襄麦冬不同极性部位粗提物抗氧化性能初步评价*

聂 伦，熊尚森，余海忠

(湖北文理学院化学工程与食品科学学院，湖北襄阳441053)

襄麦冬，即湖北麦冬Liriope spicata(Thunb.)Lour.Var.Prolifera Y.T.Ma，为《中华人民共和国药典》(1995年版、2000年版、2005年版和2010版)收录的麦冬基原植物之一，已成为中药麦冬的主流商品。此道地药材因主产于湖北襄阳而俗称为襄麦冬，国家质检总局已于2008年发布53号公告批准对“襄麦冬”实施地理标志产品保护。研究表明，襄麦冬植物天然产物在抗氧化性、清除自由基作用方面有突出的表现，这对于防癌、抗癌、抗衰老、预防心血管疾病，提高人民身体健康具有积极的作用［1］。襄麦冬活性物质抗氧化性的研究目前尚未见报道，为了更加合理利用襄麦冬资源，本研究以蒸馏水、甲醇、无水乙醇、石油醚、乙酸乙酯、三氯甲烷等为溶剂，采用α－脱氧核糖法、邻苯三酚自氧化法、铁氰化钾还原法、抗脂质过氧化试验等方法，分别提取襄麦冬不同极性部位粗提物，并对其抗氧化性进行初步评价。

1 材料与方法

1.1 材料

襄麦冬，采自湖北襄阳欧庙襄麦冬规范化栽培基地。将其新鲜块根洗净沥干后置于电热恒温鼓风干燥箱50℃烘干至恒重，切片，粉碎，置于密闭容器中待用。

邻苯三酚、HCL、Tris碱、α －脱氧核糖、FESO4、EDTA、硫代巴比妥酸(TBA)、甲醇、无水乙醇、石油醚、乙酸乙酯、三氯甲烷、K3［Fe(CN)6］、三氯乙酸、FeCl3、磷酸氢二钾、磷酸二氢钾、KCl、10%卵黄悬液(1.15%的KCl溶液为溶剂)、十二烷基硫酸钠均为分析纯，购于国药集团上海公司。FZ10型微型植物粉碎机(天津泰斯特);GZX－9030－MBE电热恒温鼓风干燥箱(上海博讯);RE－52AA旋转蒸发仪(上海亚荣);DKB－501A超级恒温水槽(上海精宏);AL204电子分析天平(梅特勒－托利多);可调式微量移液枪(Finntte);UV－2550紫外－可见分光光度计(日本岛津);LRH－250－Gb光照培养箱(广东医疗)。

1.2 方法

1.2.1 襄麦冬活性物质的提取 分别称取10 g样品粉碎物，用100 mL蒸馏水、甲醇、无水乙醇、石油醚、乙酸乙酯、三氯甲烷50℃恒温水浴提取3 h，过滤，再分别向滤渣中加入100 mL上种溶剂50℃恒温水浴提取3 h，过滤。再重复一遍上述操作。合并3次滤液，经减压浓缩分别得到襄麦冬不同溶剂的提取浸膏，完全干燥后配制成浓度为0.05、0.1、0.2、0.4、0.8、1.6 mg/mL溶液。

1.2.2 襄麦冬粗提物体外抗氧化活性测定

羟基自由基清除能力的评价方法:采用α－脱氧核糖法，取0.2 mL的FeSO4－EDTA混合液(10 mmol/L)于具塞试管中，加入0.2 mLα－脱氧核糖溶液(10 mmol/L)，然后加入1 mL样品溶液，并用磷酸缓冲液(pH=7.4，0.1 mol/L)定容至1.8 mL，最后加入0.2 mL H2O2(10 mmol/L)，混匀后于37℃水浴中恒温保持1 h;然后再加入2.8%(w/w)三氯乙酸(TCA)溶液1.0 mL、1.0%(w/w)硫代巴比妥酸(TBA)溶液1 mL，混匀后于沸水浴中加热10 min，冷水冷却后在532 nm处测定吸光值AS［2］。不加样品溶液，同上操作处理，测定其对比吸光值AC。以不加样品溶液且不在37℃水浴中反应作为参比。样品的羟自由基清除能力可表示为:清除率(%)=［(1－AS)/AC］×100。

超氧阴离子自由基清除能力的评价方法:采用邻苯三酚自氧化法，取4.5 mL pH 8.2的Tris－HCI缓冲液(50 mmol/L)于具塞试管中，加入3.2 mL蒸馏水、1 mL样品溶液(空白管用蒸馏水代替)，混匀后在25℃水浴中保温20 min，取出后立即加入25℃预热过的0.3 mL邻苯三酚(3 mmol/L)，空白管用10 mmol/L HCl代替。迅速摇匀后倒入比色杯，在325 nm处每隔30 s测定吸光值，共测4 min，推迟30 s［3］。样品的·O－2清除能力可表示为:清除率(%)=［(A0－A)/A0］×100(A=A1－A2)。其中，A0为邻苯三酚自氧化速率;A1为加入样品后邻苯三酚自氧化速率;A2为样品的吸光值。

还原能力评价方法:采用铁氰化钾还原法，取1 mL样品溶液与2.5 mL pH 6.6的磷酸盐缓冲液(0.2 mol/L)及2.5 mL 1%铁氰化钾溶液混合，50℃保温20 min，加入2.5 mL 10%三氯乙酸，混匀，静置10 min于700 nm处测吸光值［4］。以吸光值大小表示还原能力大小。

抗脂质过氧化作用评价方法:抗脂质过氧化作用采用卵黄过氧化体系［5］。在具塞试管中加入0.5 mL 10%的卵黄悬浮液和0.1 mL不同浓度浸提液，用蒸馏水补至1 mL，再加入1.5 mL 20%的醋酸溶液和1.5 mL 0.8%TBA溶液，用微型混合振动仪振荡混合，加塞于95℃恒温水浴中加热60 min，流水冷却至室温，加入5.0 mL正丁醇，振荡后，3 000 rpm离心10 min，取上层清液，以正丁醇为空白管调零，用紫外分光光度计测定532 nm处的吸光度A1。不加提取物的对照体系吸光度为A0，平行测定5次。按下式计算提取物对卵黄脂蛋白过氧化作用:抑制率(%)==(A0－A1)/A0×100。

2 结果与分析

2.1 羟基自由基清除能力的评价结果

采用α－脱氧核糖法评价襄麦冬不同极性部位粗提物清除·OH的能力，其原理为:Fe2+－EDTA+H2O2→Fe3+－EDTA+·OH+OH;·OH+α－脱氧核糖→氧化产物丙二醛;丙二醛+TBA(TCA)→粉红色化合物。当反应体系中存在·OH清除剂时，·OH被部分清除，氧化产物丙二醛生成量减少，粉红色化合物生成量减少，532 nm下吸收减弱［6］。因此，清除能力的大小可以通过粉红色化合物生成量减少来表示。由图1可知，襄麦冬不同极性部位粗提物均对Fenton体系产生的·OH有清除能力，且清除活性随粗提物质量浓度的升高而逐渐增强。考察上述溶剂粗提物平均清除能力，则可以得出清除能力的大小顺序为:乙醇粗提取＞甲醇粗提物＞乙酸乙酯粗提物＞三氯甲烷粗提物＞石油醚粗提物＞蒸馏水粗提物。其中，乙醇粗提取、甲醇粗提物及乙酸乙酯粗提物的清除能力相近，均超过60%。

图1 襄麦冬不同极性部位粗提物的羟自由基清除能力Fig.1 The effects of different extracts from L.spicata Var.Prolifera on hydroxyl radical-scavenging abilities

2.2 超氧阴离子自由基清除能力的评价结果

采用邻苯三酚自氧化法评价襄麦冬不同极性部位粗提物对·O－2的清除能力，其原理如下:在碱性条件下(pH 8.2)，邻苯三酚发生自氧化反应，生成超氧阴离子自由基(·O－2)和中间产物，该中间产物在325 nm处有一特征吸收峰。当加入自由基清除剂时，·O－2的生成受到抑制，自氧化过程受阻，中间产物生成减少，在325 nm处的吸收减弱［6］。因此，可以通过测定A325的变化，推测襄麦冬不同极性部位粗提物对·O－2的清除能力。由图2可知，不同粗提物均对·O－2有一定的清除能力，除了三氯甲烷粗提物外，清除能力随粗提物质量浓度的升高而逐渐增强，但清除率普遍不高。在浓度为1.6 mg/mL时，最大清除率也不到40%(甲醇粗提物)。

图2 襄麦冬不同极性部位粗提物的超氧阴离子自由基清除能力Fig.2 The effects of different extracts from L.spicata Var.Prolifera on superoxide anion radical-scavenging abilities

2.3 还原能力评价结果

采用铁氰化钾还原法评价襄麦冬不同极性部位粗提物的还原能力，其原理为:当体系中存在还原性物质时，铁氰化钾被还原成亚铁氰化钾，亚铁氰化钾在酸性条件下与三氯化铁反应，生成普鲁士蓝，在700 nm波长处有最大吸收峰。故吸光值越大，表示待测物质的还原能力越强［6］。由图3可知，襄麦冬不同极性部位粗提物平均还原能力大小排序为:甲醇粗提物＞三氯甲烷粗提物＞乙醇粗提取＞乙酸乙酯粗提物＞蒸馏水粗提物＞石油醚粗提物。

图3 襄麦冬不同极性部位粗提物的还原能力Fig.3 The effects of different extracts from L.spicata Var.Prolifera on reducing abilities

2.4 抗脂质过氧化作用评价结果

试验结果表明，襄麦冬不同极性部位粗提物均表现出较强的抗脂质过氧化作用，且均随质量浓度升高而增强。其作用强度顺序为:三氯甲烷粗提物＞石油醚粗提物＞乙酸乙酯粗提物＞蒸馏水粗提物＞甲醇粗提物＞乙醇粗提取(图4)，且平均抑制率均超过55%，三氯甲烷粗提物达到91.21%。

图4 襄麦冬不同极性部位粗提物抗脂质过氧化作用Fig.4 Anti lipid peroxidation effects of different extracts from L.spicata Var.Prolifera

3 结论

本文采用α－脱氧核糖法、邻苯三酚自氧化法、铁氰化钾还原法、抗脂质过氧化试验4种国内外常用的体外抗氧化活性检测方法，对鄂西北产道地药材襄麦冬的蒸馏水、甲醇、无水乙醇、石油醚、乙酸乙酯、三氯甲烷粗提物的抗氧化性进行了化学评价，结果表明，襄麦冬不同极性部位粗提物均具有一定抗氧化性，而且在试验质量浓度范围内呈明显量效关系。襄麦冬是一种药食兼用的中药植物，其块根目前广泛应用到保健品、食品的开发中。因此，除了对·O－2清除能力偏低(不到40%)外，襄麦冬粗提物·OH的清除活性、还原能力及抗脂质过氧化作用在今后食品生产与保存中的应用值得期待。

［1］孙永林，刘慧宏，汤尚文，等.湖北麦冬的研究进展［J］.襄樊学院院报，2009，30(11):74－76.

［2］赵新淮.茶叶提取物对自由基的清除能力［J］.东北农业大学学报，1998，29(3):284－287.

［3］陈留勇，孟宪军，贾 薇，等.黄桃水溶性多糖的抗肿瘤作用及清除自由基、提高免疫活性研究［J］.食品科学，2004，25(2):167－170.

［4］LIYANA－PATHIRANA C M，SHAHIDI F，ALASALVAR C.Antioxidant activity of cherry laurel fruit(Laurocerasus officinalis Roem.)and its concentrated juice［J］.Food Chemistry，2006，99:121－128.

［5］MIGUEL G，SIMODE M，FIGUEIREDO A C，et al.Composition and antioxidant activetives of the essential oils of Thymus enespititius，T.camphorates and T.mastichina［J］.Food Chemistry，2004，86:83－88.

［6］余海忠，刘 统，林丹洁，等.鄂西北产鱼腥草提取物体外抗氧化性的四种化学方法评价［J］.中国野生植物资源，2012，31(1):22－25.