藏药玛奴西汤颗粒体外抑菌作用的实验研究

刘有菊 红 梅 陈秋红 韩 梅 孙 伟

(1．青海省藏医药研究院药物研究所，青海 西宁 810003;2．青海高原医学科学研究所中心实验室，青海 西宁 810012)

藏药“玛奴西汤”又名四味藏木香汤散，主要成分为藏木香、悬钩木、宽筋藤、干姜。在青海、西藏等地区已有1000多年的用药历史，先后被列入《青海省藏药标准》［1］和《卫生部部颁药品标准》［2］，由于对治疗瘟病初期、流感初期、恶寒头痛、关节酸痛、类风湿关节炎、发烧等疾病疗效显著，其颗粒制剂作为医院院内制剂广泛应用，具有重要的地位和价值。据文献报道［3］，其方中的藏木香植物中提取的类黄酮、五羟基黄酮、4，5，7－三羟基黄酮均具有显著的抗菌作用。为了进一步为临床应用提供依据，本实验对藏药玛奴西汤颗粒的体外抑菌作用进行了研究。

1 材料与方法

1．1 试验样品:藏药“玛奴西汤”颗粒，由青海省藏医药研究院基础研究所传统工艺室提供，生产批号:20111212。

1．2 供试菌种:金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、沙门氏菌由青海金诃藏药股份有限公司质量部馈赠;铜绿假单胞菌(ATCC)冻干粉购自广东微生物菌种保藏中心。

1．3 培养基:MH肉汤培养基、MH琼脂培养基，购自北京三药技术开发公司(中国药品生物制品鉴定所监制)，生产批号均为110420。

1．4 仪器:电热恒温培养箱(上海跃进医疗器械有限公司:型号:HH．B11．500);不锈钢立式压力蒸气灭菌器(江苏江东精密仪器有限公司，型号:LDZX－50FA);精密微量移液器(上海求精生化试剂仪器有限公司，IV型:WKY型200～1000ul)

2 方法与结果

2．1 藏药玛奴西汤颗粒受试物的制备:由于药物浓度的限制，将藏药玛奴西汤颗粒加至培养基中，配成含药培养基灭菌备用(0．4g/mL)，高压灭菌后置于0－4℃冷藏备用。

2．2 培养基制备:MH固体培养基的配制(250g/瓶):称取MH固体水解酪蛋白琼脂培养基36g，加入蒸馏水1000mL，溶解，混匀，调节pH值为7．4±0．2(用20%NaOH调节pH值7．4)后分装，115℃30min高压灭菌后，冷至～60℃，无菌操作倾注于干热灭菌的培养皿中，每皿15～20mL，备用。MH液体培养基的配制(100g/瓶):称取MH液体培养基5g加入蒸馏水200mL，溶解，混匀，调节pH值为7．4±0．2(用20%NaOH 调节 pH 值．4)后分装，115℃30min高压灭菌。

2．2 供试菌种的制备［4］:将金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、沙门氏菌3种菌苗分别接种于经无菌检查合格的10mL液体培养基中，于37℃恒温培养24h;铜绿假单胞菌冻干粉接入试管斜面培养基上，置37℃恒温培养24h后，用无菌液体培养基冲下斜面新鲜菌苔接种于无菌试管，于37℃恒温培养24h。菌液置0－4℃冷藏备用

2．3 二倍稀释法［5］:在无菌环境下将11支灭菌大试管依次编号，按无菌操作每管加入灭菌MH肉汤液体培养基2mL，再吸取玛奴西汤颗粒(0．4g/mL)2mL放入第1管，混匀后从第1管吸取2mL放入第2管，混匀，同样吸取2mL放入第3管……按二倍稀释法，使各管中的药液依次被逐级稀释为1∶2、1∶4、1∶8、……1∶256的比例，药物浓度依次为．4g、0．2、0．1……0．00078g/m L 等各种浓度的液体。第10不加药物作为对照，以便观察培养基是否适合于细菌生长。第11管加受试药液2mL，混匀取出2．0mL弃去，不加细菌，以便观察受试药液是否受污染。将复苏好的菌液用肉汤培养基稀释并与0．5麦氏比浊管［6］对比，使细菌的浓度近似达到(1～1．5×108/mL)。取0．1mL菌悬液分别加入上述1～10号管中，混匀后一起放入37℃恒温培养箱内培养24h观察结果。若肉汤混浊，表示细菌生长，若肉汤完全清亮，表示无细菌生长。鉴于藏药玛奴西汤颗粒药物颜色深或不透明且有沉淀，无法判定有无细菌生长，将上面已稀释好含菌液的不同浓度药物移种到MH琼脂平皿培养基上37℃恒温培养24h后观察有无细菌生长，以完全无菌生长的最低药物浓度，为药物对该菌种的最小抑菌浓度(MIC)。结果见表1:

表1 试管二倍稀释法测定玛奴西汤颗粒对4种菌的MIC值

由表可知，玛奴西汤颗粒对金黄色葡萄球菌有较好的抑菌效果，MIC为0．05g/mL，对大肠埃希菌、沙门氏菌、铜绿假单胞菌抑菌作用其次，MIC为0．2g/mL。

3 讨论

本实验选用金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、沙门氏菌、铜绿假单胞菌4种引起瘟病初期、流感初期常见的致病菌，采用二倍稀释法进行了体外抑菌实验，实验表明:藏药玛奴西汤对上呼吸道感染常见的4种菌株均有不同程度的抑菌作用。其中对金黄色葡萄球菌具有较好的抑菌作用，最小抑菌浓度为0．05g/mL。这为临床治疗由这些细菌引起的呼吸道感染提供实验依据。

［1］中华人民共和国卫生部药典委员会．中华人民共和国卫生部药品标准藏药［S］．1995:309．

［2］青海省卫生厅．青海省藏药标准［S］．1992:139．

［3］杨革．微生物学实验教程，［M］．第1版．北京:科学出版社，2005:48．

［4］陈奇．中药药理研究方法学［M］．第3版，北京:人民卫生出版社，2011:361－362．

［5］任斌，陈瑞杰，等．微生物比浊法测定麦白霉素颗粒效价［J］．医药导报，2008，27(8);997－998．