袋鼠暴发科贡氏艾美尔球虫的诊治

王国栋 陈 蓉 程家球 李明杰 陈 楠 章小小 金 铃

(江苏省南京市红山森林动物园兽医院，江苏南京 210028)

袋鼠是一种较为原始的哺乳动物，具有较高的观赏价值。球虫病给动物园袋鼠养殖带来了较大的危害。2012年9月，南京红山动物园新引进的10只袋鼠粪便中发现球虫虫卵，不久后死亡一只袋鼠。经实验室检查，确诊为科贡氏艾美尔球虫感染。

1 病例报道

2012年9月，该动物园引进10只袋鼠(5只赤袋鼠、5只灰袋鼠)，隔离饲养后，在粪便中发现球虫。其中，1只袋鼠在第1 d发现血便后，第2 d晚上死亡。剖检可见，从十二指肠起整个肠道都严重出血，并以十二指肠段最为严重；肠壁呈现许多菊花样结节，刮取肠道内容物触片可见球虫卵囊和疑似裂殖子。该群发病率为100%(10/10只)，死亡率为10%(1/10只)。全群立即投喂复方新诺明，并在饮水中投喂球虫净。对于拉稀严重的袋鼠，进行输液对症治疗。每天对笼舍地面、食槽、水槽等场所设施进行火焰消毒。每天对袋鼠粪便进行球虫镜检，经过7 d的疗程，病情得到基本控制。20 d后，粪便检查不到球虫卵囊。

2 实验室检查

2.1 细菌分离

无菌采集病死袋鼠的肝脏、心脏接种至血平板中，37℃培养24 h，均未见细菌。

2.2 粪便检查

对袋鼠粪便采用直接涂片镜检，发现许多淡黄色、长卵圆形、接近微卵孔端其壁变薄的球虫未孢子化卵囊。测量约50个未孢子化卵囊，大小约32.5～40.5μm×19～21.3μm(平均33.2 μm×19.3μm)(见图1)。同时，可见大量卵圆形的孢子化卵囊，大小平均约33.7μm×19.22μm，均有4个子孢子，平均大小约9.75μm×8.6μm(见图2)。根据形态学观察，判定该球虫为科黄氏艾美尔球虫。

图1 袋鼠球虫未孢子化卵囊(40×)

图2 袋鼠球虫孢子化卵囊(40×)

2.3 袋鼠球虫卵囊分离收集

将采集的粪便，加水淘洗，先后过40目、200目尼龙筛。滤液进行初步的离心沉淀(3 000 r/min，离心5min)弃去上清液。沉淀加入2.5%重铬酸钾液，28℃恒温箱培养，期间每日对培养液轻轻搅拌3～5次，并观察卵囊孢子化情况，当有80%以上的卵囊发育为孢子化卵囊时，停止培养，收集卵囊保存备用。

2.4 最短孢子化时间的测定

将肠道卵囊收集液置于直径为14.5cm的培养皿中，液面高度1cm，卵囊浓度约为30×104个/mL，记录培养温度和开始培养的时间，于第24h、48h、96h分别检查卵囊孢子化率情况，自开始培养的时间起至镜检发现折光体出现，以及4个孢子囊完全分开所需的时间即为最短孢子化时间。通过观察，发现该球虫最短孢子化时间为48 h(见图3和图4)。

图3 24h的卵囊(40×)

图4 48h的卵囊(40×)

2.5 寄生部位

刮取病死袋鼠的肠道内容物，涂片镜检，发现从十二指肠起整个肠道均有球虫卵囊和裂殖子。肠壁呈现许多菊花样结节，以十二指肠最为严重。该球虫卵囊主要寄生部位为十二指肠。

3 讨论

1898年，Barker首次报道了艾美耳球虫感染袋鼠[1]。之后，J. P. Dubey、Adam W. Stern等作者报道了在袋鼠肠道切片中发现艾美耳球虫[2、3]。但是只能证明球虫可以感染袋鼠，却无法证明球虫能引起袋鼠的临床症状。2010年，D.F. Twomey报道了腹泻红颈大袋鼠的柔嫩艾美耳球虫，并对其卵囊、孢子囊进行了测量，首次将柔嫩艾美耳球虫与袋鼠的致病性相联系[4]。与之相比，国内动物园袋鼠患球虫病的报道次数较多，有学者认为与袋鼠密集饲养而导致小环境中球虫卵囊大量富集引起临床症状有关[5]。1998年，上海某野生动物园报道新引进的成年红颈袋鼠暴发威尔坎尼亚艾美耳球虫病，并引起腹泻等症状，发病率61.3%(38/62)，病死率为39.2%(15/38)，损失较为严重[6]。此次，该群袋鼠具有典型的腹泻症状，排除细菌感染，球虫的虫种鉴定也与国内报道存在差异。由于袋鼠非常珍贵，无法通过回归实验证明该球虫的致病性，但从临床症状及病原的单一性，可以推测该球虫具有一定的致病性。这是首次国内报道袋鼠的致病性科贡氏艾美尔球虫，给动物园兽医工作者敲响了警钟。

通过对虫卵的收集，观察球虫不同时期的形态，经南京农业大学寄生虫教研室鉴定，该球虫为科贡氏艾美尔球虫。本文留下大量袋鼠球虫不同时期的显微图片，也初步对其生物学特性进行研究。结果发现宿主可为灰袋鼠和赤袋鼠，卵囊主要寄生部位为十二指肠，其最短孢子化时间为48 h。同时，该球虫比重较大，漂浮法并不适合该球虫的收集，而沉淀法能够收集到较多的虫卵。这些资料填补了国内袋鼠球虫生物学信息的空白，为进一步防治袋鼠球虫病奠定基础。

本次暴发的袋鼠球虫病，发病起因与之前国内的报道相似，均由于引进袋鼠时环境改变导致其机体抵抗力下降而引起。在野外，袋鼠多为球虫感染，并不表现临床症状，只有当环境改变、长途运输、饲养密度增加等因素刺激下虫卵富集，才导致临床症状的表现。因此，当引进袋鼠时，要适当延长隔离时间，并对其粪便进行检查，确保无球虫感染。同时，可以适当进行预防性用药。

本病例由于发现及时，确诊早和及时治疗，很快得到了控制，减少了经济损失。球虫主要通过粪口途径传播，又因大多数消毒水对虫卵的杀伤力不强，因此及时清理粪便、火焰消毒食槽、水槽和地面，可以较好的切断传播途径。袋鼠球虫病给动物园造成了较大的经济损失，应当引起兽医工作者的重视。

[1]Barker，I. K.，O’Callaghan，M. G. ＆ Beveridge，I. Host-parasite associationsof Eimeria spp(Apicomplexa：Eimeriidae)in kangaroos and wallabies of the genus Macropus(Marsupialia：Macropodidae)[J]. International Journal for Parasitology，1989，19：241-263.

[2]J. P. Dubey，William J. Hartley.Steatitis in a red kangaroo(Macropusrufus)associated with a coccidia-like protozoon[J]. J Vet Diagn Invest，4：93-96(1992).

[3]Adam W. Stern .A retrospective study of disease in captive kangaroos from Oklahoma State University，1995-2009[J]. J Vet Diagn Invest，2010，22：324-326.

[4]D. F. Twomey，N. J. Vine，M. E. Wessels，and et al. Eimeria prionotemniassociated Coccidiosis in a Bennett’s wallaby(Macropus rufogriseus)[J].Veterinary Record，2010，167，621-622.

[5]夏咸柱，高宏伟，华育平.野生动物疾病学[M].高等教育出版社，2011.

[6]徐春忠，陈晓兰，夏述忠.成年袋鼠暴发球虫病的诊治[J].畜牧与兽医.1998，30(1)：23.