用高效液相色谱法鉴别小叶菝葜

黄慧莲 刘丽莎 刘荣华 邵 峰 任 刚 舒积成 林 涛

(江西中医学院现代中药制剂教育部重点实验室，南昌，330004)

小叶菝葜为菝葜属植物小叶菝葜Smilax microphylla C.H.Wright的根茎，其味甘、苦，性平，临床上普遍用于治疗痛风性关节炎、支气管炎、肺结核咳嗽等疾患。现代药理研究表明，口服小叶菝葜提取物可以明显促进高尿酸血症模型大鼠的尿酸排泄，降低血液中的尿酸水平［1－2］。我们在本试验对4种小叶菝葜进行考察，通过对高效液相色谱图进行分析比较，可为其鉴别研究提供一定的参考。

1 仪器与试药

Agilent Technologies 1200 Series高效液相色谱仪(G1322A在线脱气、G1311A四元泵、G1316A TCC、G1314B VWD)(美国Agilent公司);实验用小叶菝葜(样品编号为1～4)分别采自湖南省永顺县、桑植县、保靖县及古丈县，经江西中医学院赖学文副教授鉴定为小叶菝葜。

2 方法与结果［3－5］

2.1 色谱条件

色谱柱:Thermon C18(250 mm × 4.6 mm，5 μm);流动相为乙腈 －0.2%磷酸水梯度洗脱，分析时间82min，浓度梯度为0～15min(5% ～15%)，15～55min(15% ～25%)，55～82min(25% ～60%);流速为1.0mL·min－1;检测波长为330nm;柱温为35℃;进样量为10μL。

2.2 供试品溶液

分别取各药材适量，粉碎，过3号筛，精密称取3.0g，置25mL具塞锥形瓶中，加入10mL甲醇，密塞，称重，超声(工作频率80kHz)提取60min，放置冷却，补足重量，用0.22μm微孔滤膜过滤，即得。

2.3 测定方法

精密吸取供试品溶液10μL，注入液相色谱仪，记录82min的色谱图。

2.4 方法学考察

2.4.1 空白试验 精密吸取空白溶液10μL，注入高效液相色谱仪，按“2.1”项下规定的梯度条件洗脱，结果表明空白不干扰测定。

2.4.2 精密度考察 取样品编号为2的小叶菝葜1份，制备供试品溶液，重复进样6次，记录色图谱，考察各共有峰的相对保留时间以及相对峰面积比值的一致性，结果显示，共有峰的相对保留时间的RSD值均小于0.2%，相对峰面积的RSD值均小于3.8%，色谱峰的相似度高于0.994，表明该方法精密度良好。

2.4.3 重复性考察 取样品2的小叶菝葜6份，每份3.0g，制备供试品溶液，在结果显示，各共有峰的相对保留时间的RSD值均小于0.4%，相对峰面积的RSD值均小于3.8%，相似度高于0.994。表明该方法重复性良好。

表1 小叶菝葜相对保留时间

表2 小叶菝葜相对峰面积

2.4.4 稳定性考察 取样品编号为2的小叶菝葜1份，制备供试品溶液，在放置 0、2、4、8、12、24 h 后进样，记录色图谱，结果显示，各共有峰的相对保留时间的RSD值均小于0.3%，相对峰面积的RSD值均小于4.2%;相似度高于0.98;表明供试品在24 h内稳定。

图1 小叶菝葜对照色谱图(t/min)

图2 小叶菝葜样品的HPLC色谱图

2.5 小叶菝葜HPLC图谱共有模式的建立［6－8］

在“2.1”项下色谱条件，对4批小叶菝葜进行分析，记录色谱图，可以确定18个共有峰，其中5号峰含量较高，且峰形较好，将其作为参照峰，计算各峰对它的相对保留时间、相对峰面积。结果见表1和表2。采用“中药指纹图谱相似度计算软件2004年A版”，将4批小叶菝葜药材图谱数据导入，生成对照指纹图谱，见图1，各批次药材与对照指纹图谱的相似度分别为 0.899、0.913、0.94、0.966，基本符合药典规定的相似度要求。

3 讨论

本实验采用HPLC法测定了4批小叶菝葜的色谱图，该方法稳定可靠，重现性好，可借助指纹图谱相关分析方法比较不同产地小叶菝葜的异同。本研究通过建立包括18个共有峰的小叶菝葜色谱图，基本反映其化学背景特征，这对小叶菝葜的鉴别提供了一定的参考依据。

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