硝酸甘油口腔崩解片的质量控制

杜 芃，李晓华，杨金荣，房志仲

（1.天津医科大学第二医院药剂科，天津 300211；2.天津医科大学药学院药剂学教研室，天津市临床药物关键技术重点实验室，天津 300070）

硝酸甘油作为抗心绞痛药，疗效肯定，是临床上最常用于改善冠心病患者的生存质量，减少心绞痛心脏猝死发生的一线药物。它可缓解各类心绞痛，如劳累诱发的典型心绞痛、冠状动脉痉挛引起的变异型心绞痛以及不稳定型心绞痛等[1-5]。目前市场上硝酸甘油的剂型有硝酸甘油片、控释片、控释贴膜、气雾剂和硝酸甘油注射液。其控释片和控释贴膜能实现稳定、长效释药，但不能作为冠心病患者的急救用药。普通舌下片则因崩解时间过长而不利于疗效的迅速发挥，而对于注射剂患者使用很不方便，因此都不太适合于突发性冠心病患者的急救与自救。其气雾剂虽然有快速、有效、稳定、方便的优点，但是其成本高[6-7]。口腔崩解片是指在口腔内能够迅速崩解或溶解的片剂，其崩溶时间一般不超过1 min，在口腔中不另用水或很少的水即能崩散形成混悬液或溶液，患者不需用水即可将药物顺利服下。因此非常适合于有吞咽困难的老年患者及突发性心绞痛发作的急症患者。本文参考相关文献，研究并建立了硝酸甘油口腔（舌下）崩解片的质量控制方法。

1 材料与方法

1.1 仪器与试药

1.1.1 仪器 高效液相色谱仪，美国Spectraphysics；Spectra Focus 紫外检测器；输液泵SP8810；Anstar 色谱工作站；ZRS-8 智能溶出仪（天津大学无线电厂）；德国Sartorius 电子天平（BP211D）；78X 片剂四用测定仪（中国黄海制药厂）；ZB-IB 型智能崩解仪（天津大学精密仪器厂）；KQ-100 超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；微孔滤膜（Φ25 mm，孔径0.8μm；Φ13 mm，孔径0.45μm，天津市双吉色谱仪器经营部）。

1.1.2 试药与试剂 硝酸甘油溶液对照品（中国药品生物制品检定所，批号：100236-200401，含量：0.998%w/w）；硝酸甘油原料液（山东省平原制药厂）；硝酸甘油口腔崩解片3 批（自制）；对照制剂硝酸甘油片（北京益民药业有限公司，批号：0605231）；甲醇（天津市康科德科技有限公司，色谱纯）；乙腈（天津市康科德科技有限公司，色谱纯）及其它试剂均为市售分析纯，重蒸水自制。

1.2 方法[8-11]

1.2.1 含量测定

1.2.1.1 色谱条件：色谱柱：TIANHE Kromasil C18柱（200 mm×4.6 mm，5μm）；流动相：甲醇-乙腈-水（52∶5∶43）；流速：0.7 mL/min；检测波长：215 nm；柱温：室温；进样量：20μL。

1.2.1.2 溶液的制备：（1）对照品溶液的配制：精密量取硝酸甘油对照品1 mL 置于100 mL 量瓶中，用无水乙醇定容至100 mL 量瓶内，作为对照品溶液。（2）样品溶液的制备：取供试品10 片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于硝酸甘油1.25 mg），置25 mL 量瓶中，加流动相适量，超声处理3 min，振摇20 min，使硝酸甘油溶解，用流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，备用。（3）阴性对照液的制备：取空白全辅料适量，研细，精密称取适量，置25 mL 量瓶中，用流动相稀释定容至刻线。在“1.2.1.1 项下”分别精密量取上述供试液20μL，进样。

1.2.1.3 线性关系考察：分别精密量取对照品溶液3.5、4、5、6 和6.5 mL 置于100 mL 量瓶内，用流动相定容至刻度，得到每1 mL 中含硝酸甘油0.035、0.04、0.05、0.06 和0.065 mg 的硝酸甘油系列溶液，分别精密量取20μL，进样。

1.2.1.4 精密度试验：按照“1.2.1.1 项下”精密吸取同一供试品溶液重复取样6 次，测定峰面积。

1.2.1.5 稳定性试验：精密称取样品，按照供试品溶液制备方法操作，在“1.2.1.1 项”色谱条件下，分别测定：（1）日内稳定性：室温放置0、2、4、6 和8 h 后进样，分别测定峰面积；（2）日间稳定性：室温放置0、1、2、3、4 d 后进样，分别测定峰面积；（3）光照稳定性：在避光和不避光条件下分别在放置0、2、4、6、8、10 和24 h 后进样，分别测定峰面积。

1.2.1.6 重复性试验：分别量取供试品溶液6 份，按照“1.2.1.2（2）项下”操作，在“1.2.1.1 项”色谱条件下，各取20μL，进样，测定峰面积。

1.2.1.7 崩解时间检查：方法一：采用药典规定的升降式崩解仪，进行崩解时间的测定。所用的崩解介质为37℃±1℃的水。取供试品10 片，分别置吊篮的玻璃管中，启动崩解仪进行测定，用秒表记录崩解所用的时间；方法二：根据《口腔崩解片的剂型特点和质量控制会议纪要》，崩解时间在1 min 以内，介质首选用水，用量应小于2 mL，温度为37℃，采用静态方法，用秒表记录崩解所用的时间。

1.2.1.8 回收率试验：精密量取0.5 mg/mL 硝酸甘油对照品2.0、2.5 和3.0 mL，分别加入处方量的辅料，置25 mL 量瓶中，用流动相稀释至刻度，制成含量测定浓度的80%、100%、120%的溶液，摇匀，滤过，进样。

1.2.1.9 样品测定：取本品3 批，按照供试品溶液的制备方法，按照“1.2.1.1 项”色谱条件下进样，分别测定硝酸甘油的含量。

1.2.1.10 含量均匀度测定：取本品1 片，置10 mL量瓶中，加流动相适量，超声处理3 min，振摇20 min，使硝酸甘油溶解，用流动相稀释定容至刻度，摇匀，过滤，精密量取续滤液，按含量测定项下的方法测定，按外标法以峰面积计算每片的含量。除限度为±20%以外，应符合以下规定。取本品10 片，按选定的含量测定方法分别测定每片以标示量为100 的相对含量X，求其均值（x）和标准差，以及标示量与均值之差的绝对值：如A+1.8s≤15.0，则供试品的含量均匀度符合规定；若A+s＞15.0，则不符合规定；若A+1.8s＞15.0，且A+s≤15.0，则应另取20 片复试。根据初、复试结果，计算30 片的均值、标准差和标示量与均值之差的绝对值A，如A+1.45s≤15.0，则供试品的含量均匀度符合规定；若A+1.45s＞15.0，则不符合规定。

1.2.1.11 溶出度测定：取供试品，按溶出度测定法《中国药典》2010年版（二部附录XC 第三法），以100 mL 水为溶出介质，转速75 r/min，依法操作，3 min 时取样，经0.45μm 滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液。按“1.2.1.1 项下”的色谱条件测定，分别计算出每片在不同时间的溶出量。

2 结果

2.1 HPLC 测定结果 由图1 可见，硝酸甘油的保留时间约为13 min，理论塔板数按硝酸甘油峰计算为5 835；硝酸甘油峰的不对称度为1.21；硝酸甘油峰与相邻杂质峰的分离度为8.56。因此，制订质量标准，要求理论塔板数按硝酸甘油峰计算应大于2 000，硝酸甘油峰与相邻杂质峰的分离度大于1.5。如图2～3 可见，除溶剂峰外，未见其他色谱峰，表明辅料不干扰样品测定。

2.2 线性和范围 结果表明，硝酸甘油在0.035～0.065 mg/mL 浓度范围内线性关系良好。以硝酸甘油峰面积（Y）为纵坐标，溶液浓度（X）为横坐标，绘制标准曲线。得标准曲线方程：Y=2.241×107X-2.421×104，r=0.999 9。

2.3 精密度试验 硝酸甘油峰面积的RSD=1.12%。

2.4 稳定性试验 日内稳定性：峰面积的RSD＝0.40%，表明溶液8 h 内稳定；日间稳定性：峰面积的RSD＝1.50%，表明溶液4 d 内稳定；光照对测定结果的影响：避光处理和不避光条件的峰面积RSD 分别为1.50%和1.9%，表示光照24 h 内对测定结果没有影响，在测定含量过程中，样品可不进行避光处理。

2.5 重复性试验 供试品中硝酸甘油含量RSD=0.59%，本试验重复性较好。

2.6 硬度和崩解时间 如表1 所示，3 批硝酸甘油口腔崩解片的硬度和崩解度符合规定。

表1 硬度和崩解时间的检查结果（±s，n=6）Tab 1 Results of hardness and disintegration time test（±s，n=6）

表1 硬度和崩解时间的检查结果（±s，n=6）Tab 1 Results of hardness and disintegration time test（±s，n=6）

2.7 加样回收率试验 结果见表2。

表2 回收率测定结果（n=9，%）Tab 2 Results of recovery test（n=9，%）

2.8 样品测定 取本品3 批进行测定，硝酸甘油口腔崩解片平均含量分别为97.24%、98.02%和97.54%，RSD 分别为0.45%、1.16%和0.33，符合《中国药典》规定。

2.9 含量均匀度 如表3 所示，3 批硝酸甘油口腔崩解片的含量均匀度符合规定。

表3 含量均匀度检查结果Tab 3 Results of content uniformity test

2.10 溶出度测定 如图4 所示，3 批硝酸甘油口腔崩解片的溶出度均大于80%，符合规定。由图5所示，在0.5～5 min 内硝酸甘油口腔崩解片比市售硝酸甘油片溶出度大。由图结果表明，该方法能够客观的反映制剂的溶出情况，从而控制制剂质量。根据以上结果，将溶出时间限定为3 min 时溶出度不低于标示量的80%。

3 讨论

3.1 检测波长的选择 《中国药典》2010（二部）版中，对硝酸甘油含量测定的检查方法中规定215 nm作为检测波长，而USP29/NF24 中含量测定部分的检测波长定为220 nm，以减少末端吸收带来的干扰。试验中紫外扫描结果显示，硝酸甘油的最大吸收波长更接近于215 nm，且在220 nm 处测得吸收值仅为215 nm 处测定值的一半，考虑到溶出度测定中，全溶出的浓度仅为5μg/mL，因此，为提高其检测的灵敏度，本试验中选择了215 nm 作为测定波长。

3.2 流动相配比的选择[12-14]《中国药典》中，对硝酸甘油含量测定的检查方法中，推荐的流动相为乙腈∶水=5∶5，USP29/NF24 中推荐的流动相为等比例的甲醇-水，流速均为1 mL/min，另外，有关硝酸甘油的文献中采用了甲醇-水（6∶4）作为流动相，笔者在试验过程中，为提高分析时间，首先选用了比例为甲醇-水（6∶4），但即使将流速降低也不能获得较好的分离效果，硝酸甘油在经过酸或碱的水解破坏后，在硝酸甘油主峰前有一个面积很小的杂质峰，因此在甲醇-水中加入了少量的乙腈，以提高分离效果。综合考虑到经济因素，乙腈：水作为流动相固然能获得较为理想的分离效果，但其分析成本过高。综上，本试验选用了甲醇∶乙腈∶水3 种液体的混合物作为流动相。

本试验建立了硝酸甘油口腔崩解片的质量控制方法，以高效液相色谱法测定硝酸甘油的含量，以薄层色谱法对有关物质进行检查，并依法对3 批制剂进行质量检查。本方法具有操作简便、专属性好、灵敏度高的优点，可以作为硝酸甘油口腔崩解片的质量控制方法。

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［8］国家药典委员会.中华人民共和国药典[M].2010年版二部.北京：中国医药科技出版社，2010：附录ⅤD 高效液相色谱法，附录29

［9］国家药典委员会.中华人民共和国药典[M].2010年版二部.北京：中国医药科技出版社，2010：附录ⅠA 片剂，附录5

［10］国家药典委员会.中华人民共和国药典[M].2010年版二部.北京：中国医药科技出版社，2010：附录ⅩE 含量均匀度检查法，88-89

［11］国家药品监督管理局药品评审中心.口腔崩解片的剂型特点和质量控制会议纪要[C].2003

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［13］国家药典委员会.中华人民共和国药典[M].2010年版二部.北京：中国医药科技出版社，2010：947-949

［14］The United States Pharmacopeial Convention.Official Monographs:Nitroglycerin tablets[M].USP29/NF24,Washington:2005,1543-1545