血管紧张素Ⅱ-2型受体与原发性高血压的相关性研究

王 露，金梅花，徐清斌，马 萍（.宁夏医科大学，宁夏 银川 750004；.宁夏医科大学附属医院心内科，宁夏 银川750004）

原发性高血压（EH）是由多种环境因素、生活方式和遗传因素共同作用所引起的一种多基因遗传病，遗传因素所起的作用越来越受到人们的重视，血管紧张素Ⅱ-2型受体（ATR2）基因是RAS系统的重要组成部分[1-2]。国外研究表明：AT2R基因的多态性与心脑血管疾病存在密切关系，但关于宁夏汉族高血压人群是否存在关联尚未见报道。

1 资料与方法

1.1 一般资料：以宁夏医科大学总医院心内科门诊及健康查体中心汉族原发性高血压患者及健康查体者（均为长期居住在宁夏自治区的汉族人）为研究对象。137例原发性高血压患者的诊断符合2005年《中国高血压防治指南》（修订版）诊断标准，男71例，女66例，平均年龄（45.31±10.51）岁。排除继发性高血压病、过度饮酒、服避孕药、冠心病、糖尿病、心肌病及肝、肾病史者。149例血压值正常者（对照组）均为同地区体检血压正常者（收缩压＜140 mm Hg，舒张压＜90 mm Hg）（1 mm Hg=0.1333 kPa），男63例，女86例，平均年龄（42.75±11.47）岁。未服用任何降压药物，无肝、肾、甲状腺疾病及糖尿病病史。

1.2 方法

1.2.1 血压测量：征得所有调查者口头知情同意，于清晨采用水银柱袖带血压计测量基础血压，嘱患者坐位，测量其右上臂血压值（观察对象需排空膀胱，每间隔2 min测量1次，共3次，取平均值）。

1.2.2 一般临床资料的收集：收集患者的性别、年龄、身高、体重、脉率、既往史、吸烟饮酒史、家族史等一般资料，并计算体重指数。

1.2.3 血液标本的收集：肘静脉处采集外周抗凝血10 ml，5 ml血清用于空腹血糖（Glu）、肝肾功能和血清总胆固醇（Tc）等生化指标测定，另外5 ml静脉血EDTA-Na抗凝，-70℃冰箱保存备用，用于基因组DNA的提取。

1.2.4 基因组DNA的提取和PCR扩增：采用天根生化科技（北京）有限公司血液基因组DNA小量抽提试剂盒提取基因组DNA。引物设计利用Primer5.0软件完成，由上海生工生物工程有限公司合成。上游引物序列（P1）：5'-GGA TTC AGA TTT CTC TTT GAA-3'，下游引物序列（P2）：5'-GCA TAG GAG TAT GAT TTA ATC-3'。多聚酶链式反应（PCR）总体积20μl：其中10×buffer 2μl，dNTP（2.5 mol/L）1.6μl，上下游引物（10μmol/L）各0.4μl，DNA模板1μl，rTaq（5 U/ul）0.1μl，ddH2O 14.5μl；反应参数为94℃预变性3 min进入循环，94℃变性30 s，50℃退火30 s，72℃延伸30 s，共循环40次，最后72℃终末延伸10 min。酶切体系10μl包括PCR产物5μl，AluI内切酶（10 U/ul） 0.5μl，10×buffer 1.5μl，ddH2O 3μl，37℃水浴过夜；扩增产物经含溴化乙锭的1.5%琼脂糖凝胶电泳分型后在凝胶成像仪下观察、保存酶切结果并鉴定基因型。

1.3 统计学处理：采用SPSS 19.0统计软件进行分析，计量资料以均数±标准差（）表示，计数资料以频数表示，组间均数比较计量资料做t检验，研究对象与Hardy-Weinberg平衡的符合程度、基因型频率与等位基因频率的比较采用χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义，二项逐步logistic回归分析基因型与高血压病易感性的关联关系，计算出P值、比值比（odds ratio，OR）及95%的可信区间（con fi dence index，CI）。

2 结果

2.1 Hardy-Weinberg平衡检验：EH组和对照组的基因型分布及等位基因频率分别进行χ2检验（EH组：χ2=5.9187，P=0.0519；NT组：χ2=5.9448，P=0.0512），结果显示均符合Hardy-Weinberg平衡，表明入选人群符合随机抽样、来自同一群体，在遗传学上可代表宁夏的汉族人群。

2.2 EH组和NT组一般临床资料比较：两组中在年龄、性别、总胆固醇上差异无统计学意义（P＞0.05），余各项指标EH组均高于正常对照组人群，差异有统计学意义（P＜0.05）。详见表1。

表1 一般资料比较（ ）

表1 一般资料比较（ ）

注：①两组之间男、女构成比的比较用四格表χ2检验P＜0.05

一般资料 EH组（n=137） NT组（n=149） P值年龄（x± ，岁） 45.31±10.51 42.75±11.47 0.051性别（男/女，例）① 71/66 63/86 0.106收缩压（s x± ，mm Hg） 154.96±15.71 123.43±9.74 0.000舒张压（s x± ，mm Hg） 94.95±9.51 75.7±7.57 0.000 GLU（s x± ，mmol/L） 5.36±0.1 5.03±0.54 0.001 TG（s x± ，mmol/L） 2.23±1.36 1.75±1.93 0.016 TC（s x± ，mmol/L） 5.81±1.12 5.62±3.33 0.524 HDL-C（s x± ，mmol/L） 3.65±1.11 3.31±0.98 0.007 x± ，mmol/L） 1.21±0.29 1.3±0.27 0.008 LDL-C（ss

2.3 两组AT2R基因型及等位基因比较：受检者DNA经PCR扩增后，可能会产生321bp、214bp、107bp三个片段，则AT2R的C3123A多态性的基因型可有纯合子CC（仅见321bp）和AA（214bp，107bp），杂合子CA（321bp，214bp，107bp），因AT2R基因位于X-染色体，男性只有半合子，故女性有CC、CA、AA三种基因型，男性仅有CC、AA两种基因型；以性别分男女亚组，两亚组中EH及NT组各基因型分布及等位基因频率相比无显著差异（P＞0.05）。见图1与表2。

图1 AT2R基因C3123A多态性的基因型

表2 两组基因型及等位基因分布比较[例（%）]

2.4 不同基因型及等位基因间基本资料比较：女亚组中AC+AA基因型平均动脉压明显高于CC基因型组（P=0.037＜0.05），余临床资料相比，差异无统计学意义（P＞0.05）；男亚组中不同基因型组间各临床资料相比，差异无统计学意义（P＞0.05）。

2.5 AT2R基因C3123A多态性与高血压相关性的二项逐步logistic回归分析：以是否患有高血压（0：否，1：是）为应变量，将基因型（女亚组：CC、AC+AA型分别为0、1；男亚组：CC、AA型分别为0、1）、年龄、BMI、BUN、血Cr、GLU、UA、TC、TG、HDL-C、LDL-C按男女亚组分别引入模型。采用logistic回归方法（向前：LR），结果显示：女亚组中AC+AA基因型（OR=2.823，P=0.014）及BMI（OR=1.516，P=0.000）、Cr（OR=1.057，P=0.007）、GLU（OR=1.996，P=0.024）增高为EH的危险因素；男亚组中BMI（OR=1.224，P=0.000）增高为EH的危险因素。

3 讨论

人类AT2R基因位于X-染色体上约5kb，包含两个内含子、三个外显子，外显子3编码完整蛋白质序列，转录调控因子位于内含子1和启动区域[1-2]。AT2R通过拮抗AT1R介导的Ang Ⅱ血管收缩效应来舒张血管进而调节血管张力[3-4]。

AT2R基因多个位点的多态性与心脑血管疾病都有关，Jin等发现3123A在女性中与高血压有关，而在男性中则未发现相关性[3]；而Kang BY等研究却表明C3123A基因多态性与EH无显著相关[4]；Miyaki K等研究表明A等位基因对于日本中年男性食盐摄入对血压的影响起重要决定作用[5]；Kotani K等表明BMI为日本健康女性C3123A基因多态性标记[6]。

在本研究人群中，AT2R基因男女亚组中各等位基因频率及基因型构成比均无显著差异，故C3123A基因多态性分布与宁夏汉族原发性高血压的发病无显著相关；而3123A等位基因频率男亚组为14.0%，明显低于Miyaki K（40.1%）及Kang BY（33.66%）的报道[4]；女亚组中3123A等位基因频率为30.7%略低于Kotani K（33.1%）及Kang BY（32.91%）的报道，其中高血压患者A等位基因频率为34.4%，略低于Kang BY（37.8%）；CC、CA、AA基因型频率高血压组及正常对照组分别为[5-6]：35.9%、59.4%、4.7%和47.7%、48.8%、3.5%，而Kang BY研究两组中分别为50.0%、41.2%、8.8%及42.8%、38.8%、18.4%，存在明显差异；本研究与既往研究存在一定差异，其原因可能为血压水平受多基因遗传及环境因素共同影响，不同种族、人群的遗传背景差异很大，故样本来源所致差异不可避免，加之不同实验疾病选择、样本量大小、样本筛选标准、统计方法选择等可能存在不同，最终导致不同研究之间存在差异。

经二元logistic检验发现女亚组中AC+AA基因型为EH的危险因素，同时女亚组中AC+AA基因型平均动脉压明显高于CC基因型组，余临床资料及男亚组中各等位基因组间临床资料差异均无统计学意义（P＞0.05），且男女亚组各基因型及等位基因分布频率差异无统计学意义（P＞0.05），综上认为AT2R基因C3123A多态性位点可能不是该地区汉族人发生高血压病的独立危险因素，也不能确定该等位基因是原发性高血压病的致病因子。

[1]Martin MM,Elton TS.The sequence and genetic organization of the human type 2angiotensin Ⅱ receptor[J].Biochem Biophys Res Commun,1995,209(3):554.

[2]Warnecke C,Willich T,Holzmeister J,et al.Efficient transcription of the human angiotensin Ⅱ type 2 receptor gene requires intronic sequence elements[J].Biochem J,1999,340(1):17.

[3]Jin JJ,Nakura J,Wu Z,et al.Association of angiotensin B type 2 receptor gene variant with hypertension[J].Hypertens Res,2003,26(3):547.

[4]Kang BY,Bae JS,Lee KO.Association Study Between the C3123A Polymorphism of the Angiotensin Ⅱ Type 2 Receptor Gene in the Human X Chromosome and Essential Hypertension in Koreans[J].Environmental Health and Toxicology,2005,25(1):39.

[5]Miyaki K,Hara A,Araki J,et al.C3123A polymorphism of the angiotensin Ⅱ type 2 receptor gene and salt sensitivity in healthy Japanese men[J].Journal of Human Hypertension,2006,20(6):467.

[6]Kotani K,Sakane N,Saiga K,et al.The angiotensin II type 2 receptor gene polymorphism and body mass index in healthy Japanese women[J].Annals of Clinical Biochemistry,2007,44(1):83.