HPLC法测定新疆阿魏不同部位阿魏酸的含量

高婷婷，丁 旭，谭 勇，2*，王 恒，王翔飞

1新疆石河子大学药学院;2新疆特种植物药资源省部共建教育部重点实验室，石河子 832002

新疆阿魏(Ferula sinkiangensis K.M.Shen.)为于伞形科阿魏属多年生草本植物。其树脂入药，具有消积、散痞、杀虫的作用，传统用于治疗肉食积滞，瘀血症瘕，腹中痞块和虫积腹痛等疾病［1］。阿魏为我国常用中药材，主要分布在新疆，是新疆特有珍稀药用植物资源［2］。阿魏传统药用部位主要是树脂，而其它部位较少入药。阿魏酸为阿魏的主要成分之一，具有抗氧化、抗菌消炎、降血脂和免疫调节等药理作用［3］。目前关于新疆阿魏主要集中于其化学成分的研究［4，5］，姜林［6］对新疆阿魏不同物候期阿魏酸含量进行了研究，新疆阿魏不同部位阿魏酸含量相关研究未见报道。为进一步了解新疆阿魏主要有效成分在植物中分布情况以及更好地综合利用该植物资源，本文采用HPLC法对新疆阿魏不同部位阿魏酸进行了含量测定，为拓展新疆阿魏药用部位及资源的开发利用提供科学依据。

1 仪器与材料

岛津LC150型高效液相色谱仪;KQ 3200型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司);Sartorius BP211D十万分之一分析天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司)。阿魏酸标准品(中国药品生物制品鉴定所，批次110773-200611);甲醇(色谱纯，SK Chemicals公司);乙腈(色谱纯，SK Chemlcals公司)。

实验用新疆阿魏于采自新疆省伊宁市喀什乡拜石墩，经中国科学院新疆生态与地理研究所沈观冕研究员鉴定为新疆阿魏(Ferula sinkiangensis K.M.Shen)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱:PLATISIL ODS(250 mm × 4.6 mm，5 μm);流动相:甲醇 ～0.1%冰醋酸水溶液水(35∶65)［1］;流速:1.0 mL/min;柱温:30℃;检测波长:320 nm;进样量:10 μL。对照品和供试品色谱图见图1。

图1 阿魏酸对照品(A)和新疆阿魏供试品(B)的HPLC色谱图Fig.1 HPLC chromatograms of ferulic acid standard(A)and sample of F.sinkiangensis(B)

2.2 对照品溶液制备

精密称取阿魏酸对照品11.01 mg，置25 mL容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，摇匀。再移去1 mL到50 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，配制成8.8 μg/mL的阿魏酸对照品储备液。

2.3 供试品溶液制备

取阿魏药材粉末适量，精密称取0.5000 g，置具塞三角瓶中，精密加入甲醇25 mL，密塞称重，室温下超声处理0.5 h，取出冷却至室温，称重，用甲醇补足减少的重量，5000 rpm 离心 10 min，过 0.45 μm滤膜，取续滤液，即得阿魏酸供试品溶液。

2.4 线性关系考察

精密吸取阿魏酸对照品溶液 2、4、6、8、10、12、14、16 μL，进样，按“2.1”项下色谱条件进样测定，以峰面积对阿魏酸进样量做线性回归，得回归方程为Y=176386X-83634，相关系数R2=0.9997。结果表明阿魏酸进样量在0.440～5.396 μg/mL范围内与峰面积呈良好的线性关系。

2.5 精密度试验

精密吸取对照品溶液 10 μL，按“2.1”项下色谱条件连续进样5次，结果日内RSD为0.72%(n=5);连续分析3 d考察日间误差，RSD为0.8%，表明仪器进样精密度良好。

2.6 稳定性试验

取新建阿魏根样品一份，按“2.3”项下方法制备供试品，分别在 0、1、2、3、4、5、6、7、16、24 h 进样10 μL，测定阿魏酸峰面积值。结果，RSD为0.63%(n=6)，表明供试品在24 h内稳定性较好。

2.7 重复性试验

称取新疆阿魏根样品5份，按“2.1”项下色谱条件进样测定。测得阿魏酸平均峰面积为447252.6，RSD=1.12%，表明该方法重现性良好。

2.8 回收率试验

采用加样回收法。取同一样品提取液9份，分别加入相当于已知样品含量80%、100%及120%的对照品溶液。按“2.3”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件进样 10 μL，测定。结果，平均回收率达97.8%，RSD=1.79%，结果见表1。

表1 回收率测定结果Table 1 Results of recovery tests

6 0.5 0.0522 0.052 0.1029 97.4 7 0.504 0.0517 0.062 0.1113 96.1 8 0.502 0.0515 0.0618 0.1122 98.2 9 0.501 0.0518 0.0622 0.1142 100.3

2.9 样品测定

取新疆阿魏供试品，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件进行测定，结果见表2。

表2 新疆阿魏不同部位阿魏酸的含量测定结果Table 2 Content of ferulic acid in different parts of F.sinkiangensis

3 讨论

我国中药品种多，但资源蕴藏量有限。开发利用药用植物的不同部位，不仅可以扩大中药资源亦可为控制中药质量或其它应用提供依据。川芎茎叶所含的挥发油为根、根茎的1/3左右，但茎叶重量比根高约3倍［7］。柴胡茎叶均有退热作用，一些地区已有使用茎叶的习惯［8］。中药资源的综合利用是当前研究的热点。

从测定结果看，新疆阿魏不同部位的阿魏酸含量:胶 ＞根 ＞叶 ＞茎，其中阿魏胶含量最高，达到0.2600 mg/g，茎中含量最低为 0.0225 mg/g。由于新疆阿魏自身生长条件的限制［9］加之长期以来的乱采滥挖，导致新疆阿魏植物资源的巨大破坏。实验表明新疆阿魏的不同部位均含有阿魏酸，因此这些部位均可以作为提取物的制备原料，有利于拓展新疆阿魏资源的药用价值及更好地利用该植物资源。

1 Chinese Pharmacopoeia Commission(国家药典委员会).Pharmacopoeia of the People’s Republic of China(中华人民共和国药典).Beijing:China Medical Science Press，2010.Vol I，176.

2 Shan RY(单人驿)，Yu ML(余孟兰).Flora of china(中国植 物 志).Beijing:Science and Technology Publishing House，1992，55:85-117.

3 Liang N(梁娜)，Luo YE(罗跃娥)，Sun SP(孙少平)，et al.Research progress of ferulic acid.Heilongjiang J Tradit Chin Med(黑龙江中医药)，2009，3:39-40.

4 Xu XQ(徐晓琴)，Teng L(滕亮)，Dai XY(戴秀勇)，et al.Extraction and purification of water-soluble active ingredient of Ferula sinkiangensis.Chin Tradit Pat Med(中成药)，2010，32:931-936.

5 Li J(李健)，Teng L(滕亮)，Xu JJ(徐建军)，et al.Comparative study on the extraction process of volatile oil from Ferula sinkiangensis.Chin Tradit Pat Med(中成药)，2009，31:636-638.

6 Jiang L(姜林)，Xu XQ(徐小琴)，Chen L(陈良)，et al.Study on dynamic changes of ferulic acid in Ferula Sinkiangensis in different phenological period.Chin J Mod Appl Pharm(中国现代应用药学)，2012，29:705-707.

7 Rui HK(芮和恺)，He QY(何清英)，Yu QM(余秋妹)，et al.Comparison of quality of Ligusticum wallichii in different regions and different parts.Bull Chin Mater Med(中药通报)，1982，7:13.

8 Gan HS(甘华盛).Comparison of quality of Bupleurum chinense root，stem and leaf.Bull Chin Mater Med(中药通报)，1982，7:7.

9 Wang H(王虹)，Zhang FC(张富春).Developmental and anatomical studies on the floral nectaries in Ferula sinkiangensts.Bull Bota Res(植物研究)，2004，24:406-409.