月矾中空栓中多指标成分的测定与质量控制

王 美， 张振秋*， 袁 汀， 李 妍， 梁 朔， 侯学智

(1.辽宁中医药大学药学院，辽宁大连 116600;2.中国医科大学附属盛京医院，辽宁沈阳 110004)

月矾中空栓由儿茶、苦参、青黛、血竭、蛇床子等十味中药组成，具有清热解毒、活血止痛、化腐生肌、收敛止血之功效。月矾中空栓剂，其外层为基质和药物制成的壳，空心内填充药材提取液，药物与基质相对分开，可弥补普通栓剂基质与药物混合造成的释药困难等不足;填充液态药物制成的中空栓剂，药物分散程度好，具有更高的生物利用度;药液被栓剂外壳包裹，可避免其与空气接触造成的氧化、风化、潮解等，提高制剂的稳定性。本实验运用综合评分法对月矾中空栓进行质量评价，为其质量控制提供参考依据［1-3］。

1 仪器与试药

1.1 仪器 Agilent1100高效液相色谱仪，G1314A紫外检测器;AS3120A超声提取器;2140型电子分析天平;METTLERAB135—S十万分之一电子天平 (瑞士);ZF—C型三用紫外分析仪、日立U—3010紫外可见双光束扫描分光光度计。

1.2 试药 儿茶素 (批号110877—201102)、表儿茶素 (批号878—200102)、氧化苦参碱 (批号110780—200405)、 苦 参 碱 (批 号 110805—200507)、靛蓝 (批号716—9002)、靛玉红 (批号 110717—200204)、血 竭 高氯酸盐 (批 号110811—200704)对照品均由中国食品药品检定院提供。药材饮片均经辽宁中医药大学李峰教授鉴定。甲醇、乙腈均为色谱纯，其他溶剂均为分析纯，娃哈哈纯净水。

月矾中空栓为实验室自制，取月石、儿茶、乳香、没药、苦参、蛇床子六味药材，加10倍量水，煎煮3次，每次2 h，滤过，合并滤液，浓缩至相对密度为1.36(55℃)的稠膏，称定质量。按六分之五比例取稠膏，在70℃减压干燥，粉碎，与冰片、血竭、青黛、枯矾粉末混合，过六号筛。剩余的稠膏作为液态提取液。将半合成脂肪酸甘油酯加热熔化，加入药品粉末，迅速搅拌均匀，注入经润滑剂处理的子弹头型模具中，待适当凝固后，迅速翻转栓模，使模孔中央未凝的含药基质流出，形成内壁光滑的空腔，中空部位注入液态提取液0.4 mL，尾穴部用同样含药基质封口即得，刮平模口，启模，包装备用。规格:每粒质量1.3 g。

2 方法与结果

2.1 对照品溶液的制备

2.1.1 儿茶素、表儿茶素混合对照品溶液的制备取对照品儿茶素、表儿茶素适量，精密称定，加甲醇分别制成每1 mL含儿茶素0.579 mg，表儿茶素0.452 mg的溶液，作为贮备液。精密吸取儿茶素1 mL，表儿茶素1.25 mL置10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。

2.1.2 氧化苦参碱、苦参碱混合对照品溶液的制备 取对照品氧化苦参碱、苦参碱适量，精密称定，加甲醇分别制成每1 mL含氧化苦参碱0.845 mg，苦参碱0.450 mg的溶液，作为贮备液。精密吸取氧化苦参碱，苦参碱对照品贮备液各1 mL，3 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。

2.1.3 靛蓝、靛玉红混合对照品溶液的制备 精密称取经五氧化二磷干燥至恒质量的对照品靛蓝和靛玉红适量，加甲醇-三氯甲烷 (8∶2)制成每1 mL含靛蓝0.781 mg和靛玉红0.259 mg的贮备液。精密吸取靛蓝，靛玉红对照品贮备液各1 mL，置同一10 mL量瓶中，加三氯甲烷稀释至刻度，摇匀，即得。

2.1.4 血竭高氯酸盐对照品溶液的制备 取对照品血竭高氯酸盐适量，精密称定，置50 mL棕色量瓶中，加3%磷酸甲醇溶液使溶解，并稀释至刻度，摇匀。精密量取1 mL，置5 mL棕色量瓶中，加甲醇制成每1 mL含血竭高氯酸盐0.038 4 mg的贮备液，摇匀，即得。

2.2 供试品溶液的制备

2.2.1 儿茶供试品溶液的制备 取月矾中空栓1粒，精密称定，置具塞锥形瓶中，加甲醇-水 (1∶1)50 mL，称定质量，超声 (300 W，25 kHz)提取30 min，放冷，再次称定质量，用甲醇-水 (1∶1)溶液补质量［4］。

2.2.2 苦参供试品溶液制备 取月矾中空栓1粒，精密称定，置具塞锥形瓶中，加浓氨试液0.5 mL，加入甲醇30 mL，密塞，称定质量，超声 (300 W，25 kHz)提取30 min，放冷，再次称定质量，用甲醇溶液补质量［5］。

2.2.3 青黛供试品溶液制备 取月矾中空栓1粒，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入甲醇-三氯甲烷(8∶2)50 mL，称定质量，超声 (300 W，25 kHz)提取30 min，放冷，再次称质量，用甲醇-三氯甲烷 (8∶2)溶液补质量［6］。

2.2.4 血竭供试品溶液制备 取月矾中空栓1粒，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇30 mL，称定质量，超声 (300 W，25 kHz)提取30 min，放冷，再次称质量，用甲醇溶液补质量。

以上4种溶液补质量后，在冰箱内常温层内放置15 min，滤过除去基质，取续滤液，即得供试品溶液。

2.3 阴性溶液的制备 按处方组成及制法，分别制备缺儿茶、苦参、青黛、血竭药材的月矾中空栓阴性样品，按2.2项下方法制备阴性溶液。

2.4 色谱条件

2.4.1 月矾中空栓中儿茶素和表儿茶素的测定采用Phenomenex ODS—C18色谱柱 (4.6 mm×250 mm，5 μm)，流动相为 0.1% 磷酸溶液-甲醇(70∶30)，体积流量1.0 mL/min，检测波长285 nm，柱温30℃，进样量10 μL［7-8］。在上述色谱条件下，按儿茶素和表儿茶素的色谱峰计算，理论塔板数均大于3 000。见图1。

图1 对照品 (A)、样品 (B)、缺儿茶阴性样品 (C)HPLC色谱图Fig.1 HPLC chromatograms of reference substances(A)，sample(B)，negative sample without Catechu(C)

2.4.2 月矾中空栓中氧化苦参碱和苦参碱的测定采用Phenomenex ODS—C18(4.6 mm ×250 mm，5 μm)色谱柱，流动相为0.1%磷酸溶液-乙腈(80∶20)，体积流量1.0 mL/min，检测波长220 nm，柱温为室温，进样量10 μL［9］。在上述色谱条件下，按氧化苦参碱和苦参碱的色谱峰计算，理论塔板数均大于2 000。见图2。

2.4.3 月矾中空栓中靛蓝和靛玉红的测定 采用Phenomsil ODS—C18色谱柱 (4.6 mm×250 mm，5 μm)，甲醇-水 (70∶30)，体积流量1.0 mL/min，检测波长 285 nm，柱温 30 ℃，进样量 10 μL［10］。在上述色谱条件下，按靛蓝和靛玉红的色谱峰计算，理论塔板数均大于3 000。见图3。

2.4.4 月矾中空栓中血竭高氯酸盐的测定 采用Phenomenex ODS—C18色谱柱 (4.6 mm×250 mm，5 μm)，流动相为乙腈－0.05 mol/L磷酸二氢钠(55∶45)，柱温:40℃，体积流量1 mL/min，进样量10 μL，检测波长440 nm。在上述色谱条件下，按血竭高氯酸盐的色谱峰计算，理论塔板数均大于4 000。见图4。

图2 对照品 (A)、样品 (B)、缺苦参阴性样品 (C)HPLC色谱图Fig.2 HPLC chromatograms of reference substances(A)，sample(B)，negative sample without Sophorae flavescentis Radix(C)

图3 对照品 (A)、样品 (B)、缺青黛阴性样品 (C)HPLC色谱图Fig.3 HPLC chromatograms of reference substances(A)，sample(B)，negative sample without Indigo Naturalis(C)

图4 对照品 (A)、样品 (B)、缺血竭阴性样品 (C)HPLC色谱图Fig.4 HPLC chromatograms of reference substances(A)，sample(B)，negative sample without Dracenis Sangus(C)

3 方法学考察

3.1 线性范围考察 分别精密吸取各对照品溶液2、5、10、15、20 μL，在上述色谱条件下分别进样进行测定。以进样量 (X，μg)为横坐标，峰面积 (Y)为纵坐标，绘制标准曲线，儿茶素、表儿茶素、氧化苦参碱、苦参碱、靛蓝、靛玉红、血竭高氯酸盐的回归方程。结果见表1。

3.2 精密度试验 精密吸取11916批样品的供试品溶液10 μL，分别在相应色谱条件下连续进样5次，测得儿茶素、表儿茶素、氧化苦参碱、苦参碱、靛蓝、靛玉红、血竭高氯酸盐的峰面积的RSD 分 别 为 1.5%、2.0%、1.6%、1.2%、1.8%、1.7%、1.9%。结果表明精密度良好。

表1 月矾中空栓中7种成分的线性方程和线性范围Tab.1 Linear equations and linear ranges of seven components in Yuefan Hollow Type Suppository

3.3 稳定性试验 取11916批样品的供试品溶液，分别在相应色谱条件下0、2、4、8、12 h进样10 μL，测得儿茶素、表儿茶素、氧化苦参碱、苦参碱、靛蓝、靛玉红、血竭高氯酸盐峰面积的RSD分别为 1.6%、2.0%、1.2%、1.9%、1.0%、1.9%、1.9%。结果表明供试品溶液中上述7个成分在12 h内稳定性良好。

3.4 重复性试验 取11916批样品5粒，精密称定，按2.2项下方法平行制备成供试品溶液，分别在相应色谱条件下进样10 μL进行测定。计算儿茶素，表儿茶素，氧化苦参碱，苦参碱，靛蓝，靛玉红，血竭高氯酸盐，其RSD分别为0.8%、2.0%、1.8%、1.1%、1.7%、1.4%、1.8%说明方法重复性良好。

3.5 加样回收率试验 取已知量 (儿茶素2.157 mg/g、表儿茶素2.138 mg/g、氧化苦参碱1.948 mg/g、苦参碱2.843 mg/g、靛蓝2.792 mg/g、靛玉红0.971 9 mg/g、血竭高氯酸盐0.827 8 mg/g)11916批栓剂，5份，每份1粒，精密称定。分别准确加入儿茶素、表儿茶素、氧化苦参碱、苦参碱、靛蓝、靛玉红、血竭高氯酸盐对照品贮备液4.5、6.0、2.5、8、5、4、25 mL按2.2项下方法分别制备供试溶液，在相应色谱条件下进行测定，计算回收率。结果上述7个化合物的平均回收率 (n=5)分 别 为 100.9%、99.9%、100.5%、100.8%、100.9%、99.8%、98.2%。结果见表2。

3.6 样品测定 取月矾中空栓样品，精密称定，分别按2.2项下方法制备供试品溶液，在各自色谱条件下分别进样10 μL，记录儿茶素、表儿茶素、氧化苦参碱、苦参碱、靛蓝、靛玉红峰面积，由线性方程计算各自质量分数，并进行综合评分(Comprehensive Score)。先将各指标进行规格化，Y=(X－Xmin/Xmax－Xmin) ×10(X为某物质的质量分数，Y为计算分值)，7种物质权重系数均定为0.2，最终综合评分结果公式为W=∑Y×0.2(W为综合评分值)［11］。结果见表3。

表2 月矾中空栓中7种成分的回收率实验结果 (n=5)Tab.2 Results of recovery of seven components in Yuefan Hollow Type Suppository(n=5)

表3 月矾中空栓样品测定结果 (n=3)和综合评分表Tab.3 Determination results of samples and comprehensive scores in Yuefan Hollow Type Suppository

4 讨论

4.1 本实验所制月矾中空栓系利用普通栓模采用一定工艺制备而成，不适于大量生产。但适宜实验室和医院制剂室规模，也适于医疗条件差的小卫生单位推广应用。月矾中空栓作为一种具有先进剂型的纯中药栓剂用于治疗妇科常见病宫颈糜烂，可充分弥补目前西医治疗该病疗效不够持久、毒副作用大，易产生并发症等缺点，同时较普通中药栓剂具有更高的稳定性与生物利用度，将来投放临床可填补目前空白，创造可观的经济效益和社会效益［12］。

4.2 中药的药效是多种物质共同作用的结果，以单一物质的含量来评价其质量的优劣不能够反映药物发挥作用的整体性。本实验同时测10批月矾中空栓中7种物质的质量分数，故同时选择处方中所含主要成分作为评价指标。为使各因素水平的贡献具有均等的机会，采用综合评分法对结果进行量化，从而可以方便地将不同性质的指标转变成类型相同的数值，再将这些数值加权计算，得到综合评分，使数据计算和结果分析更加简便客观［13］。

［1］国家药典委员会.中华人民共和国药典，2010年版一部［S］.北京:中国医药科技出版社，2010.

［2］袁 汀，张振秋，王海波，等.月矾中空栓的质量标准研究［J］.山西医药杂志，2008，37(9):848-849.

［3］袁 汀，张振秋，王海波，等.月矾中空栓的提取工艺研究［J］.实用药物与临床，2009，12(2):101-103.

［4］赵新峰，毛 莹，高 明.HPLC法测定复方儿茶止泻膜剂中儿茶素、表儿茶素和没食子酸［J］.中草药，2010，41(12):1995-1997.

［5］黄 松，陈吉航，陶 艳，等.RP-HPLC法测定妇科栓剂中氧化苦参碱、苦参碱和小檗碱含量［J］.药物分析杂志，2010，30(1):110-113.

［6］马 莉，孙 琴，李 友，等.HPLC法测定板蓝根药材及制剂中靛蓝和靛玉红含量［J］.药物分析杂志，2010，30(9):1642-164.

［7］曲银锋，李松武，刘乃强，等.HPLC测定小儿泻速停颗粒中儿茶素和表儿茶素的含量［J］.食品与药品杂志，2009，11(5):39-41.

［6］雷玉萍，殷 帅.RP-法同时测定溃疡灵片中儿茶素和表儿茶素的含量［J］.中医药导报，2008，14(6):108-109.

［9］刘为萍，阮 征，白 梅.HPLC法测定复方神安颗粒中苦参碱含量［J］.中国中药杂志，2010，35(14):1818-1819.

［10］闫 玮，张 楠，刘建利.HPLC测定口腔溃疡散中色胺酮、靛蓝、靛玉红的含量［J］.中成药，2009，31(5):743-745.

［11］张慧娴，杜守颖，陆 洋，等.HPLC同时测定丹参水溶性及脂溶性5种成分的含量［J］.中国实验方剂学杂志，2010，16(15):34-38.

［12］李 明.妇炎净中空栓的制备及质量控制［J］.山东中医杂志，2006，25(8):558-559.

［13］何 迅，李勇军，王爱民，等.多指标综合评分法优选紫金透骨喷雾剂渗漉提取工艺［J］.中成药，2010，32(6):1061-1065.