核酸检测在筛查献血者乙型肝炎中的应用

夏琳静

核酸检测(NAT)属于新型血液病毒筛查检测方法, 能够直接检测到血液中病原体的核酸［1］。核酸检测在筛查献血者乙型肝炎中具有重要作用, 本文选取无偿献血标本92432份进行分析, 现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取本院2009年1月～2012年12月无偿献血标本92432份, 其中应用核酸检测标本34440份。确保采集血液标本后每个献血者均及时留取4管标本；在对酶免4项、ALT予以检测时可选用分离胶促凝真空采血管；核酸测定时则选择带分离胶EDTA-K2抗凝真空采血管；对血型进行测定时选取EDTA-K2抗凝真空采血管, 将具体的采集日期、样品编码等基础信息进行准确记录。得到的标本需标准均在2 h内进行离心处理存至2～8℃冰箱内。2～3 h内送至检测中心离心保存, 24 h内血清学筛查并实施NAT检测。

1.2 方法 ELISA检测：所得到的每份献血标本在完成HBsAg检测过程中均需予以2种ELISA试剂, 每批实验需具有室内质控品组、空白对照组、阴性对照组和阳性对照组。对结果进行判断的标准为:S/CO≥1属于阳性(此状态的血液检测结果不符合标准), 0.5

核酸检测：以混样方法对核酸予以检测。每级混样池均有6个标本, 且均设定内对照。将混合所测定阴性定作阴性,将混合测定呈现阳性者予以拆分检测, 当拆分检测呈现阴性时属于NAT阴性, 当拆分测定呈现阳性时则属于NAT阳性。

在所有核酸筛查时, 当标本呈现阳性时, 核酸为阳性但经“二对半”测定属阴性, 且核酸出现阴性献血者予以追踪随访, 持续2个月后重新采样, 分别予以HBV-DNA和“两对半”检测。

2 结果

在本文所选取的92432份血液标本中, 进行血清学测定,标本属于HBsAg阴性者有92082份, 标本属于单试剂阳性者有30份, 标本属于双试剂阳性者有320份。

予以核酸测定标本共有34440份, 其中包括34430标本予以HBsAg酶免检测呈现阴性, 10份标本予以单试剂测定呈现阳性。在34440份标本中, 核酸筛查呈现阳性者52份,通过核酸测定呈现阳性者38份, HBsAg测定呈现阳性者2份,如表1所示, 阳性检出率与阳性确认率有15.1/万(52/34440)、11.6/万(40/34440)。在所认定的呈现阳性40份标本内, 只有10份标本经HBsAg测定呈现单阳, 予以核酸筛查呈现阳性,对HBVELISA漏检率进行计算得到8.7/万(30/34440)。另14份标本通过核酸筛查发现其均呈现阳性, 经HBsAg筛查及乙肝“两对半”测定属于阴性。

表1 献血者HBV核酸检测与ELISA检测结果对比

核酸筛查呈现阳性的52份标本, 将其中符合条件的26份实施追踪检测, 其中12份通过核酸筛查显示属于阳性, 经乙肝“两对半”测定则呈现阴性, 14份标本经核酸检测呈现阴性。经追踪检测发现, 12份乙肝“两对半”起始检测呈现阴性标本, 经随访HBV-DNA(+)、HBsAg(+)8例,NAT对HBV酶免窗口期标本检出率2.32/万(8/34440), 随访HBsAg(－)4例, 为隐匿性HBV感染(OBI)；14份核酸测定属于阴性, 随访过程中发现6例病毒载量低于20 IU/ml, 4例HBsAg一直呈现阴性, 属于OBI。经计算发现8例OBI, NAT对OBI检出率2.32/万(8/34440)。

3 讨论

输血是否具有安全性主要风险在于被筛查病毒所处在的“窗口期”。有研究资料发现, 经NAT检测, 能够减少HBV、HCV、HIV的EIA“窗口期”, 减少率达到40%～75%, 使得病毒经输血传播风险几率大范围降低。在本文研究中, 追踪随访ELISA法检测呈现阴性但核酸阳性者, 有8例标本HBsAg ELISA测定阴性转化成阳性, 由此可知此血样于ELISA窗口期予以NAT检测时被发现的, 而且NAT测定表明有4例属于隐匿性HBV感染患者, 说明NAT检测对血液筛查具有重要意义［2］。

NAT检测在应用中, 所使用的试剂必须具有较高的灵敏性、特异性, 且实验环境具有较高要求, 和EIA检测相对比更具有严格性, 在检查中应用所需设备、试剂往往会提高血液检测成本。而且核酸筛查存在局限性, 在病毒载量较低情况下, 通常NAT难以检测出, 在本文研究中, 6标本予以核酸筛查呈现阳性, 但是应用核酸测定则属于阴性, 追踪检测过程中发现病毒载量低于20 IU/ml［3］。

总之, NAT可以缩减“窗口期”, 减少病毒通过输血途径传播风险性, 但是也会有漏检标本出现。NAT检测时所关注的是病毒核酸, 而ELISA检测则为抗原或抗体, 两者所应用的检测原理和检测方法均有差异性, 所以两个方法在检测血液标本过程中并不存在重复性, 却有一定的互补性, 属于血液筛查检测重要方法。

［1］何亚琴, 徐立, 杨爱龙.核酸检测在筛查献血者乙型肝炎病毒中的应用.中国输血杂志, 2013, 26(3):147-148.

［2］王东, 于原, 臧亮, 等.单人份核酸检测在血液乙型肝炎病毒筛查中的应用.国际检验医学杂志, 2012, 33(7):780-781.

［3］季阳, 郑忠伟, 蔡辉, 等.病毒血清学检测与核酸检测技术在输血传染病筛检中的应用.中国输血杂志, 2010, 23(6):413-414.