喙尾琵琶甲乙醇提取物急性毒性实验研究

常 征，李洪潮，丁长春，刘 伟

（文山学院 生化系，云南 文山 663000）

喙尾琵琶甲（Blaps rynchopetera Fairmaire），是鞘翅目拟步甲科琵琶甲属的昆虫，［1］在彝族、壮族、苗族中已有很长的药用历史，它被广泛用作抗菌消炎药，以及治疗心血管、治疗类风湿和肿瘤等疾病的药物，它还具有一定的调节人体免疫系统的功能。据调查，在这些民族治疗各种疑难病症的处方中，80%以上都含有该昆虫［2］。在云南民间特别是在少数民族中还常用于治疗咳嗽、发烧、疔疮、胃炎、肿瘤等疾病［3］。因此，它是一种极具利用价值和开发潜力的民族民间药用昆虫。但目前多集中于对该昆虫的抗菌消炎、化学成分、生态特征等方面的研究，并未曾见到过在毒理学方面的研究，为此，笔者对喙尾琵琶甲提取物的急性毒性进行了初步研究，为口服该药用昆虫的安全性提供了一定的药理学依据。

1 仪器与材料

1.1 仪器

R201D-II型旋转蒸发器（上海申顺实业有限公司）；SPS402F型双杰电子天平（上海奥豪斯公司）。

1.2 试药

喙尾琵琶甲购自文山市小西门药材市场。

1.3 动物

昆明种小白鼠，4周龄，体质量（20±2）g，购自昆明医学院动物试验中心，云南实验动物许可证：SCXK（滇2011-0008）。动物按性别分组分笼饲养，喂食标准颗粒饲料，自由饮水和摄食。

2 方法

2.1 喙尾琵琶甲乙醇提取物的制备

喙尾琵琶甲1 kg用60%乙醇浸泡提取3次，将用纱布过滤后的提取液用旋转蒸发仪浓缩至膏状，将膏状物用蒸馏水配制成浓度为 6.25 g（生药） /mL溶液，放在4 ℃的冰箱中保存备用。

2.2 半数致死量实验

取昆明小白鼠40只，随机分成4个组，每组10 只，雌雄各半，以喙尾琵琶甲乙醇提取物可供灌胃的最大混悬浓度（6.25 g 生药/mL）为起始浓度，按组距 0.1 递减，即喙尾琵琶甲乙醇提取物以6250，625，62.5，6.25 mg/mL的药物浓度和小鼠灌胃可承受的最大体积0.4 mL/ 10 g 体重灌胃 1次。给药前禁食不禁水过夜（12 h左右），给药后常规饲养，观察小白鼠在给药后7 d内的死亡数并记录，7 d后全部动物脱颈处死。由于7 d内小白鼠无1只死亡，无法计算半数致死量，所以进行最大耐受量实验［4-5］。

2.3 最大耐受量实验

取昆明小白鼠20只，随机分成2个组，每组10只，雌雄各半，给药组以喙尾琵琶甲乙醇提取物可供灌胃的最大混悬浓度（每毫升含6.25 g生药）和0.4 mL/10 g体重的最大灌胃体积进行灌胃，灌胃前禁食不禁水过夜（12 h），之后1 d内间隔6 h 2次给药，间隔期间禁食不禁水，第2次给药4 h后开始喂食，观察7 d。空白对照组以等体积蒸馏水灌胃，方法同给药组。

2.4 观察指标

本实验的观察指标主要是小白鼠的死亡数、进食量和体质量，另外还辅以观察小白鼠给药前后的外观形态、行为活动、精神状态、分泌物和粪便形状等。进食量和体质量的记录都于每天早晨8点开始，其余辅助项的观察于给药当天多次进行记录，第2天后每天的上下午各观察1次，7 d后将小白鼠全部脱颈处死。

3 结果

3.1 半数致死量实验

喙尾琵琶甲乙醇提取物按0.4 mL/10 g灌胃体积，以6250，625，62.5，6.25 mg/mL的浓度灌胃后，在7 d观察时间内未见一只小白鼠死亡；对其各组间进行进食量和体质量比较也均显示出无显著性差异（ P＞ 0.05）；其辅助观察项外观形态、行为活动、精神状态、饮食情况、分泌物和排泄物等均未见明显异常。实验结果表明，喙尾琵琶甲乙醇提取物对实验小白鼠体质量增长与进食量无明显影响（见表 1，表 2） 。

表1 喙尾琵琶甲乙醇提取物对小白鼠体质量的影响（x±s） （单位：g）

表2 喙尾琵琶甲乙醇提取物对小白鼠进食量的影响（x ± s） （单位：g）

3.2 最大耐受量实验

在对小白鼠的死亡数的统计中，实验小白鼠以喙尾琵琶甲乙醇提取物的最大混悬浓度6.25 g/mL和可承受的最大体积0.4 mL/10 g体重1 d间隔6 h 2次灌胃给药后，连续观察7 d，小白鼠无死亡情况出现。由于6.25 g/mL 醇提液已经很粘稠，且该浓度已经很大，可作为最大给药浓度，故喙尾琵琶甲乙醇提取物对小鼠的最大耐受量（MTD）为500 g/kg；其次，在对小白鼠体质量和进食量的统计中，由表3和表4可知，除在给药当天，给药组小白鼠与对照组小白鼠在体质量和进食量上略有下降外（但无显著差异），在之后的6 d中又逐渐恢复正常，且与空白对照组比较无显著性差异（ P＞0.05）；第三，在对辅助项的观察中，无论是对照组还是给药组，在给药后的当天大部分小白鼠出现自主活动减少、懒动、不活跃、有的甚至出现闭目、反应有些迟钝等现象，但无竖毛、抽搐、翻倒等异常情况，且上述症状从给药第2天开始逐步恢复正常。

表3 喙尾琵琶甲乙醇提取物对最大耐受量实验小白鼠体质量的影响（ x±s） （单位：g）

表4 喙尾琵琶甲乙醇提取物对最大耐受量实验小白鼠进食量的影响（ x±s） （单位：g）

4 讨论

喙尾琵琶甲在民间的使用方法很多，有直接活体口服的，有在火中烧熟后口服的，有单药泡酒外用的，也有与其它药材配伍后服用的等等。但在使用剂量上缺乏科学指导，故本文对该药物的口服安全性提供科学依据，对指导临床用药，并进一步为该药的治疗方法的规范化和标准化研究打下良好的基础。本研究进行了喙尾琵琶甲乙醇提取物的半数致死量实验研究，喙尾琵琶甲乙醇提取物按0.4 mL/10 g灌胃体积，以 6250，625，62.5，6.25 mg/mL的浓度灌胃后，在7 d观察时间内未见一只小白鼠死亡，故无法计算出半致死剂量（LD50）；对其各组间进行进食量和体质量比较也均显示出无显著性差异（ P＞0.05）；其辅助观察项外观形态、行为活动、精神状态、饮食情况、分泌物和排泄物等均未见明显异常。这些现象都说明了喙尾琵琶甲乙醇提取物的毒性很低，故进行了最大耐受量研究。

在最大耐受量实验中，实验小白鼠以喙尾琵琶甲乙醇提取物的最大混悬浓度6.25 g/mL和可承受的最大体积0.4 mL/10 g 体重1 d间隔6 h 2次灌胃给药后，连续观察7 d，小白鼠无死亡情况出现。由于6.25 g/mL醇提液已经很粘稠，且该浓度已经很大，可作为最大给药浓度，故喙尾琵琶甲乙醇提取物对小鼠的最大耐受量（MTD）为500 g/kg；且喙尾琵琶甲乙醇提取物对小白鼠体质量和进食量的影响与对照组比较均无显著性差异（ P＞0.05），故可认为喙尾琵琶甲乙醇提取物急性毒性较小，在常规剂量下服用是安全、可靠的。

［1］赵敏，陈晓鸣，孙龙，等.云南省喙尾琵琶甲分布及生态环境调查［J］.林业科学研究，2007（3）：356-362.

［2］林南英，刘为忠，李维莉，等.药用昆虫云南琵琶甲的化学成分研究［J］.中国民族民间医药杂志，2000（3）：162-164.

［3］李蕾，罗氚芸，刘勇.云南琵琶甲抗菌活性成分研究［J］.中草药，2001（3）：197-199.

［4］徐叔云，卞如濂，陈修.药理实验方法学（第3版）［M］.北京：人民卫生出版社，2002：366.

［5］唐大轩，熊静悦，梁娅君，等.川楝子对大鼠完全急性毒性作用研究［J］.时珍国医国药，2011（10）：2387.