胃得康胶囊质量标准研究

罗筱葵，胡伟铭，杨志彬

胃得康胶囊质量标准研究

*罗筱葵1，胡伟铭2，杨志彬1

（1. 吉安市中心人民医院，江西，吉安 343000；2. 吉安市医药总公司，江西，吉安 343000）

主要建立胃得康胶囊质量标准中HPLC测定有效成分延胡索乙素含量的方法和佛手、延胡索乙素、石菖蒲的薄层层析鉴别方法。采用色谱柱为Diamonsil（钻石）C18柱（5 um，200 × 4．6 mm，）；流动相在查阅文献的基础上通过优化后确定为：甲醇一0.1%磷酸（三乙胺调pH值=6.0）（62:38）；流速：1.0 mL/min；检测波长：254 nm。延胡索乙素的线性范围为12 ~192 μg，相关系数R2= 0.9999；加样回收率为99.3% (RSD 3.2)。佛手、延胡索乙素、石菖蒲薄层层析鉴别采用硅胶254薄层板，展开剂通过实验筛选分别用正已烷一乙酸乙酯（3:1）、正已烷一甲醇一乙酸乙酯一浓氨水（8:2:2:0.1）、石油醚（60~90℃）一乙酸乙酯（3:1）。含量测定方法稳定，结果准确，重现性好；薄层层析鉴别方法的色谱中，样品均能在对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点。可作为本制剂的含量测定方法和薄层层析鉴别方法。

胃得康胶囊；延胡索乙素；高效液相色谱法；薄层层析鉴别法

胃得康胶囊由胃得康片改剂型而来，由延胡索、佛手、鸡骨香、白及、枯矾、石菖蒲六味药材制成。具有疏肝理气、和胃止痛的功效。常用于急、慢性胃炎、消化性溃疡、胃痉挛、胃下垂、胃粘膜脱垂症、胃神经官能症等上腹胃脘部疼痛者。《中国药典》2010版对延胡索建立了延胡索乙素含量的测定，且延胡索乙素为胃得康胶囊中的一项主要活性成分。因此，本研究重点对制剂中延胡索乙素的含量测定方法和佛手、延胡索乙素、石菖蒲薄层层析鉴别方法进行了研究。

1 仪器与方法

1.1 佛手的薄层层析鉴别

供试品溶液的制备：取本品5粒，倾出内容物，加乙醇10 mL，超声处理30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇2 mL使溶解。

对照药材溶液的制备：取佛手对照药材0.5 g，加乙醇5 mL，同供试品法制成对照药材溶液。

阴性对照溶液的制备：按处方比例取缺佛手药材样品，同样品制备方法制成缺佛手药材的阴性浸膏，再取阴性浸膏同供试液方法制成阴性对照溶液。

薄层板：硅胶254薄层板。

展开剂：正已烷一乙酸乙酯（3:1）。

点样量：三种溶液各2 μL。

检视：紫外光灯（365 nm）下检视。

1.2 延胡索乙素的薄层层析鉴别

供试品溶液的制备：取延胡索对照药材1 g加甲醇20 mL，加热回流60 min，滤过，滤液蒸干，残渣加10%醋酸20 mL使溶解，加浓氨试液调节pH值至10~11，用乙醚振摇提取3次，每次20 mL，合并乙醚提取液，蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解。

对照药材溶液的制备：取延胡索乙素对照品适量，加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液。

阴性对照溶液的制备：按处方比例取缺延胡索乙素药材样品，同样品制备方法制成缺延胡索乙素药材的阴性浸膏，再取阴性浸膏同供试品溶液方法制成阴性对照溶液。

薄层板：硅胶254薄层板。

展开剂：正已烷一甲醇一乙酸乙酯一浓氨水（8:2:2:0.1）。

点样量：三种溶液各2 μL。

检视：置紫外光灯（365 nm）下检视。

1.3 石菖蒲的薄层层析鉴别

供试品溶液的制备：取本品内容物8粒，倾出内容物，加水50 mL，加热提取30 min，滤过，滤液用石油醚(30~60 ℃）振摇提取2次，每次15 mL，合并石油醚液，蒸干，残渣加甲醇2 mL使溶解。

对照药材溶液的制备：取石菖蒲对照品，同供试品溶液制法制成每1 mL含0.5 mg对照品药材溶液。

阴性对照溶液的制备：按处方比例取缺石菖蒲药材样品，同样品制备方法制成缺石菖蒲药材的阴性浸膏，再取阴性浸膏同供试品溶液方法制成阴性对照溶液。

薄层板：硅胶254薄层板。

展开剂：石油醚（60~90 ℃）一乙酸乙酯(3:1)。

点样量：三种溶液各2 μL。

检视：置紫外光灯（365 nm）下检视。

1.4 高效液相色谱含量测定法

1.4.1 仪器、药品、与试剂

高效液相色谱仪：日本岛津LC-10ATvp系列高效液相色谱仪，HW－2000色谱工作站。延胡索乙素对照品（含量测定用，购于中国药品生物制品检定所，批号分别为：0726-200208）。甲醇为色谱纯，水为超纯水，其它试剂均为分析纯。十批胃得康胶囊样品批号为：040701、040702、040703、050401、050402、050403、050404、050901、050902、050903（由江西保利制药有限公司提供）。

1.4.2 供试品溶液的制备

取延胡索对照药材1 g加甲醇20 mL中，加热回流60 min，滤过，滤液蒸干，残渣加10%醋酸20 mL使溶解，加浓氨试液调节pH值至10~11，用乙醚振摇提取3次，每次20 mL，合并乙醚提取液，蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解。

1.4.3 测定方法

1.4.3.1色谱条件

Diamonsil（钻石）C18柱（5 μm，200 × 4.6 mm）；流动相：甲醇一0.1%磷酸（三乙胺调pH值=6.0）(62:38)。流速：1.0 mL/min；检测波长：254 nm；柱温室温。按上述色谱条件下延胡索乙素在18 min左右出峰，供试品溶液和对照品溶液在上述相应位置处有相同色谱峰，阴性无干扰，见（图1、图2），结果延胡索乙素在18 min左右出峰，并有较好的分离，理论板数在3000以上。

图1 延胡索乙素对照品HPLC色谱

图2 供试品HPLC色谱

1.4.3.2 检测波长的确定

精密取延胡索乙素对照品溶液(0.046 mg/mL)，在200~400 nm波长范围内进行光谱扫描，结果延胡索乙素在282.0 nm处有最大吸收（见图3）。文献与中国药典多采用280 nm，由于282 nm波长处，干扰少且稳定，所以，选择282 nm为测定波长。

图3 延胡索乙素对照品紫外光谱

1.4.3.3空白试验

按本品处方制法制得不含延胡索乙素药材的空白制剂，用供试品溶液制备方法制得去延胡索乙素的空白溶液，用上述色谱条件测定，比较供试品溶液色谱和延胡索乙素对照品溶液色谱，结果阴性样品中其他组分对延胡索乙素色谱峰无干扰(见图4)。

图4 空白制剂HPLC色谱

1.4.3.4 线性关系考察

精密称取延胡索乙素对照品6.0 mg，置25 mL量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取上述对照品溶液0.5、1.0、2.0、4.0、8.0 mL分别置10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。按上述色谱条件，分别吸取10 μL，注入液相色谱仪，测定峰面积。以进样量（μg/m:）为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线并进行线性回归分析，结果见表1。

表1 线性关系考察

回归方程：y = 37221x

相关系数：R2= 0.9999

结果表明，延胡索乙素在12 ~192 μg范围内，峰面积与进样量呈良好的线性关系。

1.4.3.5精密度试验

精密吸取上述线性关系考察中第3号对照品溶液，按上述色谱条件，进样测定5次，结果见表2。

表2 精密度试验结果

1.4.3.6供试品提取方法的考察

延胡索乙素为生物碱类化合物，微溶于水，易溶于热水和冷乙醇，常用5%甲酸的甲醇溶液或碱化后用乙醚、醋酸乙酯等提取。本品碱化后用乙醚提取三次，然后再提取两次，将后两次的提取液分别进行HPLC测定，均检测不出延胡索乙素。因此，采用乙醚四次提取可完全提出延胡索乙素。

1.4.3.7 稳定性试验

取本品(批号040701)，按前述含量测定项下的方法制备和测定供试品于0、1、2、4、8、24 h内峰面积，结果见表3。

表3 供试品溶液稳定性试验

结果表明，本品供试品溶液在0~24 h内，供试品溶液基本稳定。

1.4.3.8 重复性试验

取本品（批号040701），一式5份，照前述含量测定项下方法制备与测定，结果见表4，延胡索乙素平均含量为0.0987 mg/g，RSD = 1.78%。

表4 重复性试验结果

1.4.3.9 加样回收率试验

取本品适量（批号040701），精密加入延胡索乙素对照品溶液（48 μg/mL），照前述含量测定项下方法制备与测定，结果见表5。

表5 加样回收率试验结果

1.4.3.10 样品测定

取本品10批，按前述含量测定项下方法试验，结果见表6。

表6 样品测定结果

根据表6十批试制样品含量测定结果和原剂型的含量限度，拟定本品每粒含延胡索乙素不得少于0.040 mg。

1.4.3.11延胡索药材的含量测定

按《中国药典》2010年版一部延胡索乙素含量测定方法，测定三批延胡索中延胡索乙素含量，结果见表7。

表7 药材的含量测定结果

2010年版药典规定延胡索中含延胡索乙素（C21H25NO4）不得少于0.050%。

1.5　检查

本品为胶囊剂，根据中国药典2010年版一部附录IL胶囊剂项下的规定，按通则规定的方法检测其水分、装量差异、崩解时限、微生物限度检查等常规检查项，结果均符合规定。同时，依据中国药典2010年版一部附录Ⅸ E重金属检查法第二法和附录Ⅸ F砷盐检查法第一法，对本品进行了重金属和砷盐的测定，结果重金属低于10 ppm，砷盐低于2 ppm。

1.6 稳定性试验

参照《中药新药质量稳定性研究的技术要求》和《中国药典》2010年版二部附录XⅨC药物稳定性试验指导原则，对三批上市包装的样品进行了加速稳定性试验[温度(40 ± 2)℃，相对湿度(75 ± 5)%，6个月]和长期稳定性试验（室温条件下，12个月），结果各项考察指标与0月比较，其质量没有明显变化，表明本品质量稳定，有效期可暂定二年。

2 结果

2.1 佛手的薄层鉴别结果

佛手供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点（见图5）。

1: 对照药材 2: 阴性对照 3: 供试品

2.2 延胡索乙素的薄层鉴别结果

延胡索乙素供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点（见图6）。

1: 对照品 2: 阴性对照 3: 供试品

2.3 石菖蒲的薄层鉴别结果

石菖蒲供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点（见图7）。

1: 对照药材 2: 阴性对照 3: 供试品

2.4 延胡索乙素的含量

延胡索乙素含量测定的线性范围为12 ~192 μg，相关系数R2 = 0.9999；加样回收率为99.3% (RSD 3.2)。结果见图8。

图8 延胡素乙素曲线

3 讨论

3.1 测定方法的选择

复方制剂中延胡索乙素含量测定方法，文献报道的主要有高效液相色谱法、分光光度法、薄层扫描法等。分光光度法、薄层扫描法前处理复杂，操作要求高，操作比较复杂，检测周期长、检测误差大，《中国药典》2010年版一部延胡索乙素含量测定项下，建立了延胡索乙素含量测定方法且根据我们的实验发现，本实验建立的延胡索乙素含量测定方法操作简便快速，测定结果准确可靠，有效成分分离较好，其他成分无干扰，可作为该制剂的含量控制指标，能较好地控制本品的质量。

3.2 流动相的选择

选择《中国药典》2010年版一部延胡索乙素含量测定中流动相[1]及文献[2-5]报道的流动相进行试验，最终确定甲醇一0.1%磷酸(三乙胺调pH值＝6.0) (62:38)为流动相，在此流动相条件下，样品中的延胡索乙素峰形好，与杂质峰分离度较好，保留时间适合。

3.3 流动相pＨ的选择

为使延胡索乙素达到较好的分离效果，对不同的pＨ值如5.5、5.8、6.0、6.3、6.5等进行比较，最后通过实验验证确定pＨ值6.0峰形好，出峰时间较为理想，与杂质峰分离度较好，保留时间适合。

3.4 检测波长的选择

用甲醇溶解适量的延胡索乙素对照品作为供试液，用紫外分光光度法进行200~400 nm范围扫描，在282 nm处有最大吸收峰，干扰少且稳定，与《中国药典》2010年版[1]记载其最大吸收峰在280 nm处相近，所以选择282nm为测定波长。

3.5 佛手、延胡索乙素与石菖蒲的鉴别

样品中佛手、延胡索乙素、石菖蒲的鉴别，经空白制剂和三批样品的试验，供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置显相同颜色的斑点；但在缺佛手、延胡索乙素、石菖蒲药材的阴性样品色谱中，在与供试品、对照药材色谱相应的位置上，没有显相同颜色的斑点，故用本方法鉴别样品中的佛手、延胡索乙素、石菖蒲有很好的专属性和重现性，阴性无干扰。

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京:中国医药科技出版社,2010:130.

[2] 梁国华,吴福彬. HPLC测定克痹骨泰胶囊中延胡索乙素含量[J].中国药师,2012,15(3):427-428.

[3] 冯益明.HPLC测定复方枣仁胶囊中延胡索乙素含量[J].中国药品标准,2010,11(3):214-216.

[4] 张其,王守英.HPLC测定舒筋消咽丸中延胡索乙素含量[J].现代中药研究与实践,2008,22(1):44-45.

[5] 刘超英,刘丹, 韩建伟. HPLC测定创灵凝胶中延胡索乙素含量[J].药物分析杂志,2009,29(8): 330-332.

STUDY OF QUALITY STANDARD FOR WEIDEKANG CAPSULE

*LUO Xiao-kui1，HU Wei-ming2，YANG Zhi-bin1

（1. The Central People's Hospital of Ji'an, Ji’an, Jiangxi 343000, China;2. Ji’an Pharmaceutical Companies, Ji’an, Jiangxi 343000, China）

: Toestablish HPLC method for measuring the content of the effective component-tetra hydropalmatine and TLC method for identifyingvar. sarcodactylis, tetrahydropalmatine andin Weidekang capsule.: The chromatographic column is Diamonsil C18(5 μm, 200 × 4.6 mm), mobile phase is optimized after reviewing references as 62 to 38 for methanol-0.1% phosphate (adjusted PH=6 by triethylamine), flow rate is 1.0 mL/min, detection wavelength is 254 nm.: The linear range of tetrahydropalmatine is 12-192ug, correlation coefficient R2is 0.9999, recovery rate is 99.3% (RSD 3.2). The developing solvents are N-hexane-ethyl acetate (3:1), N-hexane-methanol-ethyl acetate-concentrated aqueous ammonia (8:2:2:0.1), petroleum ether (60～90 ℃)-Ethyl acetate (3:1) forvar., tetrahydropalmatine and’s TLC identification in which silica gel 254 thin layer plates are used respectively.: The method is stable, accurate and reproducible well. The samples can display the spots with the same color as the reference standard chromatography in TLC identification. In a word, the HPLC can be used as the content measuring method and identification method for this capsule.

weidekang capsule; tetrahydropalmatine; HPLC; TLC

R921.2

A

10.3969/j.issn.1674-8085.2013.04.019

1674-8085(2013)04-0084-06

2013-03-03；

2013-06-27

*罗筱葵(1955-)，男，江西吉安人，主任药师，主要从事医院药学研究(E-mail:luoxiaok000115@tom.com);

胡伟铭(1962-)，男，江西吉水人，副主任中药师，主要从事生物制药工程研究(E-mail:Huweimin@126.com);

杨志彬(1979-)，男，江西吉安人，主管药师，主要从事医院药学研究(E-mail:Yangzw1979@163.com).