黄芪总苷对SCC15口腔癌细胞活力的影响及机制

张卓 李志刚

黄芪总苷对SCC15口腔癌细胞活力的影响及机制

张卓 李志刚

目的 探讨黄芪总苷对SCC15口腔鳞状癌细胞活力的抑制作用及机制。 方法 将不同浓度黄芪总苷(100, 200, 400 μg/ml)作用于SCC15口腔癌细胞, 72 h后以噻唑蓝比色法检测各组细胞活力, Western blot法检测细胞凋亡抑制蛋白Survivin的表达。结果 黄芪总苷可剂量依赖性地抑制SCC15口腔癌细胞活力。不同浓度黄芪总苷均可抑制Survivin在SCC15细胞中的表达, Survivin的表达随黄芪总苷浓度增加而减少。 结论 黄芪总苷可能通过抑制Survivin表达而降低SCC15口腔癌细胞活力。

黄芪总苷；SCC15细胞；细胞活力；Survivin

黄芪可提高机体免疫力, 具有补中益气、升阳固表等功效, 是常用的补益类中药, 也是肿瘤患者扶正固本方剂中的常用药物［1］。现代研究表明, 黄芪总苷是黄芪的主要有效成分之一, 可诱导人急性早幼粒细胞、子宫内膜癌细胞、肝癌细胞以及肺腺癌等细胞凋亡［2-5］, 但黄芪总苷对口腔癌细胞的影响及机制尚不明确。因此, 本研究拟探讨黄芪总苷对SCC15口腔癌细胞的影响及分子机制, 以期为口腔癌的临床用药提供理论基础。

1 材料与方法

1.1 材料及仪器 SCC15口腔鳞状癌细胞株(中科院上海细胞库), 胎牛血清及DMEM培养基(Gibco公司), 黄芪总苷(纯度≥98%, 南京广润生物制品有限公司), 噻唑蓝(MTT, 南京建成生物工程研究所), Survivin抗体(Santa公司), 酶标仪(北京普郎克公司)。

1.2 实验分组 DMEM培养基中添加10%胎牛血清培养SCC15细胞, 对照组不添加处理因素, 黄芪总苷处理组分别给予终浓度为100, 200, 400 μg/ml的黄芪总苷。按1×104/孔的密度将SCC15细胞接种于96孔细胞培养板。

1.3 MTT法检测SCC15细胞存活率 细胞分组培养72 h,换无血清培养基培养4 h, 向每孔加入20 μl MTT(浓度为5 mg/ml)作用4 h, 弃去96孔板内液体, 加入150 μl二甲亚砜振荡10 min, 酶标仪上以490 nm波长检测各孔吸光度, 细胞活力=(检测组吸光度/对照组吸光度)×100%。

1.4 Western blot检测Survivin蛋白表达 收集分组培养72 h的SCC15细胞, 粉碎细胞后以4℃ 12000 r/min离心15 min, Brafford法检测并调节上清液中蛋白质浓度, SDS-PAGE电泳蛋白, 将蛋白转移至PVDF膜, 以Survivin蛋白及β-actin一抗室温下分别孵育3 h, 再以辣根过氧化物酶标记的二抗孵育1 h, 利用增强化学发光法显影。以β-actin为内对照, 观察Survivin蛋白表达。

2 结果

2.1 黄芪总苷对SCC15细胞活力的影响 不同浓度黄芪总苷均可抑制SCC15细胞活力, 浓度为100、200及400 μg/ml的黄芪总苷处理SCC15细胞72 h后, 细胞活力分别为(69.58±9.46)%、(61.31±4.38)%及(48.47±6.83)%, 细胞活力均明显低于对照组, 呈剂量依赖性(均为P＜0.01)。

2.2 黄芪总苷对SCC15细胞Survivin蛋白表达的影响 Western blot检测显示, 黄芪总苷可抑制SCC15细胞Survivin蛋白表达, 呈明显的剂量依赖性, Survivin的表达随黄芪总苷浓度增加而减少(图1)。

图1 Survivin蛋白表达变化A组：对照组；B组：黄芪总苷100 μg/ml；C组：黄芪总苷200 μg/ml；D组：黄芪总苷400 μg/ml

3 讨论

口腔癌是颌面部常见的黏膜上皮肿瘤, 多发于40～60岁人群, 发病部位以舌、颊、牙龈以及腭部最多见, 病理类型以鳞状细胞癌最常见, 约80%左右［6］。口腔癌早期以局部淋巴结转移为主, 晚期可发生远处转移。该病恶性度较高,目前的治疗仍以早发现, 早诊断, 早治疗等措施为主, 仍无有效治疗手段。

黄芪是传统的补益类中药, 具有补中益气、升阳固表等功效, 现代药理学证实黄芪具有抗衰老、提高机体免疫力等功能, 是肿瘤患者扶正固本方剂中的常用药［1］。黄芪总苷是黄芪的主要有效成分之一, 可诱导人急性早幼粒细胞NB4细胞、子宫内膜癌KLE细胞、肝癌BEL-7402细胞以及肺腺癌A549等细胞凋亡［2-5］, 本研究也发现, 黄芪总苷可明显抑制SCC15口腔鳞状细胞癌的活力, 且黄芪总苷浓度越高, 肿瘤细胞活力越低, 对细胞的抑制作用越明显, 呈剂量依赖性。Survivin是一种重要的凋亡抑制因子, Survivin的表达上调是口腔鳞状细胞癌发生发展的重要机制之一［7］。本研究发现,黄芪总苷可剂量依赖性地抑制Survivin在SCC15口腔鳞状细胞癌中的表达, Surivivin的表达减少与SCC15细胞活性降低趋势一致。因此, 黄芪总苷可能通过抑制Survivin表达降低了SCC15细胞活力。尽管本研究仍有许多问题有待进一步探讨, 但本文对于揭示黄芪总苷在口腔鳞状细胞癌治疗中的作用具有重要意义。

［1］ 孙燕, 洪婉君, 邓健, 等. 扶正中药治疗肿瘤患者的10年随访观察. 中西医结合杂志, 1987, 7(12):712-714.

［2］ 谢晶, 夏瑞祥. 黄芪总苷诱导NB4凋亡过程中死亡受体通路分子变化. 安徽医科大学学报, 2013,48(1):12-15.

［3］ 孙聪聪, 张英姿, 张玥, 等. 黄芪总苷对人子宫内膜癌KLE细胞作用的研究. 中华临床医师杂志(电子版), 2012,6(8): 59-62.

［4］ 黄熠, 胡火珍. 黄芪总苷对肝癌BEL-7402细胞株的抑制作用.时珍国医国药, 2011,22(5): 1261-1262.

［5］ 牛艳, 张羽飞. 黄芪总苷对人肺腺癌A549细胞增殖及凋亡的影响. 牡丹江医学院学报, 2008, 29(3): 16-18.

［6］ Khan Z, Bisen PS. Oncoapoptotic signaling and deregulated target genes in cancers: special reference to oral cancer. Biochim Biophys Acta, 2013,1836(1):123-145.

［7］ Marioni G, D'Alessandro E, Bertolin A, et al. Survivin multifaceted activity in head and neck carcinoma: current evidence and future therapeutic challenges. Acta Otolaryngol. 2010,130(1):4-9.

121000 辽宁医学院附属二院口腔修复科

李志刚 E-mail：zgli700103@yahoo.com.cn