扁豆(Dolichos falcatus Kalcatus Klein)的根或叶，别名麻里麻、麻三段、豆叶百步还阳等［1］.分布于在我国云南、四川、甘肃等地，尤以云南为多.本品性辛、麻、温，有毒，具有祛风活血、止血止痛等功效.在云南民间主要用于骨折、跌打损伤、风湿疼痛，治疗外伤出血，能抗癌、利尿［2-4］，其根的主要化学成分有三萜皂甙、生物碱、黄酮等［5-8］.

大麻药有毒，如误食中毒则会出现恶心、呕吐、腹泻、头晕、乏力、舌及全身发麻、血压下降、心率减慢、缩瞳以至休克的毒性症状.因目前对大麻药的毒性物质基础和毒性机理研究甚少，阻碍了其临床的合理应用.白族地区主要采用麸制、姜制与酒制等炮制方法改变大麻药的辛湿药性和降低其毒性［9］.为更好地阐明这些炮制方法的科学内涵，进一步研究大麻药的毒效物质基础，建立大麻药规范化的炮制方法，本文对大麻药生品、姜制品、麸制品和酒制品的急性毒性进行了比较研究.

1 实验材料

1.1 药品和试剂

大麻药生品(20110512)，产于大理市宾川县太和镇，购于昆明市菊花村药材市场;生姜、麦麸、50度白酒购于副食品市场，乙醇等试剂均为分析纯.

1.2 动物

健康昆明种小鼠(S04110700C)，SPF级，雄雌各半，体重(20±2)g，购于华中科技大学实验动物中心.

2 实验方法

2.1 各种炮制品的制备

姜制品:取切片好的生品500 g，加等量生姜(捣烂)，置于锅中，加水，以武火煮沸，文火持续30 min，至口尝稍有辛麻感时，捞出，拣去生姜渣，晒干，备用.

麸制品:取切片好的生品500 g，加麸皮50 g，同置锅内，用文火炒至有焦斑(持续时间30 min)，起锅，筛去麸皮，研细粉.

酒制品:以50度白酒1000 g，加入干大麻药粉50 g(粉碎，过80目筛)，浸泡20日左右.

2.2 不同制品药材提取

称取生品、姜制品、麸制品各100 g，粉碎，过80目筛.各称取50 g，分别加入10，8，6倍量水提取3次，提取时间分别为2，1.5，1h，水提物合并，5000 r/min离心10 min后，上清液分别冷冻干燥，得三者水提物干膏(批号20120825得率15.2%;20120827得率15.0%;20120829 得率 16.1%).酒制品 5000 r/min离心10 min后，加压回收至干(批号20120902得率18.1%).适量称取样品，加蒸馏水配制成一定浓度的药液备用.

2.3 急性毒性实验

生品组、姜制组、麸制组和酒精制4个组均设5个剂量组，生品组和酒制组分别为 4.0，3.0，2.25，1.69，1.27 g·kg－1(r=0.75);姜制组和麸制组分别为5.3，4，3，2.25，1.69 g·kg－1(r=0.75).210 只昆明小鼠，按体重随机分成21组(1个空白对照组和20个药物组).小鼠禁食不禁水12 h后，按40 mL·kg－1灌胃给药1次;空白组给以等体积的蒸馏水.连续观察14 d，记录小鼠的毛色、精神、动度、进食、饮水等一般情况、中毒症状及死亡情况.在给药后30 min内，连续不间断观察;30 min～2 h，持续可间断观察;2～4 h，每20 min观察1次;4～8 h，每1 h观察1次;8～24 h，每4 h观察1次;第2天起，每天观察1次.

2.4 统计分析

LD50采用蓝宙药学专业软件系列之LD50数据处理程序(Version 1.01)处理.体重各组数据以()表示，所有数据采用 SPSS 11.5软件 One way ANOVA方式进行方差分析，α=0.01.

3 结果

3.1 生品组小鼠急性毒性结果

小鼠灌胃生品大麻药10 min后出现怠动、腹泻、心跳加速，唾液分泌增加等毒性反应，24 h后开始逐渐缓解、消失.不同剂量生品组给小鼠灌胃急性毒性症状见表1，由表1可见，小鼠毒性症状的发生率呈现一定的剂量相关性，剂量越大，其毒性症状越严重，4.0g·kg－1剂量组 100% 出现腹泻和唾液增加，80%出现怠动，70%出现心跳加速.说明大麻药生品对小鼠的消化系统和心血管系统有较强的毒性作用.

表1 大麻药生品组小鼠急性毒性症状Tab.1 The acute toxic symptoms of the raw Radix Dolichosae-treated mice

不同剂量生品小鼠灌胃后不同时间的累计死亡数见图1.由图1可见，大麻药生品组小鼠于给药后0.5 h开始出现死亡，多数在给药4 h后未见死亡数增加.给药 14 d 后，4.0，3.0，2.25，1.69，1.27 g·kg－1剂量组小鼠死亡率分别为90%、80%、70%、50%、20%.

图1 大麻药生品组小鼠时间-累积死亡曲线Fig.1 The time-cumulative death curve of the raw Radix Dolichosae-treated mice

3.0，2.25，1.69，1.27 g·kg－1各组存活小鼠体重变化见图2.由图2可见，给药后1 d，对照组小鼠体重有所增加，而各给药组体重则均有不同程度的降低，给药后4 d，2.25，1.69，1.27 g·kg－1组小鼠体重均开始有不同程度的回升，给药后6 d，3.0 g·kg－1剂量组小鼠体重也开始回升.至给药后14d，各给药组小鼠体重分别增加1～4g.

根据各药物组小鼠死亡率，用Bliss法计算生品各剂量组小鼠口服LD50，得大麻药生品组灌胃给药的LD50=1.84 g·kg－1，95%可信限为(1.57～2.15)g·kg－1.

图2 大麻药生品组小鼠体重变化Fig.2 Body weight changes of the raw Radix Dolichosae-treated mice

3.2 姜制组小鼠急性毒性结果

各剂量姜制组小鼠灌胃后急性毒性症状见表2.由表2可见，小鼠灌胃姜制大麻药20 min后出现怠动、腹泻、心跳加速，唾液分泌增加等毒性反应，且毒性症状的发生率呈剂量相关性，上述症状于药后24 h开始逐渐缓解、消失.与同等剂量的生品组相比，姜制组小鼠的毒性症状明显减轻，且发生率明显降低，表明大麻药姜制后能明显改善其对消化系统的毒副作用.

表2 大麻药姜制组小鼠急性毒性症状Tab.2 The acute toxic symptoms of the ginger processed product-treated mice

灌胃后不同时间各剂量组累计死亡数见图3.由图3可见，大麻药姜制组小鼠于给药后0.5 h开始出现死亡，多数在给药4 h后未见死亡数增加.给药14 d 后，4.0，3.0，2.25，1.69，1.27 g·kg－1剂量组小鼠死亡率分别为90%、70%、60%、40%、20%.

各剂量组存活小鼠体重变化见图4.由图4可见，给药后1 d，对照组小鼠体重有所增加，给药组体重则均有不同程度的降低;给药后 4 d，3.0，2.25，1.69 g·kg－1组小鼠体重均有不同程度的回升，给药后6 d，4.0 g·kg－1剂量组小鼠体重也开始回升.至给药后14d，各给药组小鼠体重分别增加1.8～4g.

根据各药物组小鼠死亡率，用Bliss法计算姜制组小鼠口服LD50，得大麻药姜制组灌胃给药的LD50=2.69 g·kg－1，95% 可信限为(2.42～2.98)g·kg－1.

3.3 麸制组小鼠急性毒性结果

麸制组给小鼠灌胃急性毒性症状见表3.由表3可知，小鼠灌胃麸制大麻药20 min后出现怠动、腹泻、心跳加速，唾液分泌增加等毒性反应，且毒性症状的发生率呈剂量相关性，上述症状于药后24 h开始逐渐缓解、消失.与同等剂量的生品组相比，麸制组小鼠腹泻和唾液分泌增加等毒性症状明显减轻，且发生率明显降低，表明大麻药麦麸制后能明显改善其对消化系统的毒副作用.

图3 大麻药姜制组小鼠时间-累积死亡曲线Fig.3 The time-cumulative death curve of the ginger processed product-treated mice

图4 大麻药姜制组小鼠体重变化Fig.4 Body weight changes of the ginger processed product-treated mice

表3 大麻药麦麸组小鼠急性毒性症状Tab.3 The acute toxic symptoms of the bran processed product-treated mice

各剂量组灌胃后不同时间的累计死亡数见图5.由图5可见，大麻药麦麸组小鼠于给药后0.5 h开始死亡，多数在给药4 h后未见死亡数增加.给药14 d 后，5.3，4.0，3.0，2.25，1.69 g·kg－1剂量组小鼠死亡率分别为90%、80%、60%、30%，20%.

图5 大麻药麸制组小鼠时间－累积死亡曲线Fig.5 The time-cumulative death curve of the bran processed product-treated mice

各剂量组存活小鼠体重变化见图6.由图6可见，给药后1 d，对照组小鼠体重有所增加，给药组体重则均有不同程度的降低，给药后 4 d，3.0，2.25，1.69 g·kg－1组小鼠体重均有不同程度的回升，给药后6 d，4.0 g·kg－1剂量组小鼠体重也开始回升.至给药后14d，各给药组小鼠体重分别增加2～4g.

图6 大麻药麸制组小鼠体重变化Fig.6 Body weight changes of the bran processed product-treated mice

根据各药物组小鼠死亡率，用Bliss法计算生品组小鼠口服LD50，得大麻药麦麸组灌胃给药的LD50=2.70g·kg－1，95%可信限为(2.47～2.95)g·kg－1.

3.4 酒制组小鼠急性毒性结果

酒制组各剂量给小鼠灌胃急性毒性症状见表4.表4结果表明:小鼠灌胃酒制大麻药10 min后出现怠动、腹泻、心跳加速，唾液分泌增加等毒性反应，且毒性症状的发生率呈现一定的剂量相关性，以上症状于给药后24 h开始逐渐缓解、消失.与同等剂 量生品组相比，酒制组无明显改善毒性症状的作用.

表4 大麻药酒制组小鼠急性毒性症状Tab.4 The acute toxic symptoms of the wine processed product-treated mice

各剂量组灌胃后不同时间的累计死亡数见图7.由图7可见，大麻药酒制组小鼠于给药后0.5 h开始死亡，多数在给药4 h后未见死亡数增加.给药14 d 后，4.0，3.0，2.25，1.69，1.27g·kg－1剂量组小鼠死亡率分别为90%、80%、70%、50%、30%.

图7 大麻药酒制组小鼠时间-累积死亡曲线Fig.7 The time-cumulative death curve of the wine processed product-treated mice

各剂量组存活小鼠体重变化见图8.由图8可见，给药后1 d，对照组小鼠体重有所增加，给药组体重则均有不同程度的降低，给药后4 d，2.25，1.69，1.25 g·kg－1组小鼠体重均有不同程度的回升，给药后6 d，3.0 g·kg－1剂量组小鼠体重也开始回升.至给药后14d，各给药组小鼠体重分别增加0.2～1.2g.

图8 大麻药酒制组小鼠体重变化Fig.8 Body weight changes of the wine processed product-treated mice

根据各药物组小鼠死亡率，用Bliss法计算生品组小鼠口服LD50，得大麻药酒制组灌胃给药的LD50=1.71g·kg－1，95% 可信限为(1.58～1.85)g·kg－1.

3.5 各组LD50转换成生药材量的结果

为更好比较各炮制品的毒性大小，通过药材的提取率转化成生药材量科学计算LD50后结果见表5.由表5可知，大麻药经麦麸制和姜制后，能显著降低其毒性;而酒制后，毒副反而增强.

表5 各组生药材的LD50Tab.5 The LD50values of the raw drugs in different groups

4 讨论

药材经合理的炮制，可增效减毒或改变药性等.如麸炒可以增强疗效，具有补脾的作用，也可缓和某些作用猛烈药物的药性.生姜味辛、性温，升腾发散而走表，能发表散寒、温中、止呕、开窍、解毒，药物经姜炮制后能抑制寒性，增强疗效，降低毒性.酒性温、味甘苦辛，入心肝肺胃经，功能通血脉、御寒气、行药势，可治疗风寒痹痛、筋脉挛急、胸痹、心腹冷痛等，还能增强药物功效，降低药物的毒副作用.传统记载，姜制与麸制可减缓大麻药的毒副作用，大麻药姜制后内服治疗风湿骨痛、跌打损伤，每服干粉1g;麸制后用于消炎镇痛，外伤出血，撒于伤口，内服量2g;酒制则主要外用，忌内服［9］.

本实验中小鼠口服大麻药生品及其炮制品后，其LD50由大至小分别为姜制品，麸制品，生品与酒制品.说明姜制与麸制后，能显著降低大麻药的毒性，缓和其药性;而酒制后药物的毒性反而增强，因浓度为50%的乙醇和水所提得的成分不同，毒性成分更易被高浓度醇所提出所致.此外，姜制和麸制能显著的改善小鼠的外观毒性症状，如腹泻和唾液分泌增加，表明姜制和麸制可缓和大麻药猛烈的药性，降低其对胃肠道系统的强烈刺激作用.而酒制无此效果.

总之，本实验结果与传统记载基本吻合，表明大麻药传统炮制用药的合理性.这将为后期大麻药炮制前后毒效物质成分与毒效作用的变化及建立大麻药规范化的炮制方法奠定基础，并为大麻药在民族地区科学、合理用药提供科学依据.

［1］云南省卫生局革命委员会.云南中草药［M］.昆明:云南人民出版社，1971.

［2］田成国，杨燕云.大麻药抗癌有效成分的研究［J］.中草药通讯，1977，12(2):8-12.

［3］黄厚聘，程才芬，林文琴，等.大麻药总皂苷的抗癌作用［J］.中国药理学报，1982，3(4):286-288.

［4］贵阳医学院病理学教研组.大麻药对小鼠移植性肿瘤细胞呼吸的影响［J］.科学通报，1975，20(7):339-342.

［5］浦湘渝，吴大刚，杨崇仁.大麻药的三萜皂苷成分(1)［J］.云南植物研究，1984，6(3):321-324.

［6］冯胜初，徐任生，韩国强.大麻药皂苷的结构鉴定［J］.中草药，1985，16(1):47.

［7］王 琼，王 真.大麻药化学成分研究［J］.云南大学学报:自然科学版，2011，33(5):583-585.

［8］彭金咏，许丽娜，韩 旭，等.大麻药中两个新异戊烯基黄酮的高速逆流色谱分离制备［J］.分析化学，2007，10(35):1444-1448.

［9］田华咏.中国民族药炮制集成［M］.北京:中国古籍出版社，2000:41-42.