消定膏皮肤刺激性及致敏性研究△

李跟旺，刘效栓，焦正花，杨沛霖

(甘肃省中医院，甘肃 兰州 730050)

消定膏皮肤刺激性及致敏性研究△

李跟旺，刘效栓，焦正花*，杨沛霖

(甘肃省中医院，甘肃 兰州 730050)

目的：研究消定膏对家兔完整皮肤的刺激性及其对皮肤的致敏性。方法：家兔去毛后左侧区域为空白对照区，涂以蒸馏水0.5 mL；右侧区域为给药区，涂以0.5 g消定膏，每天涂抹1次，连续7 d，观察及记录红斑及水肿等情况，并按皮肤刺激反应评分标准进行评分研究其对完整皮肤的刺激性；通过与高致敏物2、4-二硝基氯苯比较研究其致敏性。结果：在连续贴敷消定膏第4天和第5天开始出现轻度红斑，贴敷第5天开始出现轻度水肿，停药后48 h逐渐恢复，对皮肤无过敏反应；消定膏过敏发生率为0%，无皮肤过敏反应。结论：消定膏对家兔完整皮肤具轻度刺激性，对皮肤无致敏反应。

消定膏；刺激性；致敏性

消定膏是甘肃省中医院骨科常用纯中药制剂，主要由大黄、儿茶、紫荆皮等5味中药组成，具有活血散瘀，消肿止痛的功效，同时有改善局部炎性疼痛及外伤性瘀血肿痛的作用。其临床疗效确切，不良反应小，在我院临床应用已有40余年，备受临床医生和患者的欢迎，取得了一定的经济效益和社会效益。作者在临床疗效确切的基础上，对其刺激性及相关致敏性进行研究，为医院制剂申报新药提供理论依据，使其具有广泛的实用性、先进性和科学性。

1 材料

1.1 药品与试剂

消定膏(棕褐色膏状物，批号：20070506，由甘肃省中医院提供)；2、4-二硝基氯苯(上海试剂一厂，批号：0060301)，临用前用分析纯丙酮配制成1%的致敏浓度和0.1%的激发浓度。

1.2 动物

健康白色家兔4只，体重2.5～3.0 kg，雌雄兼有，合格证号：甘医动字第14-004号；白色豚鼠，雌雄各半，体重250～300 g，合格证号：医动字14-003号，均由兰州生物制品研究所动物室提供。室温18～25 ℃，相对湿度40%～60%。

2 方法

2.1 消定膏对家兔多次皮肤刺激性试验[1-5]

将4只家兔预养3 d。试验前24 h，将家兔脊柱两侧被毛剪掉，用硫化钠-淀粉-肥皂粉(3∶7∶1)的比例用水配成糊状，脱毛，用清水清洗干净；不损伤表皮，去毛范围左、右各约3 cm×3 cm。去毛24 h后每只动物左侧区域为空白对照区，涂以蒸馏水0.5 mL；右侧区域为给药区，涂以0.5 g消定膏，涂抹面积2.5 cm×2.5 cm。涂抹后用一层玻璃纸和两层纱布覆盖，再用无刺激胶布和绷带加以固定。每天涂抹1次，连续7 d，每次涂抹后至少保留4 h。从第2天开始，每次去除药物1 h以及再次贴敷前观察并记录红斑及水肿，涂敷部位是否有色素沉着、出血点，皮肤粗糙或皮肤菲薄情况及其发生时间及消退时间，并按皮肤刺激反应评分标准进行评分。末次贴敷后，在去除药物后1，24，48，72 h肉眼观察并记录涂敷部位有无红斑和水肿等情况。空白对照区和试验区同样处理、观察。

计算每一观察时点各组积分均值，然后计算观察期限内每天每只动物刺激积分均值，每天每只动物刺激积分均值=每天每只动物各时点刺激评分总和/每天每只动物评分次数)，按表1～2的皮肤刺激强度评价标准进行评价[6]。

表1 皮肤刺激及致敏性反应评分标准

表2 皮肤刺激强度评价标准

2.2 皮肤致敏反应试验[7]

将豚鼠30只，预养3 d后，随机分为3组，分别为消定膏组、阳性对照组(2、4-二硝基氯苯)、阴性对照组(0.9%氯化钠溶液)，每组10只。试验前24 h，将豚鼠背部左侧或右侧脱毛，用清水清洗干净，不损伤表皮，去毛范围左、右均约3 cm×3 cm。

取消定膏0.2 g，涂抹于豚鼠左侧背部脱毛区，涂抹后用两层纱布和一层玻璃纸覆盖，再用无刺激胶布封闭固定6 h。阳性对照组涂抹1% 2、4-二硝基氯苯0.2 mL，阴性对照组涂抹0.9%氯化钠溶液0.2 mL，涂抹后处理方法同受试物组。试验第7天和第14天以同样方法各重复1次，共计3次。于末次致敏后14 d，再次将受试物0.2 g涂于豚鼠右侧脱毛区，方法同前。6 h后去掉受试物，即刻观察，然后于24，48，72 h再次观察皮肤过敏反应情况，并按表3皮肤过敏反应评分标准对各时间进行评分[8]。同时密切观察动物是否有哮喘、站立不稳或休克等严重的全身过敏反应。阳性对照组涂抹0.1% 2，4-二硝基氯苯0.2 mL，阴性对照组涂抹0.9%氯化钠溶液，观察方法同受试物组。

致敏反应发生率=有过敏反应动物数(不论程度轻重)/动物总数×100%。按表3皮肤致敏性评价标准推断受试物的致敏性。

表3 皮肤致敏性评价标准

2.3 统计学处理

3 结果

3.1 消定膏对家兔皮肤刺激反应试验结果

在试验观察期内，根据皮肤刺激性强度评价标准，在连续贴敷消定膏第4天和第5天分别有2只家兔开始出现轻度红斑，并逐渐加重；贴敷第5天开始出现轻度水肿。停药后48 h逐渐恢复。空白对照区未出现上述刺激症状，涂抹及观察期内未见动物全身异常反应，试验结果见表4。

表4 消定膏对家兔多次皮肤刺激性试验结果(n=4)

根据皮肤刺激强度评价标准：每天每只动物刺激积分均值0.5～2.99时，为轻度刺激性。本试验结果表明，消定膏多次连续涂抹给药后每天每只动物完整皮肤刺激积分均值为1.40，可判消定膏对家兔的完整皮肤均有轻度刺激作用。

3.2 消定膏对豚鼠皮肤过敏反应试验结果

消定膏组与阴性对照组致敏激发接触后观察，阳性对照组自激发给药6 h后，即刻观察动物有出现轻度红斑、明显红斑或严重红斑，同时伴有轻度水肿、中度水肿或重度水肿，皮肤隆起1 mm，轮廓清楚等不同程度的过敏反应，总积分35分；24 h开始消退，总积分为27分；48 h总积分18分；72 h后总积分为12分，致敏率100%。阳性对照2、4-二硝基氯苯过敏发生率为100%，为极度致敏性；消定膏过敏发生率为0%，无皮肤过敏反应，见表5。

表5 消定膏对豚鼠皮肤过敏反应试验结果

4 结论

消定膏属活血散瘀、消肿止痛的中药膏剂，在骨外科领域用于跌打损伤，消肿止痛，疗效确切。

本试验通过豚鼠皮肤过敏试验，以高致敏物2、4-二硝基氯苯为阳性对照，观察消定膏皮肤用药的过敏性反应。致敏试验的研究发现消定膏对皮肤无致敏性，使用较为安全可靠。通过消定膏对家兔皮肤刺激性试验及对豚鼠皮肤的致敏试验研究，确定消定膏对家兔完整皮肤有轻度刺激作用，对皮肤无致敏性。

[1] 国家食品药品监督管理局.中药、天然药物刺激性和溶血性研究的技术指导原则[S].2005.

[2] 胡楠楠，王雪峰，赵雪，等.敷胸巴布贴制剂对健康家兔皮肤刺激实验研究[J].辽宁中医杂志，2012,39(6)：1168-1169.

[3] 王北婴，李仪奎.中药新药研制开发技术与方法[J].上海：上海科学技术出版社，2001：788-808.

[4] 陈奇.中药药理研究方法学[J].北京：人民卫生出版社，2000：112-119.

[5] 郑利光，翟所迪.甘草锌膜对实验性口腔溃疡的治疗作用及其粘膜刺激性研究[J].中国新药杂志，2006，15(8)：601-603.

[6] 卫生部药政管理局.中药新药研究指南(药学、药理学、毒理学)[M].1994：205-207.

[7] 许景川.蜂胶提取物对口腔黏膜刺激和皮肤致敏作用的实验研究[J].海峡药学，2010，22(12)：27-28.

[8] 国家食品药品监督管理局.中药、天然药物免疫毒性(过敏性、光敏性反应)研究的技术指导原则[S].2005.

TheSkinIrritationandSensitizationResearchofXiaodingGao

LI Gen-wang,LIU Xiao-shuan,JIAO Zheng-hua,YANG Pei-lin

(GansuProvinceHospitalofTCM,Lanzhou730050,China)

Objective： To study skin irritation and sensitization of Xiaoding Gao with rabbit.Methods： After removing rabbit hair,the left side is blank controlled area,coated with distilled water 0.5 mL； The right is medicine area and coated with 0.5 g Xiaoding Gao,once daily,continuous 7 d,observe and record erythema,edema indicators,rate according to the ‘skin stimulation reactions rating criteria’. Skin sensitization of Xiaoding Gao is compared with 2,4-two nitro chlorobenzene,which is highly allergic.Results： After continuous applying Xiaoding Gao,mild erythema was appeared at 4thor 5thday,mild edema was found at 5thday. 48 h after discontinuation of Xiaoding Gao,erythema and edema disappeared gradually,and there wae no skin allergic reaction. The allergic rate of Xiaoding Gao is 0%.Conclusion： Xiaoding Gao has little skin irritation and no sensitization effect to complete rabbit skin.

Xiaoding Gao； Irritation； Sensitization

2012-07-16)

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2003～2010年甘肃省中医药管理局中医药科研项目(2003-GZK-16)

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焦正花，E-mail：939410984@qq.com