HPLC法测定妇炎康复片中芍药苷的溶出度

王玉平，丁建伶，邢 婧，赵新红

承德医学院附属医院药剂科，承德 067000

妇炎康复片来源于临床经验处方，由赤芍、当归、黄柏等11味中药组成，具有清热解毒、除湿止带、消肿散结等功效，主要用于湿热下注、毒淤互阻所致带下病等。作为广泛应用临床多年的制剂，其良好的临床疗效得到广泛认可，然而对于其质量控制仅仅局限于薄层鉴别，质量控制仍需进一步加强。溶出度作为一种重要的固体制剂的质量控制方法，已在多国质量控制中收载，因此，为了进一步控制该制剂的质量，进而提高临床疗效，我们参考相关文献［1-3］中的含量测定方法，以方中君药赤芍的主要成分芍药苷为指标，HPLC法测定其体外溶出情况，以便于控制其内在质量。

1 仪器与材料

1.1 仪器

Waters e2695高效液相色谱仪(美国)、2998光电二极管阵列检测器、Empower 2软件;Sartorius CP225D分析天平(德国Sartorius公司);ZRS-8型智能溶出仪(天津大学无线电厂)。

1.2 试剂

芍药苷对照品(批号:201104，纯度大于98%，购于四川维克奇生物科技有限公司);妇炎康复片(自制，批号为 20110508、20110611、20110725);乙腈、甲醇、磷酸为色谱纯;水为重蒸水，其它试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

Agilent TC-C18色谱柱(4.6 mm ×250 mm，5 μm);流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液(15∶85);流速1 mL/min;检测波长230 nm;柱温30℃;进样体积20 μL;理论塔板数按芍药苷峰计算应不低于4000。

2.2 方法学考察

2.2.1 标准曲线制备

精密称取芍药苷对照品3.68 mg，置于5 mL量瓶中，加甲醇至刻度线，摇匀。再精密吸取2 mL，置于10 mL量瓶中，加甲醇至刻度线，摇匀，即得147.2 μg/mL的对照品溶液。分别精密吸取该对照品溶液1、2、3、5、8、10 mL，置于 10 mL 量瓶中，加甲醇至刻度线，摇匀。按照已经确定的色谱条件，进样体积20 μL进行测定。以峰面积(Y)对浓度(X)进行线性回归，得到回归方程为Y=4932．21X-13548．77(R2=0.9998)。说明浓度在 14.72 ～147.2 μg/mL范围内，线性关系良好。

2.2.2 专属性考察

按照原工艺制备不含赤芍的阴性样品，并制备溶出2 h的溶出液，分别取对照品溶液、供试品溶出液、阴性样品溶出液进样测定，结果见图1。根据实验结果可知，供试品溶出液中芍药苷色谱峰与其他组分峰可达到基线分离，阴性样品无干扰。

图1 芍药苷对照品溶液(A)、阴性样品溶液(B)和供试品溶液(C)的HPLC色谱图Fig.1 HPLC Chromatogram of paeoniflorin standard(A)，blank(B)and sample(C)

2.2.3 稳定性试验

取供试品溶液，分别于 0、2、4、8、12、24 h 进样测定，记录峰面积，结果RSD为1.78%，表明供试品溶液在室温条件下放置24 h稳定性良好。

2.2.4 精密度试验

取取样时间为24 h的溶出液制备供试品溶液，重复进样测定6次，结果芍药苷峰面积的RSD为1.49%，说明本方法精密度良好。

2.2.5 重复性试验

取同一批次的样品，平行制备6份取样时间为4 h的溶出液，分别进样测定，记录峰面积，结果芍药苷峰面积的RSD为0.85%，表明本方法的重复性良好。

2.2.6 加样回收试验

取同一批次的样品，平行制备6份溶出液，精密吸取3 mL置于10 mL量瓶中，再精密吸取浓度为147.2 μg/mL的芍药苷对照品溶液置于上述溶出液中，加甲醇至刻度线，摇匀。按照已经确定的色谱条件，进样测定，根据标准曲线方程计算含量及回收率，结果见表1。根据实验结果可知:平均加样回收率及其RSD值分别为99.89%、2.76%，结果符合要求。

表1 芍药苷加样回收试验Table 1 The recovery rate of paeoniflorin

5 0.298 0.294 0.579 95.58 6 0.29 0.294 0.593 104.08

2.3 妇炎康复片中芍药苷溶出度测定

2.3.1 溶出度测定方法

精密量取已超声30 min进行脱气处理的水900 mL，加入溶出杯中，开启电源开关至(37±0.5℃)保温30 min，调整转速至100 rpm，称取妇炎康复片约10 g，精密称定，置于溶出杯中，分别在开启转桨后的 5、15、30、45、60、120、240、1440 min，迅速取样10 mL，补液，滤过，残渣加入溶出杯中。精密吸取滤液2 mL，置于5 mL量瓶中，加甲醇至刻度线，摇匀，进样，测定。

2.3.2 三批样品溶出度测定

取三批样品，每批样品平行称取6份，照溶出度测定方法下的操作，进行溶出度测定，计算每批样品的平均溶出度，结果显示了三品样品测定结果基本一致，结果见表2。

表2 3批妇炎康复片中芍药苷累积溶出度(n=6，±s，%)Table 2 Dissolution of paeoniflorin in Fuyan Kangfu tablets(n=6，±s，%)

表2 3批妇炎康复片中芍药苷累积溶出度(n=6，±s，%)Table 2 Dissolution of paeoniflorin in Fuyan Kangfu tablets(n=6，±s，%)

批 号Lot No.取样时间/minSampling time/min 5 15 30 45 60 90 120 240 20110508 34.00±1.23 49.07±1.09 68.09±1.85 74.95±2.26 78.82±3.04 82.18±3.28 87.66±2.5694.39±3.10 20110611 29.28±1.67 46.89±1.84 64.99±2.55 74.86±1.69 81.76±2.29 86.67±2.45 90.18±1.99 93.82±2.35 20110725 28.45±0.79 45.20±1.61 70.65±1.85 77.06±3.16 80.70±0.98 87.78±1.48 91.09±1.5694.43±2.30

2.3.3 溶出参数提取

中的方法［4，5］，选择 1stOpt软件进行威布尔溶出模型、零级速率模型、一级速率模型、Higuchi模型、Hixson-Crowell模型、Ritger-Peppas模型等6种溶出模型优选，结果最优模型为威布尔溶出模型。选择SAS软件实现溶出参数T50、Td提取，为了编写程序的简便，参考文献中的方法［6］，设定威布尔溶出模型为y=1-exp(-b*(t-a)^m)，实验结果见表3。

表3 溶出模型选择及溶出参数提取(n=6，±s)Table 3 Selection of dissolution models and parameters(n=6，±s)

表3 溶出模型选择及溶出参数提取(n=6，±s)Table 3 Selection of dissolution models and parameters(n=6，±s)

批号Lot No.最优模型The optimal dissolution model R2 T50/min Td /min 26.36±0.45 20110508 威布尔溶出模型/Weibull dissolution model 0.9900 13.00±1.16 20110611 威布尔溶出模型/Weibull dissolution model 0.9932 15.41±1.44 27.99±0.32 20110725 威布尔溶出模型/Weibull dissolution model 0.9843 14.82±1.3526.26±0.24

2.3.4 溶出参数方差分析

三批样品的溶出参数进行方差分析，结果表明三批样品的溶出参数 a、b、m、T50、Td无显著性差异(P ＜0．05)。

3 讨论

在进行溶出方法选择时，考虑到妇炎康复片中芍药苷的含量偏低，这不仅需要加大投药量才可以实现定量检测，同时，也给溶出方法选择带来一定难度。预实验中发现，选择转篮法进行取样测定时，篮内片剂装得较满，在溶出试验过程中仅转篮外层的片剂才能接触溶出介质，从而影响片剂实际溶出。因此，综合考虑选择桨法为溶出方法。

在溶出度模型优选中，百分之百溶出量的选择是其中的关键一步。既有选择“制备药粉的溶出24 h的量”为溶出百分之百，亦存在“直接测定药物中的含量”为溶出百分之百的计算方法［7］。本试验中，曾对上述两种方法进行比较，考虑到上述两种方法选择的水为提取溶剂时，测定结果不理想，最终选择以溶出取样时间为24h的累积溶出量作为溶出百分之百。

本试验所建立的妇炎康复片溶出度测定方法，存在操作简便易行，准确可靠等优点，在一定程度上可以达到控制其内在质量的目的。然而，本试验主要研究的是妇炎康复片中芍药苷的体外溶出度，对于体内吸收机制等有待于进一步深入研究。

参考文献

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2 Feng Y(冯源)，Wang Y(王胤)，Zhou N(周浓)，et al.Determination of paeoniflorin in different parts of Paeonia Delavayi var.lutea by HPLC.China J Exp Tradit Med Form(中国实验方剂学)，2012，18:139-143.

3 Yang YF(杨燕飞).RP-HPLC determination of paeoniflorin，baicalin，palmatine hydrochloride and berberine Hydroc-Hloride in Kuntai capsules.Chin Tradit Med(中成药)，2010，32:958.

4 Chen TC(陈天朝)，Zhao XH(赵新红)，Kang BY(康冰亚).Application of SAS in the choice of six dissolution models.Tradit Chin Med Res(中医研究)，2012，25(4):68-71.

5 Yuan WP(袁伟萍)，He ZX(何忠祥).Application of global optimization based on 1stopt in tractor's final transmission Design.Tractor Farm Trans(拖拉机与农用运输车)，2010，37(6):28.

6 Pan YS(潘玉善)，Li WQ(李文清)，Wang W(王伟)，et al.Calculation of Weibull'S distribution parameters for drug dissolution with SAS.J Guangdong Pharm Coll(广东药学院学报)，2010，26:23-26.

7 Cheng HZ(程荷珍)，Wang GH(王桂红)，Wang P(王萍).The dissolution study of Liuweidihuang pill.Chin Tradit Med(中成药)，2001，23:380-381.