基于HPLC对不同产地枸杞子中甜菜碱含量的研究△

杨宗学，林楠，蔺海明*，张巨琼

(1.甘肃省永登县上川镇农业科技服务中心，甘肃 兰州 730030；2.甘肃农业大学，甘肃 兰州 730070)

基于HPLC对不同产地枸杞子中甜菜碱含量的研究△

杨宗学1，林楠2，蔺海明2*，张巨琼2

(1.甘肃省永登县上川镇农业科技服务中心，甘肃 兰州 730030；2.甘肃农业大学，甘肃 兰州 730070)

目的：比较不同枸杞子中甜菜碱的含量并评价永登县上川镇产的枸杞质量。方法：采用HPLC对9个不同样品枸杞进行甜菜碱含量测定。采用NH2色谱柱(250 mm×4.6 mm，5 μm),流动相为乙腈-水(95∶0.5)、流速为0.6 mL·min-1、检测波长为230 nm，柱温为30 ℃，进样量为10 μL。结果：永登县上川镇产的枸杞子中甜菜碱含量为0.432 5%，处较高水平。结论：HPLC测定甜菜碱含量准确度高、重现性好；永登县上川镇所产枸杞子中甜菜碱含量高，在该地区培育出优质枸杞是可行的。

HPLC；不同产地；枸杞；甜菜碱；含量

枸杞LyciumbarbarumL.是茄科枸杞属灌木植物，富含的多糖、氨基酸及生物碱等多种成分使其具有丰富的药理作用。甜菜碱(betaine)作为枸杞中的一种重要成分，在体内起甲基供应体的作用，可以抗脂肪肝[1-2]。前人已有很多关于枸杞子甜菜碱的研究，其中有研究认为NH2柱未经衍生高效液相色谱法所测甜菜碱含量明显高于分光光度法[3]；亦有研究认为HPLC测定枸杞子甜菜碱含量灵敏度高、结果准确，可作为枸杞子中甜菜碱的定量测定方法[4]；同时有人在对枸杞的高效液相色谱指纹图谱的研究中指出用于枸杞质量控制的液相色谱指纹图谱对提取方法具有很强的依赖性，用枸杞甜菜碱提取液的液相色谱指纹图谱对品种进行识别效果较好[5]；另外还有一些研究提出了其他多种甜菜碱的提取和含量测定方法[6-10]，这些研究对枸杞子中甜菜碱的提取及含量测定有着重要意义。但目前尚无以应用日益广泛、测定结果较准确的HPLC对跨省区、多品种的枸杞子进行甜菜碱含量的测定和比较。作者以甘肃省永登县上川镇生产的枸杞子为主体，通过HPLC对不同产地、不同品种枸杞子的甜菜碱含量进行测定并对比，以期为进一步完善HPLC测定甜菜碱的色谱分析条件提供参考，同时对甘肃省永登县秦王川地区枸杞的栽培和品质的评价提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 材料

研究用的材料均为2011年8月分别采自宁夏农科院枸杞观光园、宁夏中宁县舟塔乡、宁夏平罗县头闸镇、甘肃景泰县草窝滩乡、甘肃靖远县东升乡、甘肃省玉门市玉门镇、甘肃景泰县草窝滩乡、青海省诺木洪农场和甘肃永登县上川镇的同一批次枸杞子。其中宁夏3份，甘肃5份，青海1份，品种除甘肃景泰县草窝滩乡的为“蒙杞1号”、青海省诺木洪农场的为“柴杞”外，其余7份均为“宁杞1号”。

1.2 仪器与试剂

LC-20AT高效液相色谱仪，岛津SPD-M20A二极阵列管检测器，LC-solution色谱工作站，NH2色谱柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，RE-6000旋转蒸发仪，PL303-IC梅特勒电子天平，恒温水浴锅，无水甲醇，超纯水，乙腈。

2 方法

2.1 供试品溶液的制备[11]

精密称取枸杞子粉末2.000 g，加入无水甲醇50 mL，80 ℃回流提取1 h，放至室温，过滤，用30 mL甲醇分次洗涤滤渣和滤器，合并滤液，40 ℃下减压浓缩，水溶解定容至10 mL，备用。在色谱分析前，过0.45 μm微孔滤膜，并根据需要做浓度处理。

2.2 对照品溶液的制备

取甜菜碱对照品适量，精密称定，水溶解定容，得到浓度为0.12 mg·mL-1的溶液，备用。

2.3 线性关系考察

分别取对照品溶液2.5,5,7.5,10,12.5,15 μL注入色谱仪，按实验条件进行色谱分析，以进样量为横坐标，峰面积为纵坐标得线性方程Y=136 914X+8 786.3，r=0.999 4，表明进样量在0.3～1.8 μg与峰面积线性关系良好。

2.4 方法学考察

2.4.1 精密度试验 精密吸取浓度为0.12 mg·mL-1的对照品溶液10 μL，重复进样5次，进行色谱分析，测定峰面积，结果RSD=0.80%，表明精密度良好。

2.4.2 稳定性试验 分别取1号样品供试液10 μL，于0,2,6,12,24 h后进样，测定峰面积，结果RSD=0.98%，表明供试品溶液在24 h内稳定性良好。

2.4.3 重现性试验 取1号枸杞子样品，制备5分供试液，分别取10 μL进样，测定峰面积，结果RSD=1.29%，表明该法重现性良好。

2.4.4 回收率试验 取已知甜菜碱含量的供试液，加适量的对照品溶液，取10 μL进样(n=6)，测定峰面积并计算回收率，结果平均回收率为98.45%，RSD%=2.32%。

3 结果与分析

3.1 色谱条件及典型色谱图

图1 甜菜碱对照品和枸杞子供试样品HPLC图

通过试验对波长、流速、流动相的配比等进行摸索，最终确定在NH2色谱柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)、乙腈-水(95∶0.5)、流速0.6 mL·min-1、检测波长230 nm、柱温30 ℃、进样量10 μL的条件下色谱分析效果良好。对照品及样品甜菜碱色谱图如图1所示。样品的色谱图中，甜菜碱峰型明显，在5 min左右出现，其中1号样品为甘肃省永登县甘露池村所产枸杞子，甜菜碱峰面积分值为317 079，3号样品即宁夏中宁县舟塔乡枸杞子样品的峰面积分值最高，为425 750；各样品间色谱图呈现出不同程度的差异，产地不同的同品种枸杞子1号和3号、6号和7号色谱峰特征性分别相似(如图1中B、D、G、H所示)，而2号、4号、5号则各有特点，差异较大；不同品种枸杞子的色谱峰亦有差异，8号、9号色谱峰与其他样品均呈现较大差异(如图1中I、J所示)，证明样品色谱图的相似度由产地条件和样品品种共同决定，不同样品其化学成分含量有差异。

3.2 不同枸杞子甜菜碱含量的比较

通过对9个样品的甜菜碱峰面积进行测定，进而计算出各样品甜菜碱含量，最高为0.588 0%，最低为0.300 4%，均大于0.300 0%，达到《中国药典》2010版规定标准；对9个样品含量进行比较，结果显示，不同枸杞子甜菜碱含量存在差异,见表1。

表1 不同产地枸杞子甜菜碱含量比较

注：不同小写字母表示该指标差异具有统计学意义，P<0.05

由表1可以看出，甘肃永登县上川镇所产枸杞子的甜菜碱含量为0.432 5%，在所有供试样品中列第3位，处于较高水平；对不同产地的枸杞子样品进行品种内对比后发现，不同产地的同一品种枸杞子，甜菜碱含量差异具有统计学意义，其中宁夏所产枸杞子除平罗县头闸镇样品外，甜菜碱含量均较高，整体处于优势地位，其中就包括最高的中宁县舟塔乡所产枸杞子，甜菜碱含量为0.588 0%；此外对不同品种的枸杞子进行对比发现，品种不同甜菜碱含量差异明显，其中甘肃景泰县草窝滩乡所产“蒙杞1号”枸杞子，甜菜碱含量为0.404 5%，处于中等偏上水平，而青海诺木洪农场的“柴杞”则含量较低。

4 结论与讨论

4.1 结论

供试样品枸杞子的色谱图呈现不同程度的差异，同品种枸杞子中亦有较多色谱图相似度较差，证明产地条件对枸杞子甜菜碱色谱图的特征性有影响。

9个不同枸杞子样品中甜菜碱含量有明显差异，其中同品种“宁杞1号”枸杞甜菜碱含量从0.300 4%到0.588 0%不等，而部分“宁杞1号”枸杞子与“蒙杞1号”、“柴杞”甜菜碱含量差异亦具有统计学意义，证明同一枸杞子品种产地不同其甜菜碱含量有差异、不同枸杞子品种间甜菜碱含量也存在不同程度的差异，产地条件与品种因素对甜菜碱含量都有影响，这与前人部分研究结论一致[13]。

4.2 讨论

在进行高效液相色谱测定时，曾选用C18色谱柱[12]，但效果较差，分析其原因可能是由于甜菜碱为季胺型水溶性生物碱，极性较大所致，故选择NH2色谱柱，结果分离效果良好；实验中还分别在检测波长195，210，230 nm下进行色谱分析，结果在230 nm下各组分色谱峰均有较大吸收。

实验进一步肯定了HPLC在测定枸杞子甜菜碱含量方面准确度高、重现性好的优势[3-4,14]；研究主体甘肃永登县上川镇所产枸杞子的甜菜碱含量在9个样品中处第3位，就甜菜碱这一药用成分而言品质较优，这一结果有助于日后在甘肃省秦王川地区继续开展枸杞的栽培与选育工作。

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StudyonDeterminationofBetaineinLyciiFructusfromDifferentHabitatsbyHPLC

YANG Zong-xue1,LIN Nan2，LIN Hai-ming2*,ZHANG Ju-qiong2

(1.ServiceCenterofAgriculturalScienceandTechnologyofYongdengCounty,Lanzhou730030，China； 2.GansuAgriculturalUniversity,Lanzhou730070，China)

Objective： To compare the betaine content in Lycii Fructus from different habitats and evaluate the quality ofLyciumbarbarumfrom Shangchuan town,Yongdeng county.Methods： Use HPLC to determine betaine content of 9 different samples. NH2(250 mm×4.6 mm，5 μm) chromatographic column,acetonitrile： water (95∶0.5),the flow rate was 0.6 mL·min-1,the detective wavelength was 230 nm,the temperature was 30 ℃ and the injection volume was 10 μL.Results： The betaine content in Lycii Fructus from Shangchuan town is 0.432 5%,this is a high level.Conclusion： The HPLC method is precise and reproducible,betaine content in Lycii Fructus from Shangchuan town is high,it is possible to yield good quality ofLyciumbarbarumat Shangchuan town.

HPLC ； Habitat； Lycii Fructus； Betaine

2012-11-04)

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兰州市科技计划项目(2010-1-236)

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蔺海明，E-mail：linhm@gsau.edu.cn