辛伐他汀对糖尿病大鼠颈动脉的保护作用

禹晓宁 焦建寅 (南京师范大学校医院，江苏 南京 210042)

目前，糖尿病及其所并发的大血管病变发展迅速，其大血管病变以多支、多处、弥漫病变为主，主要累及主动脉、冠状动脉、脑动脉、肾动脉和周围血管等大血管，是影响2型糖尿病患者生活质量及致残、致死的主要原因之一〔1，2〕。他汀类药物是近年来发现的一种行之有效的调脂药，具有显著的降脂作用。本研究拟通过动物实验拟探讨辛伐他汀对糖尿病大鼠颈动脉的保护作用。

1 资料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 动物 选用近交、清洁型雄性Wistar大鼠30只，体质量230～260 g，购于南京医科大学实验中心，医用动物合格证号：由南京市医科大学提供，合格证号00A024。

1.1.2 仪器 利舒坦血糖仪，美国雅培公司提供;Wrellscan MK-3型酶标仪，全自动生化检测仪(Beckm锄CX7型)，Ⅳ型超薄切片机，瑞典LKB公司提供;BI-2000图像分析系统，成都泰盟科技有限公司提供。

1.1.3 药物与试剂 链脲佐菌素(STZ)：100 mg/支，购于Sig-ma公司;辛伐他汀片，规格：40 mg/片，购于默沙东制药有限公司;0.1 mol枸橼酸缓冲液：A液：枸橼酸2.1 g溶于100 ml双蒸水;B液：枸橼酸三钠2.94 g溶于100 ml双蒸水。A液和B液按1∶1.32的比例混合，调节pH值至4.3;P-选择素ELISA试剂盒，由美国RB生物工程公司提供;MMP-2 ELISA试剂盒，由上海业培生物科技有限公司提供;二步法山羊免疫组化检测试剂PV-6003，由美国 BGI公司提供;兔抗鼠基质金属蛋白酶(MMP)-2及羊抗兔IgG多克隆抗体，由武汉博士德生物工程有限公司生产;DAB显色剂，由北京中杉生物工程公司提供。

1.2 方法

1.2.1 动物分组与模型制备 取30只Wistar大鼠，随机分为正常对照组、糖尿病组、糖尿病干预组，每组10只。禁食12 h后，糖尿病组、糖尿病干预组应用STZ 55 mg/kg溶于pH4.3、0.1 mmol/L的枸橼酸缓冲液中一次性腹腔注射，正常对照组注射等体积的枸橼酸缓冲液。72 h后以连续3次随机血糖≥16.7 mmol/L为造模成功。各组于成模l w后给药，糖尿病干预组给予辛伐他汀生理盐水混悬液灌胃，10 mg·kg－1·d－1正常对照组、糖尿病组给予等体积生理盐水灌胃。共喂养12 w，每周测体重1次，每2 w测血糖1次。所有大鼠分笼饲养，温度18℃ ～22℃，相对湿度为40% ～70%，未使用胰岛素及其他降血糖药物。

1.2.2 标本采集 于造模成功后4、8、12 w时各组分别取8只雄性Wistar大鼠称重、剪尾测空腹血糖后，以25%乌拉坦腹腔注射麻醉，0.004 ml/g;固定后逐层分离右侧颈动脉结扎两端，迅速打开胸腔心内采血6 ml分别置于含有枸橼酸钠抗凝剂的试管和普通试管中各3 ml，离心(2 500 r/min)15 min，用所分离的血清测定空腹胰岛素、血脂、P-选择素、MMP-2的含量。切取部分右侧颈动脉组织固定、包埋，制备病理切片用于HE及免疫组化染色。

1.3 统计学分析 所有数据应用SPSS17.0统计软件处理，计量资料结果以s表示，采用完全随机分组析因设计的方差分析，相关性研究采用Pearson相关分析。

2 结果

2.1 不同时间段空腹血糖和胰岛素水平比较 糖尿病组、糖尿病干预组大鼠空腹血糖显著增高，与正常对照组相比有统计学差异(P＜0.05);糖尿病组与糖尿病干预组间相比无统计学意义(P＞0.05)。糖尿病组、糖尿病干预组空腹胰岛素明显降低，与正常对照组相比有统计学差异(P＜0.05)，糖尿病组与糖尿病干预组间相比无统计学意义(P＞0.05)。见表1。

2.2 不同时间段的血脂水平变化 糖尿病组、糖尿病干预组血清胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDLC)水平升高较正常对照组显著(P＜0.05)，且糖尿病干预组高于糖尿病组(P＜0.05)。高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)逐渐降低，三组间无明显差异(P＜0.05)。见表1。

2.3 各阶段血清P-选择素、MMP-2的表达变化 表2可见，与正常对照组比较，P-选择素、MMP-2糖尿病组、糖尿病干预组升高明显(P＜0.05)，糖尿病组增加更显著(P＜0.05)。

表1 三组不同时段血脂、血糖、胰岛素水平变化比较( s ，n=8)

表1 三组不同时段血脂、血糖、胰岛素水平变化比较( s ，n=8)

TCTGLDL-CHDL-C组别 血糖(mmol/L)血胰岛素(μIU/ml)(mmol/L)(mmol/L)(mmol/L)(mmol/L).005 0.654±0.007 0.385±0.017 8 w 5.18±0.55 16.85±3.24 2.039±0.018 1.164±0.011 0.672±0.008 0.394±0.019 12 w 4.75±0.47 15.32±2.06 2.036±0.023 1.159±0.015 0.670±0.012 0.387±0.012糖尿病组 4 w 21.48±3.551) 2.48±0.621) 2.235±0.0201) 1.471±0.0081) 0.784±0.0071) 0.355±0.0131)8 w 18.18±2.751) 2.85±0.561) 2.381±0.0241) 1.750±0.0151) 0.938±0.0191) 0.355±0.0171)12 w 17.74±2.211) 2.25±0.451) 2.531±0.0271) 2.200±0.0081) 0.742±0.0231) 0.359±0.0121)糖尿病干预组 4 w 19.81±3.751)2) 2.88±0.641)2) 2.131±0.0271)2) 1.150±0.0051)2) 0.654±0.0071)2) 0.385±0.0171)2)8 w 19.14±3.271)2) 2.33±0.481)2) 2.225±0.0101)2) 1.674±0.0101)2) 0.842±0.0121)2) 0.364±0.0141)2)12 w 21.29±3.361)2) 2.58±0.561)2) 2.136±0.0231)2) 1.430±0.0581)2) 0.701±0.0121)2) 0.324±0.0151)2)正常对照组 4 w 4.31±0.57 15.78±2.65 2.031±0.027 1.150±0

表2 三组不同时段P-选择素、MMP-2比较(s，n=8，ng/ml)

表2 三组不同时段P-选择素、MMP-2比较(s，n=8，ng/ml)

4 w 6.351±0.027 5.718±0.002 8 w 6.708±0.055 5.854±0.024 12 w 7.075±0.047 6.372±0.016糖尿病组 4 w 12.480±0.0551) 11.248±0.0621)8 w 13.618±0.0251) 13.085±0.0561)12 w 16.274±0.0211) 15.525±0.0451)糖尿病干预组4 w 9.281±0.0251)2) 8.688±0.0241)2)8 w 10.124±0.0271)2) 10.331±0.0481)2)12 w 11.029±0.0361)2) 11.138±0.0561)2)MMP-2正常对照组组别 P-选择素

2.4 不同时期颈动脉内中膜厚度(IMT)变化 与正常对照组相比，糖尿病组、糖尿病干预组IMT增长(P＜0.05)，且糖尿病组增加较糖尿病干预组显著(P＜0.05)。见表3。

表3 三组不同时段IMT比较(s，n=8，mm)

表3 三组不同时段IMT比较(s，n=8，mm)

5.151±0.014 5.160±0.024 5.165±0.017糖尿病组 6.755±0.0251) 9.965±0.0281) 21.052±0.1051)糖尿病干预组6.356±0.0171)2) 7.310±0.018 5.510±0.0201)2)4 w 8 w 12 w正常对照组组别

3 讨论

辛伐他汀为HMG-CoA抑制剂，是目前临床上最为广泛应用的他汀类降脂药物之一。辛伐他汀可通过抑制P-选择素的表达发挥调脂外抗炎、抗动脉粥样硬化、保护大血管的可能机制为〔3～8〕：①通过抑制胆固醇酯合成，代偿性促进LDL受体合成，加速LDL-C降解，从而有效降低血脂，减少了高脂对内皮的损伤刺激以及P-选择素的高表达;②通过抑制OX-LDL诱导的ICAM-1的表达，降低P-选择素水平，从而抑制单核-巨噬细胞黏附、浸润血管壁及血栓形成，阻止了AS的发生、发展;③还可通过降低血管平滑肌细胞中血小板源性生长因子所诱导的DNA合成，阻止血管平滑肌细胞由G1期向S期转变，抑制了血管甲滑肌增殖;④通过降低泡沫细胞内胆固醇酯含量，减轻泡沫化程度，延缓动脉粥样硬化形成。

1 刘方武，刘俊华，李会芹.他汀类药物非降脂作用的应用前景〔J〕.中国误诊学杂志，2005;5(3)：527.

2 陈婉莉，范金茹.P-选择素在心脑血管疾病中的意义及中药的干预作用〔J〕.中西医结合心脑血管病杂志，2006;4(9)：799-801.

3 王 峰，汪年松，唐令诠，等.P选择素在糖尿病肾病中的意义〔J〕.中华糖尿病杂志，2005;13(6)：452-3.

4 余国忠，赵明中.P-选择素与血小板活化〔J〕.中国医药导刊，2006;8(9)：108-9.

5 孙 燕，胡 健，刘 永.冠状动脉支架置入术后血浆P-选择素水平的动态变化〔J〕.中国介入心脏病学杂志，2006;14(9)：226-7.

6 夏 威，严钟德.P-选择素与糖尿病血管病变〔J〕.国外医学内分泌学分册，2003;23(增刊)：14-5.

7 杜艳华，胡义奎，李 芳，等.阿托伐他汀对脑梗死患者血小板GMPl40、CD62p和CD63水平的影响〔J〕.国际脑血管病杂志，2007;15(9)：651-4.

8 尚 可.辛伐他汀对动脉粥样硬化大鼠的干预作用及机制〔D〕.中国优秀硕士学位论文全文数据库，2007.