分光光度法测定硒含量影响因子的探讨

王华芳

（三门峡职业技术学院 生化工程系，河南 三门峡472000）

前言

硒浓度高低与人体健康密切相关，适量硒能增强机体免疫力、防癌、抗癌等，硒含量过低可导致人体营养不良;而高硒将表现为毒性,导致家畜发生“碱毒病”等地方病[1]。人体中的硒主要来自于食物，因此如何准确测定食品中硒的含量就显得尤为重要。

目前，食品中硒浓度的测定方法主要有：原子光谱法[2]、原子荧光分析法[3-4]、电化学法[5]、紫外可见光谱法[6-7]等，杨玉玲[8]对近年来硒测定方法进行了很好的综述。其中，紫外可见分光光度法由以操作简便、快速、灵敏度高、稳定性强等优势而应用最为广泛。

在催化光度法中，多采用甲基红[9]，二甲基黄[10]，邻苯二酚紫[11]，亚甲蓝[12]等为指示剂，本文首次采用甲基橙为指示剂，通过硒催化溴酸钾氧化甲基橙变色反应，建立了一种测定食品中硒含量的新方法。

1 试验部分

1.1 主要仪器

TU-1810型紫外可见分光光度计

（北京普析通用仪器有限公司）

FA604A电子天平

（上海精天电子仪器有限公司）

1.2 主要试剂

盐酸、溴酸钾、亚硒酸、硫酸溶液、磷酸溶液、碘化钾、氯化钾、氧化锌、氯化铵、氯化铜、三氯化铁、氯化铬结晶、氯化铝，以上试剂均为分析纯。甲基橙指示剂，天津化学试剂研究所。

1.3 试验方法

于两支规格相同的50mL的比色管中，依次加入甲基橙（100μg/mL）溶液、盐酸（0.025mol/L）溶液、2.0ml溴酸钾（0.1mol/L）溶液，在其中一支比色管中加入 2.0ml硒标准溶液（1000μg/ml），另一支作为试剂空白，均用水稀释到刻度，摇匀，在60℃水浴温度下水浴，之后用1cm的比色皿，以蒸馏水为参比，测定其吸光度，其中含硒标准溶液的吸光度为A，试剂空白的吸光度为A0，计算Log(A0/A)。

利用单因素试验确定试验条件，共考查了以下几个因素：测定波长、测定时所需要的介质酸、盐酸用量、甲基橙用量和反应时间。

2 结果及分析

2.1 催化条件的选择

2.1.1 波长的选择

以蒸馏水为参比，按照1.3试验方法配制不同的催化体系和非催化体系，测定其吸光度值，分别记录为A和A0，光谱扫描曲线如下图。

图1 体系光谱扫描曲线

由图知：催化体系和非催化体系的最大吸收波长均在506.00nm，故选此为测定波长。

2.1.2 介质酸的选择

固定其他实验条件，改变不同酸介质，依次为硫酸、磷酸和盐酸，分别测定催化体系和非催化体系下的吸光度值，根据光谱扫描曲线的变化找出最佳酸介质，其中酸的浓度均为0.025mol/L，光谱扫描结果如表1所示。

表1 不同酸介质的光谱扫描曲线结果

硫酸介质中，氧化体系和非氧化体系的最大波长有较大波动，不利于测定；采用磷酸介质时波长比较稳定，但是Log(A0/A)为负值，选择0.025mol/L的盐酸时比较合适。

2.1.3 0.025mol/L盐酸用量的选择

改变盐酸用量，测定计算Log(A0/A)，结果见图2。

图2 盐酸用量对试验结果的影响

由图可知：对于0.025mol/L的盐酸，当其用量为6.0mL时，Log(A0/A)较大且稳定，因此本试验选用盐酸量为6.0mL。

2.1.4 甲基橙用量的选择

通过改变甲基橙用量，测定并计算测定计算Log(A0/A)，根据 Log(A0/A)选择合适条件，见图 3。

中性红用量在2.0—2.5mL范围内Log(A0/A)较大且稳定。本试验选用甲基橙溶液（100μg/ml）的量为2.0mL。

图3 甲基橙用量对试验结果的影响

2.1.5 反应时间的选择

测定不同反应时间对结果的影响，见图4。

图4 反应时间的选择曲线

试验结果表明，水浴时间为20—25分钟时，反应的Log(A0/A)稳定且较大，所以我们选择水浴时间为20分钟。

2.2 工作曲线的绘制

分别配制 0.2、0.6、1.0、1.4、1.8、2.2、2.6μg/ml的硒标准溶液，测量其在506nm下的吸光度值，计算Log(A0/A)，并绘制Log(A0/A)对硒浓度线性关系，所得曲线即为工作曲线，结果见下图。

图5 硒标液工作曲线

由图5可知，硒标液浓度为0.2－2.6μg/mL时，其与Log(A0/A)线性关系良好，回归方程为Log(A0/A)＝0.0207C+0.0106，相关系数 γ＝0.9991，表观摩尔吸收系数为 4.21×104L mol-1cm-1。

2.3 共存离子的影响

根据试验方法1.3，测定共存离子对试验结果的影响，本实验共考查了14种离子（表2）。

表2 共存离子的影响

对于硒的测定，允许相对误差小于±5%。试验结果表明 K+，Na+，F-，Cu2+，Ca2+，Cl-，SO42-，PO43-不干扰测定，对于Fe3+，产生的干扰严重，可通过添加氟离子来进行掩蔽。

2.4 样品测定结果

取10g硒盐为待测样品，按照1.3试验方法分别测定非催化体系的A0和催化体系的A，根据工作曲线Log(A0/A)＝0.0207C+0.0106计算硒盐中硒的含量。由表3可知，该方法用于硒的测定结果令人满意。

表3 样品中硒的含量

2.5 加标回收率

分别对样品进行加标回收实验，回收率及其精密度数据见表4。

表4 加标回收试验结果

试验结果表明，此法的加标回收实验测定的结果令人满意。

3 结论

盐酸介质中，以甲基橙为指示剂，利用分光光度法能够准确测定食品中硒的含量，线性回归方程为 Log(A0/A)＝0.0207C+0.0106，相关系数 γ＝0.9991，表观摩尔吸光系数为4.21×104Lmol-1cm-1，样品的回收率为96.60%-98.20%，测定结果令人满意。

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