液相色谱-串联质谱法检测火锅底料中罂粟壳

刘敏敏，张朝正，李延志，温家欣

（广东省药品检验所，广东广州 510180）

火锅是我国老百姓比较喜爱的一种饮食，然而，近年来少数食品生产经营者为了招揽顾客，牟取暴利，在火锅及其调味料中添加罂粟壳及其水浸物等违禁原料，使食物味道鲜美。罂粟壳是罂粟科植物采完阿片后的干燥成熟果壳，内含吗啡（morphine）、可待因（codeine）、罂粟碱（papverine）等多种生物碱[1]。因此添加了罂粟壳的食物易使消费者成瘾，长期食用者会对其产生依赖性。

目前，锅底料中非法添加罂粟壳的检测尚无标准检测方法。文献报道的方法主要有分光光度法、层析法、示波极谱法、高效液相色谱法、毛细管电泳和液-质联用法等[2-3]。本实验采用液相色谱-串联质谱技术，建设了火锅底料中非法添加的罂粟壳中吗啡、可待因、罂粟碱、蒂巴因、那可丁等5种生物碱成分LC-MS/MS检测方法，方法灵敏、准确，、快速，适用于火锅调味料食品中罂粟壳的检测。

1 材料与试药

1.1 仪器

液质联用色谱仪：美国热电公司，型号为Quantum Access MAX/600 PUMP；离心机：德国Eppendorf公司，型号为X1R；超纯水发生器：美国Millipore公司，型号为QA；电子分析天平：德国SARTORIUS公司，型号为CP225D。

1.2 试剂与试药

磷酸可待因（批号：171203-201005，含量：99.6%）、吗啡（批号：171201-200822，含量：99.8%）、盐酸罂粟碱（批号：171214-200404）；蒂巴因（批号：171216-200403）；那可丁（批号：171224-200403）：中国药品生物制品检定所提供；乙腈为色谱纯，其他试剂为分析纯。

1.3 样品

火锅底料均为2011年广东省餐饮食品监督抽检样品。

2 方法

2.1 分析条件

2.1.1 色谱条件

色谱柱为SHISEIDOCAPCELLPAKCR1：4（5μm，2.0×150 mm），50 mmol/L 乙酸铵：乙腈（50∶50），0.5%甲酸为流动相A相，乙腈为流动相B相，流速0.3mL/min；按表1进行梯度洗脱。

表1 分离生物碱的最佳梯度洗脱表Table 1 Optimal elution condition for determination of alkaloids residues

2.1.2 质谱条件

以三重四极杆质谱仪作为检测器，电化学喷雾离子源，采集模式为正离子模式，质谱条件如下：喷雾电压：5 500.0 V；鞘气压力：525 kPa；辅助气：6 L/min；反吹气：0.6 L/min。各化合物质谱参数见表2，总离子流见图1。

表2 质谱参数表Table 2 Parameter of Mass spectra of alkaloids residues

2.2 标准品溶液的制备

2.2.1 空白基质溶液

分别称取与待测样品基质相同的、不含所测成分试样，按供试品溶液制备方法依法操作，制备空白基质溶液。

图1 5种生物碱标准品的提取离子流谱图Fig.1 Extraction spectrum of five alkaloids residues

2.2.2 标准储备溶液

分别精密称取吗啡、可待因、罂粟碱、蒂巴因和那可丁标准品适量，用0.5%甲酸的甲醇溶液配制成1 mg/mL的溶液，作为标准储备液。

2.3 样品的前处理

称取2 g试样，于50 mL聚四氟乙烯具塞离心管中，加入5 mL水，涡旋1 min，再加入15 mL乙腈，涡旋1min。超声提取20 min后，加入1.5 g无水醋酸钠，再加入6 g无水硫酸镁，涡旋1 min，以4 000 r/min的转速离心1 min，取出后待净化。称取50 mgPSA，150 mg无水硫酸镁置于2 mL聚四氟乙烯具塞离心管中，用1 mL微量移液器将上述上清液1 mL移入此离心管中，涡旋混合器涡旋1min，以5000r/min的转速离心1 min，移取上清液0.5mL于2mL离心管中，加入20 mmol/L乙酸铵溶液0.5mL，混匀，过0.45 μm微孔滤膜待测。

3 结果

3.1 线性范围

分别准确吸取上述标准储备液1.00 mL于100 mL容量瓶中，用稀释溶剂（取空白基质溶液：20 mmol/L乙酸铵=50：50比例配制成稀释溶剂）定容至刻度。再准确吸取该溶液1.00 mL于200 mL容量瓶中，用稀释溶剂定容至刻度，制成标准使用液。分别准确吸取上述溶液 1.00、1.00、1.00、1.00、2.00、4.00 mL 于 50、20、10、5、5、5 mL容量瓶中，用稀释溶剂稀释至刻度，制成浓度分别为 1，2.5，5，10，20，40 ng/mL 溶液，作标准曲线，结果见表3。结果表明，5种物质在1 ng/mL～40 ng/mL范围内线性良好，相关系数均达0.999。

表3 5种生物碱标准曲线Table 3 the linear of alkaloids residues

3.2 检测限

以基线3倍噪声值计算方法检测限，测得可待因、罂粟碱、那可丁、蒂巴因的检出限为0.1 ng/mL，吗啡的检测限为2.5 ng/mL，按测定方法计算，本方法可待因、罂粟碱、那可丁、蒂巴因的检测限为1 μg/kg；吗啡的检测限为 37 μg/kg。

3.3 精密度试验

取浓度为5ng/mL的基质标准溶液，连续进样6次，记录峰面积，结果表明，吗啡、可待因、罂粟碱、那可丁、蒂巴因6次进样峰面积的RSD值在0.8%～2.3%范围内，精密度良好。

3.4 加样回收率试验

取样品2 g，分别加入不同浓度水平的标准品适量，照样品处理项下方法依法操作，计算回收率及相应RSD值，结果见表4。结果表明，本方法回收率试验结果良好。

3.5 方法应用

应用本方法对2011年广东省餐饮食品监督抽检抽得的200批的火锅底料进行检测，共有5批样品检出多种罂粟壳类生物碱成分，添加了罂粟壳的火锅底料占2.5%，结果见表5。

表4 回收率实验（n=6）Table 4 Recovery of alkaloids residues（n=6）

表5 部分样品检出结果Table 5 Result of some samples μg/kg

4 讨论

1）火锅底料中罂粟壳的检测，现在尚无标准，有文献报道，可以参考农残检测的QuECHERS法进行提取[4]。实际应用过程中发现该方法回收率低，吗啡的回收率仅为32.5%。生物碱在火锅底料中以盐的形式存在，本方法用水将火锅底料中罂粟壳中的生物碱提取出来，再用乙腈萃取，加无水醋酸钠促进生物碱由水相转移至有机相，最后用无水硫酸镁出去水相。实验表明，本方法大大提高了生物碱尤其是吗啡的回收率，满足了实验所需。

2）吗啡等生物碱为强极性化合物，有文献报道，用C18柱进行色谱分离[5]。笔者在实验中发现，吗啡等生物碱在C18柱上基本不保留，无法进行色谱分离。笔者也曾尝试采用文献报道的ACQUITY UPLC BEH HILIC色谱柱[4]，这款正相柱具有重现性差，保留时间飘移严重，难以预平衡等特点，难以在基层实验室推广应用。本方法选择了强阳离子交换与反相C18混合填料，混合比例（1：4）的色谱柱，该柱子克服了原方法的缺点，重现性好，保留时间稳定，容易平衡等特点，能有效分离吗啡等强极性的化合物。

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[1]廖文娟,张虹,任一平.液相色谱－串联四级杆质谱法测定罂粟壳主要成分在止咳药中的含量[J].分析化学,2006,34(8):1175－1178

[2]汪芳芳,呙亮,曾爱明,等.食品中罂粟壳残留检测的研究现状[J].现代商贸工业,2009(3):279－280

[3]张靖.食品中罂粟碱、吗啡、可待因含量的液相色谱法研究[J].中国卫生检验杂志,2007,17(1):72－73

[4]王柯,郑荣,简龙海,等.火锅调料中5种生物碱成分的液相色谱－串联质谱测定法[J].中国卫生检验杂志,2011,21(2):363－365

[5]刘艳琴,王浩,杨红梅,等.液相色谱－质谱联用技术测定食品中罂粟碱残留[J].食品研究与开发,2010.31(7):130－132