抗炎止痛口服液的薄层色谱鉴别研究

申 睿，郭 琪

抗炎止痛口服液是由羌活、独活、防风、细辛、豨莶草、制川乌等12 味中药材组成的中药复方制剂，具有祛风散寒、除湿壮骨、活血止痛之功效，临床适用于风湿性关节炎、类风湿性关节炎、强直性脊柱炎、老年性关节炎等疾病的治疗［1-2］。本文参考中国药典2010年版一部［3］对羌活、独活、肿节风、制川乌等主要药材的薄层色谱鉴别方法，建立了抗炎止痛口服液质量控制的薄层色谱鉴别法。

1 仪器与试药

ZF 型紫外投射反射分析仪;KQ-300VDB 型超声波清洗器;硅胶GF254板(青岛海洋化工厂);羌活、独活、肿节风对照药材及异嗪皮啶对照品(由中国生物制品检定所提供，批号:120935-201007，120940-201010，121048-200504，110837-200304);制川乌对照药材(由中国生物制品检定所标本馆提供);抗炎止痛口服液(由解放军252 医院提供，批号:20100111、20100112、20100113)。所有试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 羌活的薄层色谱鉴别 取供试品20 ml，加甲醇20 ml，超声处理20 min，滤过，滤液蒸干，加甲醇1 ml 溶解作为供试品溶液。另取羌活对照药材1 g，同法制成对照药材溶液。按处方量同法制备缺羌活的阴性对照溶液。吸取上述3 种溶液各10 μl，分别点于同一用4%醋酸钠溶液制备的硅胶G 薄层板上，以三氯甲烷－ 甲醇(8∶ 2)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365 nm)下检视［3-4］。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的蓝色荧光斑点(图1)。

2.2 独活的薄层色谱鉴别 取供试品20 ml，用石油醚(30～60℃)萃取2 次，每次20 ml，滤过，滤液挥干，加氯仿1 ml 溶解作为供试品溶液。另取独活对照药材1 g，加乙醚10 ml，超声处理20 min，滤过，滤液挥干，残渣加氯仿1 ml 溶解作为对照药材溶液。按处方量同法制备缺独活的阴性对照溶液。吸取上述3 种溶液各10 μl，分别点于GF254硅胶薄层板上，以石油醚(30～60℃)－乙酸乙酯(8∶ 2)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(254 nm)下检视［3］。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点(图2)。

2.3 肿节风的薄层色谱鉴别 取供试品20 ml，用乙酸乙酯萃取2 次，每次20 ml，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1 ml 溶解作为供试品溶液。另取肿节风对照药材1 g，加水30 ml，超声处理30 min，用乙酸乙酯萃取2 次，每次20 ml，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1 ml 溶解作为对照药材溶液。再取异嗪皮啶对照品，加甲醇制成每1 ml 含1 mg 的溶液，作为对照品溶液。按处方量同法制备缺肿节风的阴性对照溶液。吸取上述4 种溶液各10 μl，分别点于硅胶G薄层板上，以石油醚(30～60℃)－乙醚－甲酸(2∶10∶ 0.2)为展开剂，展开，取出，晾干，置氨蒸气中熏10 min 后，与对照品色谱相应的斑点变为黄绿色，置紫外光灯(365 nm)下检视［3］。供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点(图3)。放置12 h 后，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显黄棕色的斑点。

2.4 制川乌的薄层色谱鉴别 取供试品20 ml，用稀盐酸调节pH 至2～3，用乙醚萃取3 次，每次30 ml，弃去乙醚液。酸水层用氨试液碱化至pH 10～11，用乙醚萃取3 次，分别为30 ml，合并乙醚液，挥干，加二氯甲烷1 ml 溶解，制成供试品溶液。另取制川乌对照药材1.5 g，加水50 ml，煎煮30 min，放冷，同法制成对照药材溶液。按处方量同法制备缺制川乌的阴性对照溶液。吸取上述3 种溶液各20 μl，分别点于硅胶G 薄层板上，以正己烷－乙酸乙酯－甲醇(6.4∶ 3.6∶ 1)为展开剂，在氨蒸气饱和20 min 的展缸内展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾溶液［3］。在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的红棕色斑点(图4)。

图1 羌活的薄层色谱图

图2 独活的薄层色谱图

图3 肿节风的薄层色谱图

图4 制川乌的薄层色谱图

3 讨论

3.1 独活薄层色谱条件的优化 独活薄层条件常采用硅胶G 薄层板，在365 nm 波长下检测［5-7］，但是在该薄层条件下阴性样品干扰较大。本文将硅胶G 薄层板改为硅胶GF254薄层板，采用石油醚－乙酸乙酯展开系统，并对石油醚－乙酸乙酯展开系统的比例(7.5∶ 2.5、8∶ 2、8.5∶ 1.5)进行了优化，结果表明应用石油醚(30～60℃)－乙酸乙酯(8∶ 2)展开时分离效果最佳，色谱斑点清晰，且阴性样品无干扰。

3.2 肿节风薄层色谱条件的优化 甲苯－乙酸乙酯－甲酸(9∶ 4∶ 1)展开系统常用于肿节风的薄层鉴别［3，8］，参考文献［9］的方法比较了甲苯－乙酸乙酯－甲酸(9∶ 4∶ 1)和石油醚(30～60℃)－乙醚－甲酸(2∶ 10∶ 0.2)展开系统，结果发现采用石油醚(30～60℃)－乙醚－甲酸(2∶ 10∶ 0.2)展开系统色谱斑点清晰，分离效果更好。

3.3 制川乌提取方法及薄层色谱条件的优化 参考文献［10-14］优化了制川乌的提取方法:先用酸液浸泡，将其中生物碱成盐，用乙醚萃取，使得生物碱与其他成分分离，然后调节水溶液至碱性，再用乙醚萃取，使乌头碱类物质留在有机相中，可有效减少混杂成分的干扰，使样品各成分之间更好地分离。在采用该提取方法的前提下，本文还比较了多种展开系统，结果表明采用优化的提取方法以正己烷－乙酸乙酯－甲醇(6.4∶ 3.6∶ 1)为展开剂，在氨蒸气饱和20 min 的展缸内展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾溶液显色，色谱斑点清晰，分离度好，且阴性样品无任何干扰。

本处方中药味多，相互间干扰大，本文在优化了薄层色谱条件后，对抗炎止痛口服液中的羌活、独活、肿节风、制川乌成分进行了薄层色谱鉴别研究，在与对照药材或对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点，而所有阴性样品对鉴别均无干扰。试验结果表明，用薄层色谱法鉴别抗炎止痛口服液中的羌活、独活、肿节风、制川乌，方法可靠，斑点清晰，专属性强、重现性好，可作为抗炎止痛口服液质量控制的鉴别方法。处方中含有毒性中药材——制川乌，其毒性主要来源于双酯型生物碱(乌头碱)，为了更严格有效地控制抗炎止痛口服液的质量，确保用药的安全性，其中乌头碱等有毒成分的限量检查及含量测定有待于进一步研究。

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