HPLC 法测定金关片中雷公藤甲素的含量

袁海英 罗德福 黎 芸

（1.四川大学华西药学院，四川 雅安 625000；2.四川武警雅安支队卫生队，四川 雅安 625000；3.重庆市中医院，重庆 400021）

金关片是含有雷公藤的复方制剂，具有补益肝肾，祛寒止痛，活血通络，增强肾上腺皮质功能，免疫调整等作用，适用于治疗类风湿性关节炎，强直性脊柱炎，增生性关节炎等病证［1］。笔者采用HPLC 法对金关片中起主要药理作用的雷公藤甲素进行了含量分析。结果表明雷公藤甲素在此条件下分离较好，检测灵敏度高。

1 材 料

1.1 仪器AE-240电子天平（METTLER），Agilent 1260 高效液相色谱仪，UPT-1-40L 优普超纯水器，AS20500 超声仪（SCIENCE）。

1.2 试药 金关片（批号：110501、120501、121001，雅安三九药业有限公司）；雷公藤甲素（批号：1566-200201，中国药品生物制品检定所）；乙腈（色谱纯，批号：1633930 215，Merck，）；水为超纯水；其他试剂均为分析纯。

1.3 溶液制备［2-6］（1）对照品溶液的制备。精密称取雷公藤甲素对照品2.50 mg 于25 mL 量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀即得质量浓度为0.10 mg/mL的对照品贮备液。再精密吸取此贮备液5 mL 于25 mL 容量瓶中，加甲醇定容到刻度摇匀即得浓度为0.02 mg/mL的对照品溶液。（2）供试品溶液的制备。取金关片30片，除去包衣，研细，精密称定重量，称取细粉约3 g，精密称定后置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇-氯仿（1∶1）50 mL，密塞，称定质量，放置过夜，超声处理30 min，再称定质量，用甲醇-氯仿（1∶1）补足减失的质量，滤过，精密量取续滤液25 mL 蒸干，残渣加甲醇-氯仿（1∶1）3～5 mL 使溶解，加于中性氧化铝柱（12 g，内径1.5 cm，湿法装柱）上，用甲醇-氯仿（1∶3）洗脱，收集洗脱液50 mL 蒸干，残渣用甲醇溶解并定容至5 mL，摇匀，滤过即得供试品溶液。

2 方法与结果

2.1 系统适应性试验 色谱柱：Waters Symmetry Shield RP18（4.6 mm×250 mm，5 μm）。流动相：乙腈-0.3%磷酸二氢钾（23∶77）。检测波长：220 nm；流速：1.0 mL/min。柱温：25℃。进样量：10 μL。在此色谱条件下，雷公藤甲素达到基线分离，理论塔板数按雷公藤甲素计不低于5000，样品中其他成分对雷公藤甲素的测试无干扰。色谱图见图1。

图1 HPLC 色谱图

2.2 线性关系考察 分别吸取对照品贮备液0.2、0.4、0.8、1.6、2.4、3.2 mL，分别置10 mL 量瓶中，加甲醇稀释至刻度摇匀，分别吸取10uL，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定峰面积，以对照品的进样量X（μg）为横坐标，峰面积Y 为纵坐标，绘制标准曲线，并计算得线性回归方程为：Y=2056.8898X+0.1878，r=0.9999。结果表明雷公藤甲素在0.02～0.32 μg 范围内呈良好的线性关系。

2.3 精密度试验 分别精密吸取同一对照品溶液10 μL，连续进样6次，记录雷公藤甲素的峰面积，以峰面积计算RSD 为0.46%。

2.4 稳定性试验 精密吸取新配制的对照品溶液和新制备的供试品溶液，分别于0、2、4、6、8、12 h 进样10 μL 测定，记录每次测定的雷公藤甲素的峰面积，以峰面积计算对照品RSD 为1.70%，供试品RSD 为1.60%，结果表明对照品和供试品溶液在12 h 内基本稳定。

2.5 重复性试验 取同一批样品，按1.3 项下方法制备5 份供试品溶液，按上述色谱条件测定。结果样品中雷公藤甲素含量的平均值4.7 μg/片，RSD 为1.89%。

2.6 加样回收试验 精密称取已知含量的样品共6份，分别精密加入雷公藤甲素对照品溶液（20.0 μg/mL）2 mL，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，按上述色谱条件测定，计算雷公藤甲素的平均加样回收率为97.92%，RSD=1.81%，结果见表1。

表1 回收率试验结果（n=6）

2.7 样品含量测定 取3 批金关片样品，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，对照品溶液与供试品溶液分别进样10 μL，按上述色谱条件测定，采用外标法计算样品中雷公藤甲素的含量。结果样品批号为110501、120501、121001的 雷 公 藤 甲 素 含 量 分 别 为4.7、6.1、4.7 μg/片。

3 讨论

金关片为雷公藤复方制剂，其疗效明显，不良反应少，是一个不可多得具有很高价值的治疗RA的药物，本试验采用HPLC 法，对金关片中起主要药理作用的雷公藤甲素进行了含量测定。参照文献［7］先将雷公藤甲素对照品溶液进行光谱检测，其最大吸收峰在220 nm 处出现，故选择220 nm 作为测定雷公藤甲素的检测波长；再分别对流动相、色谱柱进行了筛选，本实验结果表明：采用Waters Symmetry Shield RP18（4.6 mm×250 mm，5 μm）色谱柱；乙腈-0.3%磷酸二氢钾溶液（23∶77）作流动相；检测波长为220 nm时，供试品色谱中雷公藤甲素能得到较好的分离测定。

［1］接红宇，吴启富.金关片治疗类风湿性关节炎47例［J］.中医临床研究，2012，24（4）：58-60.

［2］高丽，聂中标.不同产地雷公藤药材中雷公藤甲素含量测定［J］.山西中医，2012，28（8）：42-44.

［3］王艳芝.HPLC 法测定雷公藤片中雷公藤甲素的含量［J］.药品鉴定，2012，7（4）：44-45.

［4］王贤英，谢香菊.中药材火把花中雷公藤甲素及表儿茶素的含量测定［J］.重庆中草药研究，2012，65（1）：17-19.

［5］刘建群，刘一文.HPLC 法测定江西雷公藤各部位雷公藤甲素的含量［J］.江西中医药，2012，43（6）：52-54.

［6］张涛，金描真.HPLC 法测定抗哮喘滴丸中雷公藤甲素的含量［J］.安徽医药，2011，15（7）：830-831.

［7］邓海英，康四和.高效液相色谱法测定雷公藤片中雷公藤甲素含量［J］.医药导报，2008，27（10）：1256-1257.