薯莨中鞣质类成分的含量测定△

王小平，陈建章，王进

(江西中医药高等专科学校，江西 抚州 344000)

薯莨中鞣质类成分的含量测定△

王小平*，陈建章，王进

(江西中医药高等专科学校，江西 抚州 344000)

目的：测定黎川岩泉自然保护区中薯莨的总鞣质和缩合鞣质含量。方法：采用《中国药典》(2010年版)比色法测定总鞣质，采用香草醛硫酸法测定缩合鞣质。结果：薯莨中总鞣质与缩合鞣质平均质量分数分别为(501.81±8.62)mg·g-1，(421.78±11.65)mg·g-1。结论：薯莨鞣质含量高，鞣质类型主要为缩合鞣质，具有良好的开发前景。

薯莨；总鞣质；缩合鞣质；比色法；香草醛硫酸法

妇科经、带、胎、产、杂等病的出血证为临床常见病，是导致妇女慢性贫血、继发性感染和不孕不育症的重要原因，而采取有效的药物治疗对出血病症有着积极的作用。目前临床可用的止血药品种虽然较多，鉴于妇科出血与内分泌功能等多种因素有关，单纯应用化学止血药并不能止住其出血状况，且往往易多发，副作用多。因此，选用具有多靶点、多成分、多环节作用特点的中药制剂治疗妇科出血病症存在着巨大的市场需求。薯莨为薯蓣科植物薯莨DiascoreocirrhosaLour.的块茎。味甘、酸，性平；有小毒。具有补血活血，收敛止血，通络止痛的功能。在民间，薯莨有悠久的应用历史，其止血作用突出，广泛用于治疗内伤吐血、外伤出血、痢疾、失血性贫血、月经过多、血崩等症。薯莨中主要含鞣质、酚类、苷类、蛋白质、糖类、黏液等成分，其中生物活性成分为缩合鞣质[1-2]。目前，尚无同时测定薯莨中主要生物活性成分总鞣质与缩合鞣质的文献报道。本实验分别采用《中国药典》2010年版一部磷钼钨酸比色法及香草醛硫酸法测定其总鞣质及缩合鞣质含量，为薯莨质量控制及临床应用提供依据。

1 仪器与材料

1.1 仪器

Tu-1901型紫外可见分光光度计(北京普析)；METTLER-TOLEDD AB265-S型电子分析天平(瑞士梅特勒)；KQ3200超声波清洗器(中国昆山)；FST-Ⅲ-10精密型超纯水机(上海富诗特)。

1.2 材料

薯莨采集于江西省黎川县岩泉自然保护区，经我校李秀英副教授鉴定为薯蓣科植物薯莨DiascoreocirrhosaLour.；没食子酸对照品(批号：110831-200302)、儿茶素对照品(批号：110877-200001)购自中国食品药品检定研究院；干酪素(上海精细化工科技有限公司，批号：20091011)；化学试剂均为分析纯。

磷钼钨酸试剂：依《中国药典》2010版一部附录ⅩⅤB项下方法配制。

2 方法

2.1 总鞣质含量测定[3]

2.1.1 对照品溶液的制备 精密称取没食子酸对照品51.36 mg，置100 mL棕色容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度。精密量取5 mL，置50 mL棕色容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，即得。

2.1.2 标准曲线的制备 精密量取对照品溶液0.5，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 mL，分别置于25 mL棕色容量瓶中，各加入磷钼钨酸试剂1 mL，再分别加水11.5，11，10，9，8，7 mL，用29%碳酸钠溶液稀释至刻度，摇匀，放置30 min，以相应的试剂为空白，照紫外-可见分光光度法，在760 nm的波长处测定吸光度。以吸光度(Y)为纵坐标，浓度(X)为横坐标，绘制标准曲线，回归方程为Y=0.074 8X-0.034 7，r=0.999 8，表明没食子酸浓度在1.03～10.27 μg·mL-1与吸光度呈良好线性关系。

2.1.3 供试品溶液的制备 取薯莨粉末约0.25 g，精密称定，置250 mL棕色容量瓶中，加水150 mL，放置过夜，超声处理25 min，用水稀释至刻度，摇匀，静置，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液20 mL，置100 mL棕色容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，即得。

2.1.4 精密度考察 取供试品溶液适量，照标准曲线制备项下方法，连续测定吸光度6次。结果吸光度RSD=0.01%，表明仪器精密度良好。

2.1.5 稳定性考察 称取薯莨粉末0.25 g，精密称定，依法制备供试品溶液，照标准曲线制备项下方法，每隔20 min测定1次吸光度，测定时间为2 h。结果吸光度RSD=2.63%，表明供试品溶液在2 h内是稳定的。

2.1.6 重复性试验 分别称取同一批次薯莨粉末6份，每份0.25 g，精密称定，依法制备供试品溶液并测定总酚量与不被吸附的多酚量。结果总鞣质平均质量分数为494.37 mg·g-1，RSD=2.64%，表明样品测定方法重复性好。

2.1.7 加样回收率试验 分别称取已知总酚含量的薯莨粉末6份，每份0.1 g，精密称定，各加入精密称定的没食子酸对照品10 mg，依法制备供试品溶液并测定总酚量，计算加样回收率，结果见表1。

表1 薯莨中没食子酸加样回收率试验

2.1.8 含量测定

2.1.8.1 总酚 精密量取供试品溶液2 mL，置25 mL棕色容量瓶中，照标准曲线制备项下，自“加入磷钼钨酸试液1 mL”起同法操作，加水10 mL，测定吸光度，从标准曲线中读出供试品溶液中没食子酸的浓度，计算即得。

2.1.8.2 不被吸附的多酚 精密量取供试品溶液25 mL，加至已盛有干酪素0.6 g的100 mL具塞锥形瓶中，密塞，置30 ℃水浴中保温1 h，时时振摇，取出放冷，摇匀，滤过，弃去初滤液，续滤液备用。另称取干酪素0.6 g，置100 mL具塞锥形瓶，加水25 mL，密塞，同法随行制备干酪素空白溶液。精密量取续滤液各2 mL，分别置于25 mL棕色容量瓶中，照标准曲线制备项下的方法，自“加入磷钼钨酸试液1 mL”开始，加水10 mL，测定吸光度，从标准曲线中读出供试品溶液中没食子酸的浓度，按公式计算不被吸附的多酚量，不被吸附的多酚量=溶液中游离多酚的含量-干酪素空白溶液中多酚的含量。

按公式计算总鞣质含量：鞣质含量=总酚量-不被吸附的多酚量

2.2 缩合鞣质含量测定[4]

2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取儿茶素对照品16.71 mg，置25 mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得儿茶素贮备液。

2.2.2 标准曲线的绘制 精密称取儿茶素贮备液0.5，1，2，3，4，5 mL，分别置于10 mL量瓶中，加入甲醇稀释定容至刻度，摇匀。精密量取各溶液0.5 mL，分别加至包有锡箔的试管中，加入2.5 mL 3%香草醛甲醇溶液和2.5 mL 30%浓硫酸甲醇溶液，摇匀，避光显色20 min。以相应的试剂为空白，照紫外-可见分光光度法，在500 nm波长处测定吸光度。以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线，回归方程为Y=0.029 9X-0.039，r=0.999 3，表明儿茶素浓度在3.0～30.4 μg·mL-1与吸光度呈良好线性关系。

2.2.3 供试品溶液的制备 取薯莨粉末约0.1 g，精密称定，置50 mL棕色容量瓶中，加甲醇至刻度，超声处理30 min，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液1 mL，置10 mL棕色容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。

2.2.4 精密度试验 取供试品溶液适量，依法连续测定6 次，结果吸光度RSD=0.10%，表明仪器精密度良好。

2.2.5 稳定性试验 称取薯莨粉末0.1 g，精密称定，依法制备供试品溶液，照标准曲线制备项下方法，分别于第0，10，20，30，40，50，60 min测定吸光度，结果吸光度RSD=1.09%，表明样品溶液在1 h内稳定性良好。

2.2.6 重复性试验 分别称取同一批次薯莨粉末6份，每份0.1 g，精密称定，依法制备供试品溶液并测定吸光度，计算缩合鞣质平均质量分数为418.63 mg·g-1，RSD=2.52%，表明该方法重复性良好。

2.2.7 加样回收率试验 分别称取已知缩合鞣质含量的薯莨粉末6份，每份0.06 g，精密称定，各加入浓度为1.128 mg·mL-1儿茶素对照品溶液4 mL，依法制备供试品溶液并测定含量，计算回收率，结果见表2。

表2 薯莨中儿茶素加样回收率试验

注：儿茶素对照品加入量均为4.512 mg

2.2.8 含量测定 精密量取供试品溶液0.5 mL，置包有锡箔的试管中，分别加入2.5 mL 3%香草醛甲醇溶液和2.5 mL 30%浓硫酸甲醇溶液，摇匀，避光显色20 min，依法测定吸光度，从标准曲线中读出供试品溶液中儿茶素的浓度，计算即得。

2.3 含量测定结果

分别称取薯莨药材粉末3批，依法测定其中总鞣质与缩合鞣质含量，结果见表3。

表3 薯莨中总鞣质与缩合鞣质含量测定 /mg·g-1

3 讨论

鞣质是一类广泛存在于植物中比较复杂的具有沉淀蛋白质性质的水溶性多元酚类化合物，具有广泛的药理作用。薯莨中主要活性指标成分为鞣质，具有抗菌、抗溃疡、抗病毒、抗菌、止血及降压等作用[5-6]。根据薯莨中所含鞣质类成分性质，本实验采用《中国药典》比色法及香草醛硫酸法分别测定其中总鞣质与缩合鞣质含量，结果表明采自黎川岩泉自然保护区内的野生薯莨中主要含缩合鞣质，开发前景良好。

采用《中国药典》法测定鞣质过程中，干酪素可能会干扰试验结果。经试验验证，结果表明与文献报道[7]一致。因此，本文在测定不被吸附的多酚含量时，随行干酪素空白试验。

采用《中国药典》2010年版附录ⅩB鞣质测定法测定鞣质时，需加入29%碳酸钠溶液。由于碳酸钠溶解度受温度影响，在室温较低的冬季进行实验时，碳酸钠较易析出晶体而影响测定，而在气温较高的夏天进行本项实验时，测定方法的可操作性良好。因此，采用本法测定鞣质时是否应加高浓度的碳酸钠溶液值得商榷。

[1] 南京中医药大学.中药大辞典[M].第二版.下册.上海:上海科学技术出版社，2006：3722.

[2] 国家中医药管理局《中华本草》编委会.中华本草[M].第22卷.上海：上海科学技术出版社，1999：228.

[3] 国家药典委员会.中国药典[S].一部.北京：中国医药科技出版社，2010：附录62.

[4] 程悦，陈嘉升，陈建萍，等.地榆提取物中不同类型鞣质的测定[J].中成药，2011，33(5)：852-857.

[5] 钟超，严奉祥.薯莨的研究进展[J].现代医药卫生，2007，23(5)：675-677.

[6] 夏承来，钟超.薯莨醇提成分对大鼠血压的影响[J].南方医科大学学报，2010，30(1)：160-162.

[7] 谢道刚，宋光志，刘静.鞣质含量测定法(2005版药典一部附录ⅩB)方法学验证[J].世界科学技术—中医药现代化，2006，8(6)：50-53.

DeterminationofTanninsContentinDioscoreacirrhosaLour.

WANG Xiao-ping*, CHEN Jian-zhang, WANG Jin

(JiangxiCollegeofTraditionalChineseMedicine，Fuzhou344000,China)

Objective：To establish the quantitative assay of total tannins and condensed tannins inDioscoreacirrhosaLour. from the Lichuan Yanquan Nature Reserve of Jiangxi province.Methods: The colorimetry in Chinese Pharmacopoeia(2010)was used for the determination of total tannins content.The Vanillin-H2SO4method was employed for the determination of condensed tannins content.Results: The content of total tannins and condensed tannins were (501.81±8.62) mg·g-1and (421.78±11.65) mg·g-1respectively.Conclusion: WildDioscoreacirrhosaLour.collected from the Lichuan Yanquan Nature Reserve of Jiangxi province，contained high content tannins which was mainly condensed tannin. This impliesDioscoreacirrhosaLour. has a good exploration prospect.

DioscoreacirrhosaLour.；Total tannins；Condensed tannin；Colorimetry；Vanillin-H2SO4method

2012-09-01)

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江西省卫生厅中医药科研基金重点课题(2009Z11)

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王小平，Tel：(0794)8239328，E-mail：jxrcwxp@163.com