针刺对阿尔茨海默病大鼠学习记忆能力及SOD、MDA 的影响

王定雪，司 玲，刘 静，许建阳

阿尔茨海默病(Alzheimer＇s disease，AD)，又称老年性痴呆，临床以记忆力减退为主要症状，常伴有其他认知功能损害，是老年人较为常见的疾病。AD 的病因机制较为复杂，目前还没有完全掌握其病因机制。但是有研究认为，在AD 的形成与发展过程中氧化应激反应起着重要的推动作用［1］。为此，本研究采用D-半乳糖、亚硝酸钠腹腔注射造模的方法，观察针刺对AD 大鼠学习记忆能力及SOD、MDA 的影响。

1 材料与方法

1.1 材料 清洁级SD 雄性大鼠40 只，体重(200±20)g(军事医学科学院实验动物中心提供)，随机分为空白组、模型组、对照组、针刺组，各组10 只。

1.2 方法

1.2.1 AD 动物模型制备 除空白组不进行造模处理，其余3组大鼠采用腹腔注射D-半乳糖(120 mg/kg)和亚硝酸钠(45 mg/kg)复合造模［2］的方法模拟AD，连续6周;以Morris 水迷宫［3］实验中模型组大鼠出现逃避潜伏期的时间延长，穿环次数显著减少为造模成功。

1.2.2 治疗方法 针刺组从造模后第21 天开始，通过针刺四关穴［4］、足三里进行干预治疗。每次行针3 min，留针10 min。针刺强度为中度，10 d为一疗程，间歇2 d，治疗3个疗程。对照组给予盐酸多奈哌齐混悬液0.45 mg/kg 灌胃，疗程同针刺组。空白组、模型组不做任何干预治疗。

1.2.3 测试指标 在给予对照组、针刺组最后一次治疗后，采用Morris 水迷宫测试4组大鼠的学习记忆能力。待大鼠禁食24 h 后，将大鼠脱臼处死，迅速断头后将大鼠头部置于冰袋上快速剥离脑壳取出大脑，用4℃的生理盐水将脑组织冲洗干净，剪碎，放置于匀浆器中，加入9 倍的4℃生理盐水，制备成10%的组织匀浆，2500 r/min，离心10 min，取上清液置4℃备用。取上清液按ELISA 方法测SOD 活性、MDA 含量。

1.3 统计学处理 所有实验数据采用SPSS17.0软件进行统计学分析，计量资料采用±s 表示，组间比较采用方差分析，方差齐性时采用LSD 进行两两比较，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 针刺对AD 大鼠逃避潜伏期和穿环次数的影响 模型组与空白组比较，模型组大鼠的平均逃避潜伏期时间明显延长(P＜0.01)，穿环次数减少(P＜0.01);说明采用D-半乳糖和亚硝酸钠复合模拟AD 的方法成功。针刺组、对照组与模型组比较，平均逃避潜伏期的时间减少(P＜0.01);大鼠的穿环次数增多(P＜0.05);针刺组与对照组比较，在逃避潜伏期时间与穿环次数上无明显差异。提示针刺能改善AD 大鼠的学习记忆能力(表1)。

2.2 针刺对大鼠脑组织SOD 活性和MDA 的影响针刺组及对照组、空白组大鼠脑组织SOD 活性均高于AD 模型组(P＜0.01)，MDA 的含量明显减少(P＜0.01);针刺组与对照组比较，SOD 的活性、MDA 的含量均无统计学差异。提示针刺可增强大鼠脑组织抗氧化的能力，减少氧化损伤(表2)。

表1 针刺对AD 大鼠逃避潜伏期和穿环次数的影响(n=10;)

表1 针刺对AD 大鼠逃避潜伏期和穿环次数的影响(n=10;)

注:与模型组比较，①P＜0.01;②P＜0.05

表2 针刺对AD 大鼠脑组织SOD 活性和MDA 的影响(n=10;)

表2 针刺对AD 大鼠脑组织SOD 活性和MDA 的影响(n=10;)

注:与模型组比较，①P＜0.01

3 讨 论

中国大约有600 万AD 患者，占全球患者总数的1/4，65岁以上老年人AD 患病率高达10.1%［5］，且治疗、护理费用昂贵。随着我国步入老龄化社会，将会有更多的人患病，给患者的家庭和社会带来了沉重的负担。由于AD 的病因复杂，关于其发病机制的假说较多。有很多的研究表明，氧化应激与AD 之间有着密切的联系［6］，其中蛋白质的氧化修饰在AD 的发病过程中发挥了重要作用［7］。在病理情况下，脑内自由基的清除和产生平衡失调导致自由基堆积，从而对大脑产生氧化损伤［8］，进而导致AD 的发生。反映氧化应激造成大脑组织损伤较为常用的检测指标为MDA 及SOD［9］。MDA 是脑组织脂质过氧化的代谢产物，能够造成生物膜变性、破坏，从而影响蛋白质的功能，表现出学习记忆能力的衰退。SOD 是机体清除自由基的关键酶，其主要作用是催化生物氧化产生超氧自由基，清除并阻止由氧自由基引发的连锁反应［10］。

本研究表明，模型组大鼠的学习记忆能力明显下降，且SOD 活性降低，MDA 含量增加，证明D-半乳糖和亚硝酸钠造模成功。针刺组与模型组比较SOD活性增加、MDA 的含量减少，说明针刺具有抗氧化反应和降低脂质过氧化水平的作用。另外，行为学检测结果表明，针刺在一定程度上改善了AD 大鼠的学习记忆功能障碍，因而从一个侧面提示可能随着脑内MDA 含量减少、SOD 活性增加，使得自由基对神经元的损伤减少，从而改善和维持正常的学习记忆能力。

AD 属中医的痴呆、善忘、神疑的范畴［11］。中医认为该病病位在脑，病因病机多为本虚标实，本虚主要为肾精亏损和气血不足，标实主要表现为痰瘀阻窍［12］。痰瘀不仅蒙蔽脑窍，而且阻碍正常气血运行，使脑气不能与脏气相接，脑失所养而成痴呆。选针刺四关穴(合谷、太冲)可以调节一身气血的升降，起到上疏下导，开关宣窍，调畅气机，活血通络之功［13］。足三里具有健脾调胃，祛痰开窍的功效，从而使气血生化有源，脑有所养。四关穴配足三里可以起到健脑开窍、祛痰活血的效果。

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