不同商品规格川贝母总生物碱含量测定的方法研究

王纯玉，何祖新，吴玉良

(1.四川省攀枝花市中西医结合医院，四川 攀枝花 617000;2.成都中医药大学，四川 成都 611137;3.四川康定金珠制药有限责任公司，四川 康定 626100)

川贝母(Szechwan fritillary bulb)是来源于百合科(Liliaceae)贝母属(Fritillaries L.)中多种植物的鳞茎，使用历史悠久，汉代《神农本草经》早有记载，列为中品，具有清热润肺、化痰止咳的作用。2010年版《中国药典(一部)》只收载了川贝母，包括6个基源种、4个商品规格，以同一质量标准进行质量控制[1]，没有体现不同规格等级川贝母的质量差异[2－3]。笔者以西贝母碱为对照品，探索采用酸性染料比色法[4－6]测定4个不同商品规格的川贝母中总生物碱含量。现报道如下。

1 仪器与试药

BP211D型电子天平(赛多利斯公司);TU－190型双光束紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司);HHS－21－4型电热恒温水浴锅(江苏金坛宏凯仪器厂)。川贝母(四川康晨生物科技有限公司提供);西贝母碱(中国药品生物制品检定所，批号为110767－2005045);三氯甲烷、甲醇、氨水均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 溶液制备

取西贝母碱对照品适量，精密称定9.98mg，置50mL容量瓶中，加三氯甲烷至刻度，制成质量浓度为0.199 6 g/L的对照品溶液。取本品2 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加浓氨试液4mL，浸润0.5 h，加三氯甲烷－甲醇(4∶1)混合溶液40mL，置80℃水浴加热回流2 h，放冷，滤过，滤液置50mL容量瓶中，用适量三氯甲烷－甲醇(4∶1)混合溶液洗涤药渣2～3次，洗液并入同一量瓶中，加三氯甲烷－甲醇(4∶1)混合溶液至刻度，摇匀;精密量取5mL，置25mL具塞试管中，水浴上蒸干，精密加入三氯甲烷10mL使溶解，精密加水5 mL，再精密加0.05%溴甲酚绿缓冲液(取溴甲酚绿0.05 g，用0.2moL/L氢氧化钠溶液6mL使溶解，加磷酸二氢钾1 g，加水溶解并稀释至100mL)3mL，密塞，剧烈振摇，转移至分液漏斗中，放置30min，用干燥滤纸滤过，取续滤液，即得供试品溶液。

2.2 检测波长选择

精密量取西贝母碱对照品溶液1mL，加三氯甲烷至10.0mL，精密加水5mL，再精密加0.05%溴甲酚绿缓冲液3mL，密塞，剧烈振摇，转移至分液漏斗中，放置30min。取三氯甲烷液，用干燥滤纸滤过，取续滤液，以相应的试剂为空白，用岛津TU－1901型紫外可见近红外分光光度计进行光谱扫描(190～900 nm)。由光谱图(图1)可见，对照品西贝母碱在414 nm波长处有最大吸收，故选择414 nm作为检测波长。

图1 西贝母碱紫外吸收光谱图

2.3 方法学考察

线性关系考察:精密量取对照品溶液5mL，稀释至50mL，再精密量取 1，2，3，5，10mL，分别置 25mL 具塞试管中，加三氯甲烷至10.0mL，精密加水5mL，再精密加0.05%溴甲酚绿缓冲液3mL，密塞，剧烈振摇，转移至分液漏斗中，放置30 min，用干燥滤纸滤过，取续滤液，以相应的试剂为空白，照紫外－可见分光光度法，在414 nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标、质量浓度为横坐标绘制标准曲线。得回归方程 Y=0.016 64X－0.011 51，R2=0.996 9(n=5)。结果表明，西贝母碱质量浓度在19.96～199.6μg/mL范围内与吸光度呈良好的线性关系。

精密度试验:精密量取同一对照品溶液1.0mL于25mL具塞锥形瓶中，按照线性关系考察项下方法，测定吸光度。结果吸光度平均值为0.494 6，RSD为0.23%(n=5)，表明仪器精密度良好。

稳定性试验:在室温下取对照品溶液和供试品溶液，按照线性关系考察项下方法，于0，1，2，4，8 h时依法测定吸收度。结果对照品溶液和供试品溶液吸光度的 RSD分别为0.56%和1.65%，均小于2.0%(n=5)，表明两者在室温下8 h内基本稳定。

重复性试验:取同一川贝母5份，每份2 g，依法制备供试品溶液并测定吸光度，计算含量。结果样品中总生物碱含量的平均值为 1 382.2 μg/g，RSD 为 0.63%(n=5)，表明方法重复性好。

加样回收试验:取已知含量的样品(1 382.2μg/g)6份，每份1 g，精密称定，分别精密加入西贝母碱对照品适量，置50mL具塞锥形瓶中，按供试品溶液制备方法制备待测溶液，依法测定含量，计算回收率。结果见表1。

表1 西贝母碱加样回收试验结果(n=6)

2.4 样品含量测定

取4种不同规格的川贝母，按2.2项下方法制备供试品溶液，依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中西贝母碱的质量(μg)，计算总碱的含量。结果见表2。

表2 不同规格川贝母总碱含量测定结果(%)

3 讨论

彭士梅等[7]采用贝母素甲为指标成分，测定贝母中总碱的含量。而2010年版《中国药典(一部)》采用的指标成分为西贝母碱[1]，故本研究中选择西贝母碱作为川贝母含量测定的指标成分。

酸性染料比色法是目前测定贝母类总生物碱最常用、可靠的方法。本研究中曾还采用两性滴定法测定总碱的含量[8]，试验结果表明，酸性染料比色法结果更准确、可靠，操作简便可行，适用于川贝母的质量控制。

试验过程中还发现有问题需要改进:水浴回流提取时水浴温度不能过高，如果温度过高，剧烈沸腾可使大量粉末冲出溶液，附于无溶剂的烧瓶壁上，使生物碱不能被充分提取，致使含量测定结果偏低;加入溴甲酚绿染色的量还要进一步考察确定，本试验中加入2，3，5mL，吸光度值会随着加入量的增加而改变，3mL已能充分染色;振摇要非常仔细，以使反应完全，振摇后应置分液漏斗中静置20～30min，使水层与氯仿层充分分层，并将氯仿层用干燥滤纸滤过，以除去氯仿层可能含有的水及染料。本试验结果显示，栽培品的总生物碱含量最高，与传统的品质评价标准有差异。现行版药典仅以总生物碱含量作为川贝母的质量控制指标不很全面，而且不同规格川贝母之间的含量差别较大，应该研究更全面、可行的方法来控制川贝母的质量。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京:中国医药科技出版社，2010:34.

[2]张荣发.川贝母的研究进展[J].中国药业，2006，15(8):62.

[3]唐小鹏，唐生斌，魏艳阳.川贝母混伪品的基源和性状鉴定[J].中国药业，2002，11(10):64.

[4]王冲之，孙 健.贝母类药材生物碱及生物碱苷含量测定方法学研究[J].中国药学杂志，2003，38(6):415 －418.

[5]王艳红，吴晓民，郑友兰.不同产地和采收期的平贝母总生物碱含量[J].中药材，2006，29(1):8 －10.

[6]丁 霞，李幼荣，房克慧.酸性染料比色法测定浙贝母中总生物碱的含量[J].中国药业，1999，8(10):46.

[7]彭士梅，高明远.酸性染料比色法测定川贝母中的贝母甲素的含量[J].中国药事，2006，20(11):687－688.

[8]蒋爱芳，杨义芳，黄文武.酸性染料比色法测定总生物碱的研究进展[J].中草药，2006(37):359－361.