AEG-1的表达与肾细胞癌临床病理因素相关性研究

林 浩 吴碧莲 郑清水

1.福建卫生职业技术学院，福建福州 350101；2.福建医科大学附属第一医院，福建福州 350005

肾细胞癌（renal cell carcinoma，RCC）为一种成人泌尿系统最常见的恶性肿瘤，近年来发病率和死亡率呈上升趋势，具有不同的病理类型，起源于肾脏的肾小管或集合管的上皮细胞。其发病原因还不十分明确，且早期症状不明显。目前肾细胞癌的治疗仍以手术为主，但最近的基因学研究发现，肾细胞癌的发病可能与患者体内某些基因有关。寻找与肾细胞癌发病相关的肿瘤相关因子，发展相关分子机制，可有利于了解肾细胞癌的病因和发病机制，提高肾细胞癌的治疗效果，提供有效的防治方法。星形细胞上调基因-1（astrocyte elevated gene-1，AEG-1）是近年来发现的一种新基因，具有类似癌基因的作用。研究发现，它在一系列肿瘤细胞和肿瘤组织中的表达和肿瘤进展存在相关性。本研究收集83例RCC患者的临床资料，检测并比较其肾癌组织与正常肾组织中AEG-1的表达情况，旨在探讨它与RCC临床病理特征的关系，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集2000～2009年来我院进行治疗的RCC患者83例的临床资料，作为肾细胞癌组，术前未接受放化疗及生物治疗，均行根治性切除术。另选取20例正常肾组织作为对照组。83例RCC中男51例，女32例，年龄23～72岁，平均（56.8±3.7）岁。对照组中，男12例，女8例。年龄28～69岁，平均（51.7±4.5）岁。两组年龄、性别等一般资料比较，差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。

83例RCC患者按照Robson’s分期可分为：Ⅰ期23例，Ⅱ期27例，Ⅲ期15例，Ⅳ期18例。根据2004年WHO制定的最新有关肾实质上皮性肿瘤分类标准分为：肾透明细胞癌58例，嫌色细胞癌6例，乳头状癌8例，未分类型11例。

1.2 检测方法

1.2.1 标本制备 83例RCC标本和20例对照标本均用10%甲醛固定，再进行常规石蜡包埋。之后进行连续切片，长度为4μm。

1.2.2 染色 将标本制备完毕后，行苏木精-伊红染色（HE染色）和免疫组化染色法（SP法），染色完毕后，在光镜下观察标本。其中用0.01mol/L PBS（pH=7.4）代替一抗作阴性对照。实验材料：兔抗人AEG-1多克隆抗体购自英国Abcam公司，DAB显色剂、SP试剂盒由福州迈新生物技术公司提供，操作方法严格按说明书进行。

1.2.3 切片观察 每张切片随机选取5个（×400）在高倍视野下进行观察，每视野计数100个细胞。要求采用双盲法由两位检验者对切片进行观察记录。

1.3 评定标准

按着染细胞所占的百分数计分：＜5%为0分，5%～25%为1分，26%～50%为2分，51%～75%为3分，＞76%为4分；按着色强度计分：无着色为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，褐黄色为3分。将两者相乘所得的总分作为AEG-1表达的判定标准：9～12分为强阳性（+++），5～8分为阳性（++），2～4分为弱阳性（+），0～1分为阴性（－）。

1.4 统计学处理

应用SPSS11.5统计软件进行分析，计数资料采用x2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 免疫组织化学染色

AEG-1阳性反应物分布于细胞核周围的胞质，呈淡黄至褐黄色细小颗粒。AEG-1在正常肾组织中主要表达于肾小管上皮细胞胞浆内，肾细小动脉平滑肌层也有高表达，但肾小球内各种固有细胞均不表达（图1）；AEG-1在RCC中的表达主要为癌细胞细胞核周围的胞质，呈淡黄至褐黄色细小颗粒（图 2）。

图1 正常对照组AEG-1表达（×200）

图2 肾透明细胞癌AEG-1表达（×200）

2.2 AEG-1在不同肾组织中的表达

AEG-1在肾细胞癌组织中的表达率为72.29%，显著高于在正常肾组织中的表达率（20.00%），两者比较差异有统计学意义（P＜0.01）。见表1。

2.3 AEG-1的表达与RCC的临床病理参数的关系

AEG-1的表达与RCC患者的年龄、性别差异无统计学意义（P＞0.05）。与肾细胞癌肿瘤大小、组织学分级、淋巴结转移、病理分型及临床分期有关。AEG-1在肿瘤分期为Ⅲ期和Ⅳ期的组织中的阳性表达率高于在Ⅰ期和Ⅱ期中的表达，差异有统计学意义（P＜0.01）。RCC肿瘤直径≥7cm的其AEG-1的表达显著高于直径小于7cm的（P＜0.05）；组织学分级为低分化或未分化的AEG-1阳性表达率要高于高分化的阳性表达率，两者比较差异有统计学意义（P＜0.01）；肾透明细胞癌的AEG-1阳性表达率显著低于非肾透明细胞癌的阳性表达率（P＜0.05）；AEG-1在无淋巴结转移的组织中的阳性表达率低于有淋巴结转移的组织，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表2。

表1 正常肾组织和RCC组织中AEG-1表达情况

表2 AEG-1的表达与RCC的临床病理参数的关系

3 讨论

肾细胞癌是肾脏最常见的恶性肿瘤，占全部恶性肿瘤的2%，且较易发生转移[1]。肾细胞癌早期常无症状，或只有发热、乏力等全身症状，肿瘤体积增大时才被发现。对于一些早期肾癌，可较早发现。临床主要表现为血尿、肾区痛和肿块。近年来随着肾细胞癌患者呈现新的临床病理特点和医学的发展，对于肾细胞癌的治疗，无远处转移的，可早期彻底手术切除，预后较好。若癌细胞侵入肾静脉或侵犯肾周围组织则预后差。因此肾癌患者治疗失败和死亡的主要原因仍是癌细胞的侵袭与转移。肾细胞癌除直接蔓延向邻近组织扩散外，还可通过血道和淋巴道转移。

AEG-1基因最初是在人类免疫缺陷病毒（HIV-1）感染的人胚胎初级星形细胞（PHFA）中发现的[1]。自2002年Su等[2]首次克隆AEG-1基因以来，该基因便引起了众多科研工作者的关注并逐渐成为肿瘤研究领域中新的热点。AEG-1基因全长3611bp，包含11个内含子和12个外显子，位于人体8号染色体。研究表明AEG-1基因的生物学功能为：（1）促进肿瘤血管的生成；（2）促进肿瘤增殖；（3）促进肿瘤的侵袭和转移；（4）增强肿瘤细胞对化疗药物的抵抗性。

AEG-1与多种恶性肿瘤的发生、发展、转移和侵袭密切相关。有研究表明AEG-1基因在肾脏组织中主要表达于肾小管上皮细胞[3-5]。

Sun等[6]的研究发现胆囊癌患者AEG-1为阳性的，其生存期短于AEG-1为阴性的患者，因此推断AEG-1可能与癌细胞的生长、发生、发展和转移有一定的关系，可将其作为胆囊癌预后判断的指标。但有关AEG-1与RCC临床病理特征的研究目前还不多见。关于AEG-1基因在肾脏中的表达的文献也较少。本研究结果表明AEG-1在RCC组织中的表达较高，其表达率为72.29%。

在正常的肾组织细胞中也有一定的表达，但与RCC组织中的表达相比，比较微弱，仅为20.00%（4/20），明显低于在RCC组织中的表达（P＜0.01）。通过AEG-1的表达与RCC的临床病理参数的关系的研究发现，AEG-1的表达与RCC患者性别、年龄差异无统计学意义（P＞0.05），但是与RCC的肿瘤大小、病理分型、组织学分级、临床分期及淋巴结转移有关（P＜0.05）。这一研究结果与Chen等[7]的研究结果相似。表明AEG-1与RCC发生、发展、侵袭和转移密切相关，AEG-1可能参与了肾细胞癌的发生发展，可以将其作为反映RCC生物学行为的指标，也可作为判定预后的指标[6-9]。

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[2]Su ZZ，Kang DC，Chen Y，et al.Identification and cloning of human astrocyte genes displaying elevated expression after infection with HIV-1 or exposure to HIV-1 envelope glycoprotein by rapid subtraction hybridization，RaSH[J].Oncogene，2002，21（22）：3592-3602.

[3]Yoo BK，Emdad L，Lee SG，et al.Astrocyte Elevated Gene-1（AEG-1）：a multifunctional regulator of normal and abnormal physiology[J].Pharmacol Ther，2011，130（1）：1-8.

[4]陈文芳.肾细胞癌中AEG-1的表达及其与侵袭和转移的关系研究[D].广州：中山大学，2010.

[5]赵明，滕晓东，孙柯，等.新近认识的肾细胞癌[J].中华病理学杂志，2013，42（7）：478-482.

[6]Sun W，Fan YZ，Xi H，et al.Astrocyte elevated gene-1 overexpression in human primary gallbladder carcinomas：An unfavorable and independent prognostic factor[J].Oncol Rep，2011，26（5）：1133-1142．

[7]Chen W，Ke Z，Shi H，et al.Overexpression of AEG-1 in renal cell carcinoma and its correlation with tumor nuclear grade and progression[J].Neoplasma，2010，57（6）：522-529.

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[9]吴栗洋，程浩，邓小虎，等.血管内皮生长抑制因子在散发性肾透明细胞癌细胞中的表达及意义[J].中华医学杂志，2013，93（10）：741-745.