舒郁宁心汤对焦虑大鼠行为及血清神经肽和皮质酮水平的影响*

王 静 陈利平 王发渭 孙志高 许成勇

（1.新疆维吾尔自治区乌鲁木齐民族干部学院军医训练大队，新疆 乌鲁木齐 831200；2.解放军总医院海南分院，海南 三亚 572004）

焦虑症的病因和发病机制尚未完全阐明，与神经递质、内分泌、激素水平、神经肽的变化有关［1］。动物孤养加不确定性空瓶刺激实验能引起大鼠出现攻击，撕咬瓶子和笼子，修饰减少等一系列的焦虑反应，被用作焦虑模型［2］。本研究采用动物孤养加不确定性空瓶刺激实验方法建立焦虑大鼠模型，观察舒郁宁心汤对焦虑大鼠的行为学及神经肽的影响。

1 材料与方法

1.1 动物 健康SPF 级SD 雄性大鼠50 只（解放军总医院医学实验动物中心提供，动物号为SCXK-京-2009-0029），体质量180～220 g。

1.2 药物与试剂 舒郁宁心汤处方由中国人民解放军总医院中医科提供，由酸枣仁15 g，郁金10 g，栀子10 g，百合10 g，五味子6 g 组成，上药浸泡、煎煮，过滤，于80℃恒温水浴中浓缩成含生药量5 g/mL 药液，存冰箱备用，使用时蒸馏水稀释大鼠灌胃；地西泮片剂，2.5mg/片，北京益民药业有限公司生产，地西泮片研磨，加入2%羧甲基纤维素钠适量，用蒸馏水配成0.2 mg/mL 混悬液备用。采用竞争酶联免疫分析法测定血清神经肽（NPY）含量，NPY 放射免疫试剂盒由解放军总医院东亚免疫技术研究所生产；仪器：酶标仪THERMO MultiskanMK3（美国产品）。

1.3 分组与造模 大鼠随机分为空白对照组、模型组、地西泮组、舒郁宁心汤小剂量组（含生药0.5 g/mL）、舒郁宁心汤大剂量组（含生药5.0 g/mL），每组10 只大鼠；正常对照组每笼饲养5 只，其他组每笼饲养1 只。大鼠适应期饲养1 周，除正常组外，其他各组单笼饲养且接受不确定性空瓶饮水刺激实验建立焦虑应激模型［3］。定时喂水，训练7 d，即每日9∶00～9∶10 和21∶00～21∶10给动物饮水10 min，其余时间撤去水瓶不给水［3］。定时喂水期结束后开始应激实验，除正常组外，其他各组在上述两个时间段内给予不确定空瓶刺激，每日1～2次，持续2 周；正常组自由饮水和摄食。

1.4 行为学观察 将空瓶应激实验的10 min 等分为10个时间段，在每个时间段内记录每只大鼠出现攻击、探究、修饰行为的频率。攻击行为：撕咬或攻击空瓶和笼子。探究行为：前后左右运动和光顾水瓶所在位置。修饰行为：梳理皮毛和洗脸。不出现攻击、探究、修饰行为的计分为0 分，行为出现的为1 分，得分基于2名观察者的结果平均而得，其中1人为双盲控制。14个观察日的前3 d 和后3 d的平均积分用于统计分析。

1.5 血清NPY、皮质酮（CORT）含量的测定 各组动物于治疗结束后腹腔静脉取血，血液在冰浴试管中静置30 min，4℃，3000 转/min 离心10 min，分离血清，保存在-70℃冰箱中，按说明进行测定。

1.6 统计学处理 应用SPSS12.0 统计软件。所有结果以表示，采用t 检验。P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 舒郁宁心汤对焦虑大鼠空瓶应激行为影响 见表1。模型组、地西泮组和两中药组大鼠的探究、攻击行为较空白对照组比明显增加（P＜0.01）；修饰行为较空白对照组比明显减少（P＜0.01）。舒郁宁心汤大剂量组和地西泮组攻击行为积分较模型组显著降低，修饰行为积分较模型组显著增加（P＜0.05）；舒郁宁心汤小剂量组修饰和攻击行为积分虽与模型组比有降低，两组相比差异无统计学意义（P＞0.05）。

表1 各组空瓶应激行为积分比较（分，±s）

表1 各组空瓶应激行为积分比较（分，±s）

与模型组比较，*P＜0.05；与对照组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01。下同。

2.2 舒郁宁心汤对焦虑大鼠各组血清 NPY、CORT含量的影响 见表2。模型组大鼠血清NPY、CORT的含量较空白对照组明显升高（P＜0.05）；舒郁宁心汤大剂量治疗后大鼠血清NPY、CORT的含量较模型组明显下降（P＜0.05）。

表2 各组血清NPY、CORT 含量比较（±s）

表2 各组血清NPY、CORT 含量比较（±s）

3 讨论

焦虑是一种内心紧张不安，预感到要发生某种不利情况而又难以应付的一种不愉快、缺乏安全感的情绪，是机体对某些环境刺激形成的一种条件反射，可以看作是一种保护性反应。但如果焦虑的程度过重或持续时间过长，则是一个医学问题，过度的焦虑使人感觉紧张、担心、注意力不集中，长期这样会出现疲劳、失眠、快感缺失、安全感缺乏。焦虑症的发病除遗传因素与神经生物学因素外，还源于患者内在的心理冲突，是被压抑的内在潜意识中的冲突被激活形成的泛化且持续的焦虑状态［4］。Kennett 等［5］研究发现给予大鼠空瓶刺激后能引起大鼠出现攻击，撕咬瓶子和笼子，修饰减少等一系列的焦虑反应；林文娟等［6］通过实验证实空瓶应激模型是一种有效的焦虑应激模型；李宁等［7］研究也证明空瓶应激模型是一种有效的慢性焦虑应激模型，且操作简便、重复性好，利用空瓶刺激诱发定时喂水动物的情绪应激模型所建立的情绪应激动物模型，与以往的利用电击等建立的条件反射性情绪应激模型比较，排除了物理应激的干扰，是一种相对纯粹的心理应激动物模型，且操作简便、重复性好，符合实验研究的要求。本研究结果显示：空白对照组的大鼠几乎没有攻击性的行为，得分为零；探究行为较少，主要表现为梳理皮毛和洗脸等修饰行为，修饰行为表明大鼠处于正常状态，基本没有情绪应激反应。模型组大鼠空瓶刺激期间主要表现为攻击行为，探究行为显著增加，修饰行为显著降低。大剂量舒郁宁心汤、地西泮治疗后，大鼠的攻击行为明显降低，修饰行为明显增加，表明大鼠趋于正常。神经肽作为神经递质广泛分布于中枢神经系统，并与去甲肾上腺素共存于交感神经末梢，在交感神经兴奋时与去甲肾上腺素共同释放调节神经功能。NPY的生物学作用极为复杂，除控制食欲、调节心血管系统、调节内分泌功能外，还与学习、记忆、疼痛、焦虑、抑郁等有关［8］。下丘脑-垂体-肾上腺轴是机体应激反应的主要调节器，当机体长期处于应激状态时，会出现下丘脑-垂体-肾上腺轴的功能亢进、交感神经兴奋，分泌促肾上腺皮质激素释放激素，作用于肾上腺皮质使之分泌糖皮质激素，导致HPA 轴功能持续亢进，引起海马神经元的损伤及其功能障碍［9］，本研究结果显示：焦虑模型组大鼠的血清NPY、CORT 含量明显升高，大剂量舒郁宁心汤干预后大鼠血清NPY、CORT 含量明显降低。

中医药治疗情感障碍类疾病立足于整体调节，即可疏肝理气、清心安神，调节患者的情绪，又可改善因情绪不畅、气血不调导致的躯体症状。焦虑症属于中医学情志病范畴，可归属于“郁证”、“不寐”、“惊悸”、“怔忡”、“百合病”等病的范畴，其发病大多由情志所伤，肝失疏泄，肝气郁结化火，或思虑过度、劳伤心脾、气血不足、心失所养，心火旺盛所致。临床表现为：焦躁不安、急躁易怒、神经紧张、肌肉紧张、出汗、头重脚轻、心悸、头晕、上腹不适等系列症状。因此，治疗以疏肝理气、清心安神为主。舒郁宁心汤由酸枣仁、郁金、栀子、百合、五味子组成，方中酸枣仁，入肝、心经，养心、安神、益肝，为君药；郁金入心、肝、胆经，疏肝理气活血，为臣药；栀子入心、肝、胆经，清心泄火除烦，百合子入心、肺经，养阴清肺、清心除烦，共为佐药；五味子，入心、肝、肺经，宁心安神，生津敛肺。全方具有疏肝理气、清心安神之功效。本研究仅观察舒郁宁心汤对应激焦虑大鼠行为，血清NPY、CORT 含量变化进行研究，焦虑证的发病机理较为复杂，有关舒郁宁心汤的作用机理还有待于进一步的研究。

本实验显示大剂量舒郁宁心汤可以改善慢性应激焦虑大鼠行为，其作用可能与降低血清NPY、CORT 含量有关，上述作用与其剂量呈正相关。

［1］吴东辉，刘少文.广泛性焦虑障碍的神经生物学机制［J］.国外医学：精神病学分册，2003，30（2）：124-126.

［2］元晓丽，林文娟.焦虑和抑郁动物模型的研究方法和策略［J］.心理科学进展，2005，13（3）：327.

［3］李宁，唐启盛，赵瑞珍，等.慢性焦虑应激大鼠行为学的变化及高架十字迷宫的测评［J］.中华中医药学刊，2010，28（4）：711-713.

［4］郝伟.神经病学［M］.北京：人民卫生出版社，2008：120-121.

［5］Kennett GA，Dickinson SL，Curzon G.Enhancement of some 5-HT dependent behavioural responses following repeated immobilization in rats［J］.Brain Research，1985，330：253-263.

［6］林文娟，王玮雯，邵枫.慢性情绪应激对大鼠行为、神经内分泌和免疫反应的影响：一个新的情绪应激模型［J］.科学通报，2003，48（9）：926-929.

［7］李宁，唐启盛，赵瑞珍，等.慢性焦虑应激大鼠行为学的变化及中药丹桅逍遥散的干预作用［J］.北京中医药大学学报，2009，32（12）：826.

［8］Heilig M，Zachrisson O，Thorsell A.Decreased cerebrospinal fluid neuropeptide Y（NPY）in patients with treatment refractory unipolar major depression：preliminary evidence for association with prepro NPY gene polymorphism［J］.J Psychiatr Res，2004，38（2）：113-121.

［9］王海生，孙德清.神经精神系统临床药理学［M］.北京：化工工业出版社，2010：60-61.