高效液相色谱法检测止咳平喘类中成药中非法添加的醋酸泼尼松、茶碱

孔卫东，周世玉

(四川省成都市食品药品检测中心，四川 成都 610045)

近年来发现市场上存在一些宣称止咳、抗哮喘的纯中药制剂，其中非法添加了止咳平喘类和激素类化学药，如醋酸泼尼松、茶碱等，如果患者不知情而长期、大量服用这些所谓的纯中药制剂，不仅延误疾病的治疗，且可能发生中毒甚至危及生命。醋酸泼尼松为肾上腺皮质激素，有抗炎与抗过敏作用，对咳嗽、哮喘等过敏性疾病有较明显的效果，但盲目滥用该类药物可能导致全身性过敏反应、多种代谢异常、儿童生长抑制、诱发青光眼、精神症状等。茶碱是甲基嘌呤类药物，主要用于治疗支气管哮喘、肺气肿、支气管炎等症，其药理作用与血浓度有关，但有效血浓度安全范围很窄，口服吸收不稳定，且个体差异很大，一次用量过大或反复用药其作用积累，均有发生过量中毒的可能。因此，有必要建立准确、可靠、快速的分析方法，用于检测止咳平喘类中药制剂中非法添加的醋酸泼尼松、茶碱等化学药品。

1 仪器与试药

美国Waters2687型高效液相色谱仪，Waters2487检测器，empower色谱数据工作站;AE－240型电子天平(瑞士梅特勒－托利多公司)。肺力咳合剂(贵阳建兴药业有限公司，批号为20081106);化痰平喘片(通化华辰药业股份有限公司，批号为20080501);咳克片(江西民济药业有限公司，批号为070908);肺宁片(长春万德制药有限公司);得乐咳喘宁胶囊(成都得乐医院制剂，批号为080721);咳克片(中山市恒山药业有限公司，批号20080306)。醋酸泼尼松对照品(批号为10012－0105)、茶碱对照品(批号为 100121－199903)均由中国药品生物制品检定所提供。流动相中的甲醇为色谱纯，水为超纯水，其他试剂试药均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱:Meritech C18柱(250 mm × 4.6 mm，5 μm);流动相:甲醇－水;检测波长:醋酸泼尼松240 nm，茶碱275 nm;流速:1.0 mL/min;柱温:35℃。理论板数按醋酸泼尼松及茶碱计算均不低于10 000。

2.2 溶液制备

精密称取醋酸泼尼松12.99 mg，置25 mL容量瓶中，加甲醇溶解，定容至刻度，摇匀，作醋酸泼尼松对照品储备溶液;精密称取茶碱8.27 mg，置25 mL容量瓶中，加甲醇溶解，定容至刻度，摇匀，作为茶碱对照品储备溶液。根据醋酸泼尼松及茶碱的日服剂量换算，确定样品取样量，取肺力咳合剂50 mL，化痰平喘片3 g，咳克片2 g，肺宁片6 g，得乐咳喘宁胶囊3 g，固体制剂研碎，液体制剂蒸干，分置50 mL容量瓶中，加甲醇适量，超声处理20 min，用甲醇定容至刻度，摇匀，滤过，作为供试品溶液。

2.3 方法学考察

线性关系考察:吸取醋酸泼尼松对照品储备溶液5 mL，置50 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作对照品溶液Ⅰ;吸取醋酸泼尼松对照品储备溶液1 mL，置100 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作对照品溶液Ⅱ，吸取对照品溶液Ⅱ4，8，16，20 μL，对照品溶液Ⅰ5，10 μL，对照品储备溶液 3 μL，注入液相色谱仪，以进样质量对峰面积回归，得醋酸泼尼松的线性回归方程为Y=2 134 996.90X－17 351.86，r=0.999 9(n=7)。取茶碱对照品储备溶液5 mL，置50 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作对照品溶液Ⅰ;取对照品储备溶液1 mL，置100 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作对照品溶液Ⅱ，吸取对照品溶液Ⅱ4，8，15 μL，对照品溶液Ⅰ3，5，7，16 μL，对照品储备溶液4 μL注入液相色谱仪，以进样质量对峰面积回归，得茶碱的线性回归方程为Y=2 628 780X+15 622，r=0.999(n=7)。结果表明，醋酸泼尼松进样量在 2.078 4 ×10－2～1.558 8 μg范围内与峰面积呈良好线性关系;茶碱进样量在 1.323 2 ×10－2～1.323 2 μg 范围内与峰面积呈良好线性关系。

精密度试验:分别吸取醋酸泼尼松及茶碱对照品溶液Ⅰ5 μL，注入液相色谱仪，连续进样6次，按上述色谱条件测定。结果醋酸泼尼松和茶碱的峰面积RSD分别为0.94%和0.13%(n=6)，表明仪器精密度良好。

加样回收试验:精密称取不含醋酸泼尼松及茶碱的咳克片(江西济民药业有限公司，批号070908)作为空白样品，精密称取6份，置50 mL容量瓶中，分别精密加入醋酸泼尼松对照品储备溶液及茶碱对照品储备溶液各5 mL，加甲醇适量，超声处理20 min，放置至室温，用甲醇定容至刻度，摇匀，滤过，作为回收率供试品溶液，按上述色谱条件测定，进样5 μL，计算回收率。结果见表1。

表1 醋酸泼尼松和茶碱加样回收试验结果(n=6)

2.4 样品检测

按供试品溶液制备方法及上述色谱条件操作并测定，进样10 μL，结果6批样品均未检查出醋酸泼尼松及茶碱。见图1－2。

图1 醋酸泼尼松高效液相色谱图

图2 茶碱高效液相色谱图

3 讨论

由于现有常规药品标准检验时无法检出中成药中添加的醋酸泼尼松及茶碱，故在中成药中擅自添加化学药品具有极大的危害性和隐蔽性。本法可用于止咳平喘类中成药中以醋酸泼尼松和茶碱为指标的非法添加成分的检测，对有效控制药品质量具有现实意义。

中药成分较复杂，参照2005年版《中国药典(二部)》的色谱条件[1]及相关资料[2－3]，分别选用240 nm和275 nm作为醋酸泼尼松和茶碱的检测波长，以甲醇－水为流动相，通过反复调整流动相比例，结果以甲醇－水(55∶45)为流动相时，醋酸泼尼松保留时间适中，能排除样品中各成分的干扰，而茶碱保留时间较短，很多杂质也在几分中内出峰，各峰无法分开。通过调整流动相比例，适当延长茶碱的出峰时间，以甲醇－水(20∶80)为流动相时，茶碱保留时间适中，能排除样品中各成分的干扰，峰形对称。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典(二部)[M].北京:化学工业出版社，2005:616.

[2]陈 黎，张红梅.顺气化痰片(气管炎片)质量标准研究[J].江苏大学学报，2003，12(2):42－43.

[3]杨积平，裕海明.反相高效液相色谱法测定氨茶碱人体血药浓度[J].安徽医药，2006，12(4):263 －264.