HPLC法测定黄连单煎液中小檗碱的含量

徐丹丹

哈尔滨商业大学09级制药工程中外二班 150076

黄连为毛茛科的多年生草本植物，祖国中医常将其干燥根茎入药，性寒，味极苦，入心肝、肾、胃及大肠经，有显著清热燥湿与泻火解毒之功效，同时还具光谱抗生素、抗癌、抗放射以及促进细胞代谢的作用。特别是在近些年，黄连的药理及临床研究又表现有不同的突破与进展，其应用范围也在不断扩大［1］。然而在这些运用中急需出台相关标准以供综合评价其品质提供参考，基于此，笔者选择黄连单煎液作为本研究既定品种，并以其主要有效成分生物碱～小檗碱作为含量标准项［2］，采用HPLC法进行考察，现报道如下。

资料与方法

仪器:岛津LC～10A高效液相色谱仪，Sartorius分析天平，SPD－6AV紫外分光光度计，SB3200型超声溶解仪。

试药:小檗碱对照品由中国药品生物制品鉴定所提供，纯度99.9%;黄连单煎液为笔者在实习单位自制;甲醇与乙腈均为色谱纯，实验用水为重蒸馏水，其他试剂均为分析纯。

方法与结果

色谱条件:色谱柱:Kromasil C18 柱(200mm ×4.6mm，5μm);流动相:乙腈～0.05%磷酸二氢钾(35:65，以磷酸将PH调节到3.0);柱温:30℃;流速:1.0ml/min;检测波长:345nm(采用对照品溶液进行紫外分光光度检测，于345nm处有最大吸收峰);理论塔板数按小檗碱峰计算应不低于2800。对照品溶液制备:对照品溶液:精密称定小檗碱对照品5mg，以甲醇充分溶解后定容至5ml并摇匀，取此液1ml置于5ml量瓶，再次定容至刻度摇匀即得对照品溶液，其浓度约为0.2mg/ml。供试品溶液:精密量取自制黄连单煎液30ml并置于带塞的50ml锥形瓶中，加甲醇后超声半小时，再以甲醇定容至刻度后摇匀即得供试品溶液。阴性对照溶液:剔除黄连后以原方按供试品溶液的制备方法制的阴性对照溶液。取以上3种溶液各10μl分别在上述色谱条件下进样后检测发现，小檗碱峰能与阴性对照溶液的所有色谱峰分离良好，故可排除实验干扰，见图1。

表3 黄连单煎液含量测定稳定性试验

图1 黄连单煎液干扰性实验色谱图

线性实验:精密量取对照品溶液 1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml，分别于10ml量瓶中定容后各自取10μl进样，对浓度值(C)与峰面积(A)进行线性回归，结果显示小檗碱在20～100μg/ml的浓度范围内具良好线性关系，见表1。

表1 黄连单煎液含量测定线性试验

精密度试验:精密量取对照品溶液3.0ml，置于10ml量瓶中定容后分别取10μl连续进样5次，均测量各自峰面积并计算平均值与RSD，结果显示精密度试验结果良好，见表2。

表2 黄连单煎液含量测定精密度试验

稳定性试验:试验进样液与量同精密度试验，但进样时间分别选取在制得溶液后的0h，2h，6h，12h，24h等5个时间点，通过比较各时间点峰面积的变化情况及计算RSD，结果显示在24h内小檗碱含量是比较稳定的，见表3。

重复性试验:取同一次自制的黄连单煎液5份，并按供试品溶液的制备方法制得进样液，对每份单煎液样品进行含量的测定并就算RSD值，结果显示本方法具有良好的可重复性，见表4。

表4 黄连单煎液含量测定重复性试验

回收率试验:在重复性试验基础上，利用其溶液作为回收率试验试液，精密称取一定质量的小檗碱加入到在这些溶液当中后再同上法进样，测定出含量后进行回收率的计算，结果显示平均回收率为99.75%，回收率试验表现良好，见表5。

表5 黄连单煎液含量测定回收率试验

结 论

综上所述，黄连单煎液的主要成分为小檗碱生物碱，经以上试验可知采用本方法测定其含量精密可靠，且重复性好，提示可在此类黄连单煎液中将HPLC法作为其质量标准含量测定项下的理想方法。

1 吴佳.HPLC法测定不同产地黄连中小檗碱的含量［J］.长沙民政职业技术学院学报，2010，17(2):132 ～134.

2 国家药典委员会.中华人民共和国药典(二部)［M］.北京:化学工业出版社，2010.