PENTRA MS60血液分析仪检测不典型淋巴细胞结果分析

徐 鹏， 薛冰蓉，吴 延，杨渝伟，薛 莉，叶 平

(1.绵阳市中心医院检验科，四川 绵阳 621000;2.堀场(中国)贸易有限公司医疗事业部，上海 200335)

血常规是最基本的血液学分析项目，及时出具患者血常规诊断报告，缩短门诊患者等候血细胞分析报告时间是本科室亟待解决的问题。近期本科室增设了用血量少、检测时间更短的PENTRA MS60血液分析仪(简称PMS60)。PMS60和SYSMEX XS800i血液分析仪(简称XS800i)同时使用必然会导致结果差异，那么能否实现结果互认并满足临床诊治需求，是目前必须解决的问题。如PMS60仪器的不典型淋巴细胞(atypical lymphocyte，ALY)是在散点图中位于淋巴细胞和单核细胞之间的一群细胞，包括小原始细胞、大淋巴细胞、反应性淋巴样细胞、刺激性淋巴细胞、浆细胞等[1]，而XS800i与ALY相应的警示标志应为原始细胞、异型淋巴细胞、异常淋巴细胞等。为了验证PMS60测定ALY结果的可靠性，我们以显微镜分类镜检为标准，同时用PMS60、XS800i检测相同样本，对其ALY的测定结果进行比对与分析。

材料和方法

一、样本来源

408例样本均来自绵阳市中心医院门诊患者，经PMS60检测出现含ALY报警的样本193例(男92例、女101例，年龄27 d～56岁，儿童158例，成人35例)，无ALY报警的样本215例(男108例、女97例，年龄1个月 ～80岁，儿童162例，成人53例)。

二、方法

1.仪器与试剂 PMS60为法国ABX公司产品，XS800i为日本Sysmex公司产品。2台仪器均使用原装配套试剂和质控品。OLYMPUS CX21显微镜由日本奥林巴斯公司生产。瑞氏染液按照《全国临床检验操作规程》(第3版)要求配制。

2.样本采集 采用BD公司提供的含乙二胺四乙酸二钾的尖底采血管采集末梢血0.5 mL后用混匀器充分混匀，采用BD公司提供的乙二胺四乙酸二钾真空采血管采集静脉血3 mL轻轻颠倒混匀，上机检测，制备符合要求的血涂片并编号染色，均在2 h内完成。

3.检测方法 PMS60和XS800i测定均严格按照血液分析仪操作规程进行操作。每张血涂片由有经验的检验工作人员在显微镜下采用双盲法分类200个白细胞。

三、ALY阳性判断标准

以显微镜检查结果作为“金标准”。将仪器测定结果与镜检结果进行对比，有该项报警信号者，若镜检阳性，则为真阳性，否则为假阳性;如果镜检阴性同时也没有该项报警信号，则为真阴性，如果镜检阳性而没有该项报警信号，则为假阴性。

1.PMS60 以仪器厂商提供标准为依据，即出现ALY提示信息且比例＞2.5%和/或绝对值＞0.25×109/L为仪器报警阳性。

2.XS800i 出现原始细胞、异常淋巴细胞和异型淋巴细胞任何1项或1项以上为仪器报警阳性。

3.血涂片 (1)非淋系异常细胞≥1%;(2)异型淋巴细胞≥2%;(3)异常淋巴细胞(原始或幼稚淋巴细胞)≥1%;(4)浆细胞≥1%。只要满足上述任何一项指标者即为阳性。

四、统计学方法

运用SPSS 17.0统计学软件，对仪器显示的ALY计算Kappa值，判断警示标志与相应细胞检出的一致性。Kappa值≥0.75，两者达到满意的一致性;0.4≤Kappa值＜0.75，两者一致性尚可;Kappa 值 ＜0.4，两者一致性不够理想[2]。

结 果

一、2台血液分析仪出现ALY报警阳性样本比对分析

PMS60与XS800i出现ALY报警一致率为89.7%，Kappa值为0.793，提示信息的一致性满意。见表1。

表1 PMS60与XS800i出现ALY报警的比对分析(例)

二、2台血液分析仪出现 ALY报警与显微镜分类结果比对分析

与显微镜分类相比，PMS60出现ALY报警的Kappa值为0.792，一致性评价为满意，血涂片复检率(复检率=真阳性率+假阳性率)为47.3%、漏检率(假阴性率)为1.5%、总符合率(准确度)为89.7%、约登指数为0.82;XS800i出现ALY报警的Kappa值为0.779，一致性评价为满意，血涂片复检率为43.9%、漏检率(假阴性率)为3.4%、总符合率(准确度)为89.2%、约登指数为0.79。见表2、表3。

表2 2台血液分析仪出现ALY报警与显微镜分类结果比对分析 (例)

表3 2台血液分析仪出现ALY报警的敏感性及特异性分析 (%)

三、PMS60验证试验

随机选择112例样本在该仪器上检测，并与显微镜分类结果对比分析，结果显示20例ALY阳性样本中有5例假阳性，92例阴性样本中有1例假阴性，准确度为94.6%。

讨 论

PMS60采用的双鞘流通道技术是白细胞五分类、幼稚细胞定量测定的核心原理。在LMNE散点图中同时得到嗜酸性粒细胞、中性粒细胞、单核细胞、淋巴细胞、嗜碱性粒细胞、ALY和巨大未成熟细胞的结果。PMS60出现ALY报警信息的原因是样本中可能存在浆细胞、ALY和大淋巴细胞[1]。XS800i采用半导体激光流式细胞结合细胞染色技术，在DIFF和BASO通道中同时得到嗜酸性粒细胞、中性粒细胞、单核细胞、淋巴细胞和嗜碱性粒细胞的结果，同时还得到幼稚粒细胞和OTHER(相当于PMS60的ALY)2个研究性参数结果，在白细胞提示信息栏中可得到原始细胞、核左移、异型淋巴细胞、异常淋巴细胞等提示信息。XS800i中的OTHER参数仅对原始细胞、异型淋巴细胞及异常淋巴细胞等进行大概分析[3]，而对于PMS60测定的ALY结果虽然是定量的，但毕竟是多类细胞的综合体。因此，PMS60的ALY警示标志只能与XS800i的OTHER警示标志做定性比较。本研究显示，2台仪器间出现ALY报警信息一致率高(89.7%)，Kappa 值为0.793，一致性满意，该项可实现检验结果互认。

以显微镜分类为标准，PMS60对ALY报警提示的Kappa值为0.792，显示一致性为满意。显微镜分类阳性的163例样本中，出现异型淋巴细胞141例、原幼淋巴细胞5例、异常细胞6例、幼稚粒细胞8例、浆细胞2例、幼红细胞1例。可见PMS60检测的ALY主要是异型淋巴细胞，而健康人血液中偶见异型淋巴细胞一般不超过2%[4]。另外，PMS60提示ALY的准确度、敏感性及特异性都比较高(依次为 89.7%、96.3%、85.3%)。因此，PMS60对ALY的比例和绝对值设定的阳性阈值分别为2%和0.2×109/L，而且需在ALY比例 ＞2.5%和/或 ALY 绝对值 ＞0.25×109/L时仪器才会出现ALY报警信息，此方案是可行的，此时进行显微镜分类也是必要的。

仪器的设计原理保证了仪器检测结果的敏感性和稳定性[5]，用血液分析仪进行全血细胞分析，总希望有较高的定量检测敏感性以避免漏检，但这势必会带入假阳性。血液分析仪对全血细胞进行分析，不是由细胞核、细胞浆、细胞膜结构的整体差异来鉴别细胞，因此不可避免存在干扰因素而产生一定的误差。虽然血液分析仪可以大大提高工作效率，可信度也较高，但是如果完全依靠仪器检测结果，不加以分析和复查直接发出报告，会向临床发出一定数量的错误报告，造成误诊或导致不合理治疗[6]。因此，根据国际血液学复审协作组制定41条规则和国际血液学复审协作组认为5%是保证患者检测结果安全的最大可接受的假阴性率和仪器识别能力及参数[7]，对PMS60制订合适的复检标准是必要的。本研究显示，当PMS60提示ALY阳性标准制订为ALY比例＞2.5%和/或 ALY 绝对值 ＞0.25×109/L 时，其阳性预测值和阴性预测值都比较高(分别为81.3%、97.2%)，约登指数为 0.82(理想值为1)，准确度为89.7%(理想值为100%)。因此，PMS60的ALY阳性判断标准是可信的。

综上所述，PMS60对ALY具有较高的敏感性及较强的识别能力。在保证仪器正常使用情况下，当有ALY比例＞2.5%和/或ALY绝对值＞0.25×109/L时，必须进行显微镜分类。

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