藏成药风湿塞隆胶囊质量标准研究

贺世娟 王金霞 杜连平 罗明英 陈海莲

(青海阿如拉藏医药研究开发有限公司，青海 西宁 810003)

公元18世纪，著名藏医学家邬坚太曲以自已多年的行医临床和实践经验，根据藏药六味、八性、十七效理论，源自于《四部医典》中的“十味诃子散”和“二十五味冰片散”合制而成，命名为“风湿止痛丸”，专门用于治疗风湿及类风湿等疑难疾病，取得实效，载入个人专著《藏医临床札杞》，有近300年的历史。后来，在“风湿止痛丸”基础上增加高原特有动物药，对治疗风湿性疾病有特殊疗效的国家一类新药材塞隆骨，制成风湿塞隆胶囊。风湿塞隆胶囊由塞隆骨、诃子、红花、沉香、白檀香、紫檀香、白豆蔻、冰片、印度獐牙菜、木香、马兜铃、肉桂、岩精膏等32味药材制成，其中有多味药材为藏药。具有祛风，散寒，除湿之功效。用于类风湿性关节炎引起的四肢关节疼痛，肿胀，屈伸不利，肌肤麻木，腰膝酸软。经过多年临床观察，疗效确切，是治疗风湿及类风湿性关节炎良方之一。

为完善本品质量标准，建立快速、稳定，准确的含量测定方法，满足本品质量标准高要求的需要，在放弃肉桂醛含量测定控制指标的同时，经分析和预试验，选择了风湿塞隆胶囊处方所含草豆蔻的主要成分小豆蔻明作为含量测定指标成分并进行了方法学研究，结果该方法精密度高，重现性良好，加样回收试验符合要求。

1 仪器与试药

Waters2487型高效液相色谱仪;Waters C18色谱柱;Millennium32色谱工作站。小豆蔻明对照品:中国药品生物制品检定所提供(批号:111763－200302)甲醇为色谱纯，其余试剂均为分析纯;水为双蒸水。

2 方法与结果

2．1 色谱条件与系统适用性试验:WatersC18色谱柱(150mm×3．9mm);甲醇－水(65:35)为流动相;检测波长为346nm;柱温为室温;灵敏度0．1AU。结果表明小豆蔻明和样品中其它组分可基线分离，小豆蔻明与其它色谱峰的分离度大于1．5，按小豆蔻明峰计算，理论板数约为2000。

2．2 对照品溶液和供试品溶液的制备

2．2．1 对照品溶液的制备:取小豆蔻明对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含25mg的溶液，即得。

2．2．2 供试品溶液的制备:精密称取装量差异项下的本品内容物4．0g，置具塞锥形瓶中，精密加乙醇50mL，回流提取90min，放冷，滤过，精密量取续滤液15mL，挥干溶剂，残渣加甲醇溶解转移至10mL容量瓶中用甲醇稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0．45μm)滤过，即得。

2．3 方法学考察

2．3．1 提取方法考察:对样品分别进行超声处理、回流提取，结果以回流提取效果最好，可消除对所有待测组分的干扰并且含量(以小豆蔻明计)较高。结果见表1。

表1 方法学考察试验结果(n=2)

2．3．2 测定波长的选择:取对照品溶液和供试品溶液分别在190nm～400nm的波长内测吸光度，结果在346nm处有最大吸收，故选此波长为测定波长。

2．3．3 线性关系的考察:精密称取小豆蔻明对照品6．38mg，置25mL容量瓶中加甲醇稀释至刻度。精密吸取以上储备液1mL，置10mL容量瓶中加甲醇稀释至刻度，制成含小豆蔻明对照品25．5mg·mL－1的溶液。精密吸取．3、6、9、12、15μL此对照品溶液，按上述色谱条件进行测定，试验结果见表2。以峰面积为纵坐标(Y)，进样量为横坐标(X)，绘制坐标曲线。即得。小豆蔻明在:76．5 ～382．5μg，范围内呈良好的线形关系。回归方程为:Y=136829X－17207，r=0．9999(n=5)。

表2 线性关系实验结果(小豆蔻明)

2．3．4 精密度试验:精密吸取小豆蔻明对照品溶液10μL，重复进样6次，测得小豆蔻明峰面积RSD为0．4%。表明仪器进样精密度良好。

结果见表3。

表3 精密度试验结果

2．3．5 稳定性试验:精密吸取样品(批号20060801)溶液10μL，分别于2，6，8，10，12h 进样，测定小豆蔻明的含量，结果RSD为2．0%，即样品溶液在12h内稳定。结果见表4

表4 稳定性试验结果

2．3．6 重现性试验:取同批样品(批号20060801)5份，按【样品测定】项下色谱条件测定，测定含量RSD为2．1%，表明该方法的重现性良好。结果见表5。

2．3．7 回收率试验:取已知含量的样品5份(含量为0．2mg·g－1)，精密加入小豆蔻明对照品溶液(浓度为0．17mg·m L－1)3m L，按样品制备方法和测试条件进行测定，计算得平均回收率为100．2%，RSD为1．8%。实验结果见表6。

表5 重现性试验结果

表6 加样回收实验结果

2．3．8 阴性干扰实验:按照处方比例，取除去草豆蔻的阴性样品，按样品制备方法和测试条件进行测定，结果阴性样品在与对照品色谱峰相应的位置上无吸收峰。说明处方中其它成分对测定结果无影响(见图1)，专属性好。

图1 风湿塞隆胶囊HPLC色谱图

2．4 样品测定:精密称取装量差异项下的本品内容4．0g，置具塞锥形瓶中，精密加乙醇50mL，水浴回流提取90min，放冷，滤过，精密量取续滤液15mL，挥干溶剂，残渣加甲醇溶解转移至10mL容量瓶中用甲醇稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0．45μm)滤过，即得。

吸取10μL进样，测定，结果5批样品中小豆蔻明平均含量为．6μg/粒，RSD=1．2%。结果见表。

表7 样品中小豆蔻明的含量

3 结论

3．1 在提取风湿塞隆胶囊中小豆蔻明时，分别进行超声处理、回流提取，结果表明，以回流提取效果最好，可消除对所有待测组分的干扰并且含量(以小豆蔻明计)较高;

3．2 在测定草豆蔻中小豆蔻明的含量时，选择HPLC法，结果表明，该方法精密度高，重现性良好，加样回收试验回收率较好。

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